肝癌细胞 siRNA转染.doc

肝癌细胞 siRNA转染 产品简介: DeofectEU Transfection Reagent是我们最新推出的生物可降解DNA转染试剂，适用于多种真核细胞的DNA转染我们使用的高分子材料形成的聚合物具有均一的大小和确定的形状，使转染结果具有高度的重复性DeofectEU Transfection Reagent携带DNA进入细胞后，可迅速释放DNA，并被快速降解，极大地降低了对细胞的毒性试剂-DNA复合物可以直接加入培养基中，血清和抗生素不影响其转染效果，转染前后都不需要更换培养基，操作十分简便DeofectEU真核细胞DNA转染试剂的特点：· 采用生物可降解材料，细胞毒性低；· 培养基可含或不含血清，可以用PBS或无血清培养基稀释质粒；· 结果重复性好，转染过程不需换液· 适用范围广，可用于多种真核细胞注意事项： · 因细胞密度随细胞系不同会有很大差别，且细胞密度直接决定转染效率，因此请在转染过程中尽量保持同样的接种比例，以提高转染重复性· 多数哺乳动物细胞应在37℃、5%CO2条件下培养其他的-些细胞系，例如昆虫细胞，需要在不同的温度和CO2浓度下进行培养。

请根据具体细胞系选择最适培养条件· 应避免包装反应体系中存在血清，因血清会干扰 DeofectEU 与DNA形成复合物 · 如果转染DNA量较大或者当复合物包装时反应体系中出现沉淀时,请将包装反应体系调整至1 ml进行储存: 本品应在4-8°C保存，有效期一年每次使用之前请先将本品上下颠倒混匀适用细胞系 293T，A549，B16F10，HEK 293，HeLa，Hepa 1-6，Hepa 1cLc7，HepG2，BHK-21，BNL.CL2，BRL-3A，C2C12，C6，CHO-K1，Clone 9，COS-1，COS-7，Daoy，DBTRG-05MG，DI-TNC1，DU 145，HLF-a，Huh-7，K562，KB，KLN 205，Lυ2 (LLC1)，NCaP-FGC，MCF-7，MEL，Neuro-2a，NIH3T3，OVCAR3， PC3，PC-12，等试剂盒内容物：DeofectEU Transfection Reagent试剂盒包装 货 号规 格价格（元）210110.5ml890210121.0ml1690方法步骤: 贴壁/悬浮细胞瞬时转染操作流程(以24孔板转染为例) A. 细胞接种: 1. 转染前24小时左右对细胞进行转接，接种密度约为每孔0.3~1×105个细胞； 2. 过夜培养。

B. DeofectEU /DNA复合物包装(该步完成后应立即转染): 1. 在1.5 ml无菌离心管中加入50µl无血清培养基，并添加适量的转染试剂(2~5µl/µg DNA，参见下表) 用移液器轻轻混匀后在室温静置5~10分钟 2. 在1.5 ml无菌离心管中加入50µl无血清培养基，并添加适量的DNA (0.8~1µgDNA/孔， 参见附表)用移液器轻轻混匀后在室温静置5~10分钟3. 将DeofectEU-培养基混合物滴加至DNA-培养基混合物中，用移液器轻轻混匀后在室温静置15~20分钟后，立即转染注意： DeofectEU-培养基混合物和DNA-培养基混合物的混合次序非常重要，切勿颠倒C.转染:注意：DeofectEU 在完全培养基中(基础培养基中添加血清)具有最高的转染效率，因此转染前后不需要换成无血清培养基1. 如特殊情况，可在转染开始之前更换新鲜的含血清培养基，以防转染后孵育阶段细胞密度太大、营养不足导致的细胞死亡2. 将步骤B制备的复合物滴加至培养基中轻轻晃动培养皿以使复合物均匀分布 3. 过夜培养24~48小时 4. 注意:如果转染后需要更换新鲜培养基，请于加入DeofectEU /DNA复合物12~24小时后进行。

培养基更换后，孵育24~48小时后再进行后续实验5. 收获细胞，进行后续实验Limited Use Label License The purchase of this product conveys to the purchaser the limited, non-transferable right to use the purchased amount of the product only to perform internal research for the sole benefit of the purchaser. No right to resell this product or any of its components is conveyed expressly, by implication, or by estoppel. This product is for internal research purposes only and is not for use in commercial applications of any kind, including, without limitation, quality control and commercial services such as reporting the results of purchaser’s activities for a fee or other form of consideration. For information on obtaining additional rights, contact czbdswkj@.附表：不同培养体系推荐初始转染条件培养皿96孔板48孔板24孔板12孔板6孔板10cm皿表面积 (cm2)0.351.01.93.89.659培养基、试剂、DNA量无血清培养基(μl)20501002004002000 DeofectEU (μl)0.412410601μg/μl plasmid (μl)0.20.512530全培养基(ml)0.100.250.501.02.010。