中国药科大学分析化学课件第18经典液相色谱法.ppt

第十八章 经典液相色谱法,第一节 概述 液相色谱法：以液体为流动相的色谱法称～经典液相色谱：固定相颗粒较大且不均匀 常压下输送流动相 柱效较低 分析周期长 现代液相色谱：固定相颗粒小且均匀 高压下输送流动相 柱效较高 分析周期短,第二节 液-固吸附柱色谱,（一）分离原理 （二）常用吸附剂 （三）吸附剂和流动相的选择,,（一）分离原理 各组分与流动相分子争夺吸附剂表面活性中心 利用吸附剂表面的活性吸附中心对不同组分的 吸附能力差异而实现分离,（二）常用吸附剂：多孔、微粒状物质 1. 硅胶 2. 氧化铝 3. 聚酰胺,,1. 硅胶（SiO2·H2O）,结构：内部——硅氧交联结构→多孔结构 表面——有硅醇基→氢键作用→吸附活性中心 表面硅醇基存在形式：,吸附活性的大小顺序是：Ⅲ＞Ⅰ＞Ⅱ,游离羟基Ⅰ 束缚形Ⅱ 活泼形Ⅲ,适用：分析酸性或中性物质,硅胶吸附特性：,1）与极性物质或不饱和化合物形成氢键 物质极性↑，吸附能力↑，k ↑，tR ↑ 强极性吸附中心，不易洗脱 2）吸水→失活 →105～110OC烘干30分钟(可逆失水)→吸附力最大 →500OC烘干(不可逆失水)→活性丧失，无吸附力,表18-1 硅胶和氧化铝的含水量与活性的关系,续前,4. 三者关系图示： 组分 吸附剂 流动相 极性 活性小 极性 非(弱)极性 活性大 非极性或弱极性,,第三节、薄层色谱法,（一）概述 （二）定性参数 （三）吸附剂的选择 （四）展开剂的选择 （五）薄层板的制备 （六）定性与定量分析,,（一）概述,1．定义：将固定相均匀涂布在表面光滑的平板上， 形成薄层而进行色谱分离和分析的方法 2．操作过程：见图示 铺板 →活化 →点样 → 展开 →定位(定性)/洗脱(定量),3．分离机制：吸附（分配，离子交换，空间排阻） 4．特点：分析快速、灵敏、显色方便 5．应用：药物杂质检查、纯度测定 next,图示,,,,图示,L0,,L1,L2,（二）定性参数,1. 比移值Rf,,续前,讨论 Rf与K有关，即与组分性质（溶解度）以及薄层板 和展开剂的性质有关 色谱条件一定，Rf只与组分性质有关，是薄层色谱基本定性参数，说明组分的色谱保留行为,,续前,,1）K↑大，Rf↓小 2）薄层板一定，对于极性组分 展开剂极性↑大，Rf↑大（容易洗脱） 展开剂极性↓小，Rf↓小 （不容易洗脱） 3）Rf范围：0 Rf 1 （组分迁移速度和距离小于展开剂迁移速度和距离） Rf = 0.2——0.8（常用） 0.3——0.5（最佳）,续前,2. 相对比移值Rs,讨论 参考物与被测组分在完全相同条件下展开 可以消除系统误差，大大提高重现性和可靠性； 参考物可以是后加入纯物质，也可是样品中已知组分 相对比移值Rs与组分、参考物性质及色谱条件有关，范围可以大于或小于1,3.影响比移值的因素,1）被分离物质的结构和性质 2）薄层板的性质 3）展开剂的极性 4）温度 5）展开槽内的展开剂蒸气饱和程度,（三）分离参数,分离度（R） 两相邻斑点中心距离与两斑点平均宽度（直径）的比值成为分离度 R=2d/(W1+W2),（三）吸附剂的选择 根据被测物极性和吸附剂的吸附能力 被测物极性强——弱极性吸附剂 被测物极性弱——强极性吸附剂,（四）展开剂的选择（同液固吸附色谱流动相的选择） 根据被测组分、吸附剂和展开剂本身的极性,,（五）薄层板的制备,定性分析——窄条 定量分析——10×20cm,（六）点样和展开 （七） 定性与定量分析 定性分析——日光，紫外光，显色 定量分析——洗脱法，薄层扫描法,第四节 纸色谱法,将固定相放在纸上，以纸做载体进行点样、展开、 定性、和定量的液-液分配色谱法,固定相：纸纤维吸附的水 流动相：与水不互溶的有机溶剂（饱和正丁醇） 分离机制：同液-液分配色谱 定性参数：,讨论：Rf与组分性质、流动相及溶解度有关 极性组分→易保留，Rf 小（流动相极性↑， Rf ↑） 非极性组分→易流出，Rf大（流动相极性↑，Rf ↓）,第五节 离子交换柱色谱,一 离子交换树脂 1 阳离子交换树脂 2 阴离子交换树脂 二 离子交换树脂的性能 1 交联度（degree of cross linking） 2 交换容量(exchange capacity) 三 离子交换色谱法的分离原理,。