生化实验实验三蛋白质颜色反应及沉淀反应.docx

实验三蛋白质颜色反应及沉淀反应一、目的1、掌握鉴定蛋白质的原理及方法2、熟悉蛋白质的沉淀反应3、进一步掌握蛋白质的有关性质二、原理蛋白质分子中的某种或某些基团与显色剂作用，可产生特定的颜色反应，不同蛋白质所含氨基酸种类不同，颜色反应亦不同颜色反应不是蛋白质的专一反应，一些非蛋白物质亦可产生相同的颜色反应，因此不能仅根据颜色反应的结果决定被测物质是否是蛋白质颜色反应是一些常用的蛋白质定量测定的依据多数蛋白质是亲水胶体，当其稳定性被破坏或与某些试剂结合成不溶解的盐后，即产生沉淀三、实验器材1、鸡蛋白2、试管3、吸管4、滴管5、水浴锅等四、实验试剂1、卵清蛋白液：将鸡蛋白用蒸馏水稀释20-40倍，2-3层纱布过滤，滤液冷藏备用2、 0.1%茚三酮溶液：0.1g茚三酮溶于95%乙醇并稀释至100ml3、 10%氢氧化钠溶液：10g氢氧化钠溶于蒸馏水并稀释至100ml4、浓硝酸：比重1.425、1%硫酸铜溶液：硫酸铜1g溶于蒸馏水，稀释至100ml6、饱和硫酸铵溶液：蒸馏水100ml加硫酸铵至饱和7、95%乙醇8、结晶氯化钠9、1%醋酸铅：1g醋酸铅溶于蒸馏水并稀释至100ml10、饱和苦味酸溶液。

11、1%醋酸溶液：冰醋酸1ml用蒸馏水稀释至100ml五、操作1、颜色反应：A、双缩月尿反应：蛋白质分子中含有肽键，与两分子尿素经过加热形成的双缩月尿的结构相似，能与硫酸铜结合成红紫色的络合物取一支试管，加蛋白质溶液10滴，再加10%NaOH溶液10滴及1%CuSO4溶液2滴，混匀，观察是否出现紫玫瑰色B、黄色反应：蛋白质分子中含有苯环结构的氨基酸遇硝酸可硝化成黄色物质，此物质在碱性环境中变为橘黄色的硝苯衍生物于一试管中加蛋白质溶液10滴及浓硝酸3-4滴，加热，冷却后再加10%NaOH溶液5滴，观察颜色变化C、苛三酮反应：蛋白质与苗三酮共热，则产生蓝紫色的还原苛三酮、苛三酮和氨的缩合物此反应为一切蛋白质及笫氨基酸所共有含有氨基的其他物质亦呈此反应取1ml蛋白质溶液置于试管中，加2滴苛三酮试剂，加热至沸，即有蓝紫色出现2、沉淀反应：A、蛋白质盐析作用：向蛋白质溶液中加入中性盐至一定浓度，蛋白质即沉淀析出，这种作用称为盐析取蛋白质溶液5ml,加入等量饱和硫酸钱溶液（此时硫酸钱溶液的浓度为50%饱和），微微摇动试管，使溶液混合静置数分钟，球蛋白析出（如无沉淀可再加少许饱和硫酸俊）B、乙醇沉淀蛋白质：乙醇为脱水剂，能破坏蛋白质胶体质点的水化层而使其沉淀析出。

取蛋白质溶液1ml,加晶体NaCl少许（加速沉淀并使沉淀完全），待溶解后再加入95%乙醇2ml混匀观察有无沉淀析出C、重金属盐沉淀蛋白质：蛋白质与中金属离子结合成不溶性盐类而沉淀取试管2支各加蛋白质溶液2ml,一管内滴加1%醋酸铅溶液，另一管内滴加1%CuSO4溶液至有沉淀生成D、生物碱试剂沉淀蛋白质：植物体内具有显著生理作用的含氮碱性化合物称为生物碱（或植物碱）能沉淀生物碱或与其产生颜色反应的物质称为生物碱试剂，如糅酸、苦味酸、磷鸨酸等生物碱试剂能和蛋白质结合生成沉淀，可能因蛋白质和生物碱含有相似的含氮基团之故于1支试管中加2ml蛋白质溶液及1%醋酸溶液4-5滴，再加饱和苦味酸溶液数滴，观察结果六、实验结果记录1、颜色反应结果项目结果（颜色）双缩月尿反应黄色反应前二酮反应2、沉淀反应结果项目结果（是否有沉淀产生）盐析作用乙醇沉淀作用重金属盐沉淀作用生物碱试剂沉淀作用七、思考题1、简述苗三酮与蛋白质进行颜色反应的原理2、维持蛋白质胶体溶液稳定性的因素有哪些？乙醇、重金属盐及生物碱试剂破坏蛋白质胶体溶液稳定性的机理是什么？。