抗Ⅱ型胶原抗体的检测及其在类风湿关节炎.doc

抗Ⅱ型胶原抗体的检测及其在类风湿关节炎【摘　要】　目的　了解抗ⅱ型胶原抗体在类风湿关节炎(ra)中的临床意义方法　以改进的酶联免疫吸附法(elisa)检测179例ra患者" 和171例其他风湿病患者的血清igg型抗天然及抗变性ⅱ型胶原抗体水平结果　ra患者抗天然和抗变性ⅱ型胶原抗体阳性率各为22.3%和36.9%，早期ra患者各为30.0%和36.7%其他风湿病患者中各为3.5%和31.6%，健康人二者均为2.5%抗天然ⅱ型胶原抗体阳性ra患者类风湿因子检出率、患者对病情活动性评价高于阴性组(p0.05)抗变性ⅱ型胶原抗体和抗天然ⅱ型胶原抗体同时阳性ra患者的crp平均水平较高结论　抗天然ⅱ型胶原抗体可以作为ra的一个" 辅助诊断指标抗天然与抗变性ⅱ型胶原抗体的检测有助于判断ra病情活动性　　anti-type ⅱ collagen antibodies in rheumatoid arthritis　　liu shengyun,zeng qingyu,chen subiao　　(department of rheumatology,shantou university medical college,shantou 515031,china)　　【abstract】　objective　to investigate the clinical significance of anti-type-ⅱ-collagens antibody in rheumatoid arthritis (ra).method　serum igg antibodies to native and denatured type ⅱ collagens (anti-nc ⅱ and anti-dc ⅱ) were detected in 179 patients with ra by an improved enzyme linked immunosorbent assay (elisa),and their clinical significance was analysed with corresponding clinical materials.results　in ra,the positive rates of anti-nc ⅱ and anti-dc ⅱ were 22.3% and 36.9%;in early ra were 30.0% and 36.7%,respectively.in other rheumatic diseases the positive rates were 3.5% and 31.6%,respectively and were both 2.5% in healthy controls.anti-nc ⅱ positive ra showed higher prevalence rate of rf and higher scores of patient′s global assessment of disease activity (p0.05).the presence of anti-nc ⅱ and anti-dc ⅱ concomitantly was associated with high crp level in ra patients.conclusion　anti-nc ⅱ could serve as a supplemental parameter in diagnosing ra and together with anti-dc ⅱ may help evaluate the disease activity.　　【key words】　rheumatoid arthritis;　anti-type ⅱ collagen antibody;　enzyme-linked immunosorbent assay;　c-reactive protein　　抗ⅱ型胶原抗体(antibodies to type ⅱ collagen)与类风湿关节炎(ra)病情活动性、严重性的关系目前" 仍有争论。

本研究参照fujii等［1］提出的实验条件检测179例ra患者、171例其他风湿病和118名正常人血清的抗ⅱ型胶原抗体，探讨其在ra中的临床意义结果报告如下　　1　资料与方法　　1.1　一般资料　　1.1.1　病人组：为1994年9月至1999年3月在汕头大学医学院第一附属医院风湿科住院、门诊、随访的ra患者，共179例，全部符合1987年美国风湿病协会(ara)的ra分类标准［2］其中男性53例，女性126例，年龄17～76岁，平均46.3岁其中病程1年之内，x线未出现明显骨质破坏者(以下简称早期病例)30例　　1.1.2　对照组：共289例，分为" 两组：一组为同期在汕头大学医学院第一附属医院风湿科门诊或住院的非ra的其他风湿性疾病患者171例；另一组为正常对照组，共118名　　1.2　抗ⅱ型胶原抗体的体测　　参照fujii等［1］的方法　　1.2.1　微量反应板的包被及封闭：正常羊血清于62 ℃加热20 min，加入固体tris (0.05 mol/l)、nacl (0.15 mol/l)和2 mol/l hcl，调ph值至8备用(bngs)天然ⅱ型胶原在46 ℃水浴中加热20 min，即为变性胶原。

　　将天然ⅱ型和变性ⅱ型胶原分别溶解于0.05 mol/l的醋酸中，浓度为3 mg/ml0.02 mol/l磷酸缓冲液(pb) ph 7.6稀释胶原溶液，使浓度为40 μg/ml，加入微量反应板孔，每孔100 μl，保鲜膜覆盖，4 ℃过夜　　在与待检血清标本进行温育之前，包被好的微量反应板用含0.05%吐温－20的生理盐水溶液洗涤3次，然后每孔加入100 μl bngs，室温(24～28 ℃)下封闭30 min，洗涤液洗涤3次　　1.2.2　检测：bngs稀释待检及阳性对照、阴性对照血清，转入微量反应板的微孔中，设二孔平行，每孔100 μl，同时设空白对照室温温育2 h，生理盐水-吐温溶液洗涤3次含25%bngs的0.1 mol/l tbs ph 8.0溶液稀释辣根过氧化物酶标记的羊抗人igg，每反应孔加入100 μl，室温温育2 h，洗涤将联苯二胺和过氧化氢溶解于柠檬酸-磷酸缓冲液ph 5.0中，使各自浓度分别为0.05%和0.017%，加入反应孔，每孔100 μl，37 ℃温育30 min后每孔加入终止液1.25 mol/l硫酸50 μl终止反应，酶标分光光度计492 nm处测吸光度(a)值。

　　1.2.3　结果判断：以正常血清的平均a值加3个标准差作为正常值上限，待检血清a值超过者即被认为是阳性　　1.3　统计学处理　　计量资料数据采用t检验，计数资料数据采用χ2检验　　2　结果　　2.1　elisa工作浓度的选择：为便于比较，选择工作浓度时以天然ⅱ型胶原作为包被抗原，测定血清抗天然ⅱ型胶原抗体水平 。