急性肾功能不全.docx

急性肾功能不全周晓泉浙江中医药大学09临床1班，20091090128【实验目的】学习用氯化汞复制急性中毒性肾功能不全的动物模型观察急性肾功能不全时动物尿蛋 白、血肌酐、尿肌酐、肾酚红排泄率的变化以及肾脏的形态改变，分析和讨论其致病因素及 发生机制实验原理】采用肾毒物重金属HgCl2溶液造成家兔急性肾小管坏死，复制急性肾功能不全的动物模 型，通过观察动物的尿蛋白、血肌酐、尿肌酐、肾酚红排泄率的变化以及肾脏的形态改变， 学习急性肾衰时内环境的变化1材料家兔；分光光度计，光学显微镜，离心机，恒温水浴箱；1%HgCl2溶液，氨基甲酸乙酯溶液， 生理盐水，酚红，NaOH，醋酸，碱性苦味酸，肌酐标准应用液，葡萄糖；兔台，手术器械， 1ml和5ml注射器，试管，滴管，漏斗，吸管，试管夹，酒精灯，试管架，颈动脉插管2方法2.1急性肾功能不全模型复制 取家兔两只，于实验前一天称重后，一只为正常对照组， 一只为中毒实验组实验兔皮下或肌肉注射1 %HgCl2 （按0.8〜1.0ml/kg），造成急性肾功 能不全模型；对照兔则在相同部位注射同量的生理盐水，作为对照2.2麻醉固定 用200g/L的氨基甲酸乙酯按5ml/kg体重剂量给家兔耳缘静脉注射麻醉， 将家兔仰卧位固定于固定架上。

2.3心脏采血 先用手摸到第2,3肋间，心脏活动最为活跃处，垂直进针，有落空感，缓 慢抽取血液约2ml于干燥试管中，作血肌酐检查2.4采集尿液 下腹部剪毛，从耻骨联合向上沿中线作约4cmd切口，沿腹白线打开腹腔， 暴露膀胱，用注射器抽取膀胱内尿液2ml于干燥试管中，作尿肌酐、尿常规检查2.5输尿管插管 在膀胱底部仔细分离两侧输尿管用出线结扎近膀胱处的两侧输尿管， 以阻断尿流，结扎固定将两侧导尿管外端用线扎在一起，用于收集尿液手术完毕后，用 温热的生理盐水纱布覆盖腹部的创伤2.6实验观察2.6. 1血清和尿肌酐含量测定将各组装有血液的试管放入离心机内，静置10min后， 3000r/min离心15min离心完毕后，小心吸取血清置于另一干净试管中，测血肌酐用去 硬质试管3支编号，分别为空白管、标准管及测定管按表1加样，混匀，37°C水浴30min， 用分光光度计一波长510nm，空白管调零，读OD值然后加50%乙酸溶液两滴，放置6min 后，再测OD'值按（1）式计算血清肌酐（［Cr］）：表1血清肌醉测定单位/ml标准管测定管空白管肌酐标准应用液/ （0.05mg/ml） ul0.2 血清 0.2 蒸馏水 0.2碱性苦味酸0.20.20.2［Cr］p （mg%） = （OD测—OD'测）/ （OD标—OD'标）X0.01/0.2X100 （1）按表2加样，混匀，放10mi；后加蒸馏水6.0ml，摇匀，用分光光度计以波长530nm，空白管调零，读OD值。

按（2）式计算尿肌酐（［Cr］）:表2尿肌酢测定单位/ml标准管测定管空白管尿液0.1肌酎标准应用液/ (0.05mg/ml) ul0.1蒸馏水0.1碱性苦味酸0.20.20.2125g/L Na0H0.50.50.5[Cr] (mg%)=OD q X0.05mg X 100ml/0.1ml (2)2.6. 2酚红排泄测式验① 从耳缘静脉快速注入1ml/kg酚红并计时，再从耳缘静脉缓慢注入30ml/kg葡萄糖溶液② 记入30min分钟尿量，并算出每分钟尿量③ 将30min内尿液移入500ml的量筒内，加入10%Na0H10ml,使之显色加自来水至500ml, 搅拌均匀④ 从量筒中吸出尿液置于比色皿中用分光光度计以530波长分别测定酚红标准液及尿液的 吸光度，按下式求出酚红的排泄率或排出量：酚红排泄率=0D /0D X0.5X100% 酚红排出量(mg) = 0D /0D X0.6X0.5X0.52.6.3肾形态学观察标夹住家兔的气管处死家兔，解剖取出肾脏，徐重，标计算肾脏与体重之 比比较两组家兔肾脏外形、质地，纵向剖开肾脏，观察肾切面包膜、皮髓质分界、皮髓质 条纹、色泽等3结果对照组肾脏外形饱满，质地柔软，肾切面包膜光滑，皮髓质分界清楚，皮髓质条纹明显，整 体色泽明亮；而实验组肾脏外观有小颗粒显现，触摸弹性小，肾切面包膜粗糙，皮质增厚， 皮髓质条纹模糊，整体色泽暗淡。

急性肾功能不全对家兔血气指标的影响实验组血肌酎尿肌酎酚红代谢率肾比重19.53.85小于5%0.0106210.6253.4小于5%0.007935.8335.35小于5%0.01247.93小于5%0.0083x ±8.4645±2.0803423.9±1.07132小于5%0.0097±0.991941对照组血肌酎尿肌酎酚红代谢率肾比重51.1213.6545%0.0069264.7736.3545%0.012970.03810.26550%0.00723830.950%0.00827x ±2.232775±0.0055185.29125±6.2058020.475±0.0288680.00883±0.002774P值0.0055180.6867360.627742实验总结果分组血肌酎尿肌酎酚红代谢率肾比重实验组8.46+2.083.90+1.03小于5%0.0097+0.0019对照组2.23+2.085.29+6.21大于45%0.0088+0.0028实验组与对照组相比，尿肌酐/血肌酐值降低，酚红排泄率下降，肾比重减小，皮髓质分界 不清，颜色苍白4讨论肾功能不全是当各种病因引起肾功能严重障碍时，会出现多种代谢产物、药物和毒物在 体内蓄积，水、电解质和酸碱平衡紊乱，以及肾脏内分泌功能障碍的临床表现。

引起急性肾 功能不全的主要原因有肾前性、肾性和肾后性三种氯化汞是重金属盐，肌肉注射10g/L氯化汞可引起以肾小管坏死为主的急性肾功能不 全肾中毒可直接损害肾小管上皮细胞，其病变均匀分布，以近端小管为主坏死的肾小管 上皮细胞及脱落上皮细胞和微绒毛碎屑、细胞管型或血红蛋白、肌红蛋白等阻塞肾小管，使 原尿不易通过，引起少尿同时，管腔内压升高，继而使肾小球囊内压力升高，当后者压力 与胶体渗透压之和接近或等于肾小球毛细管内压时，遂引起肾小球滤过停止有效滤过压降 低，导致肾小球滤过率下降，近曲小管重吸收水钠减少，致密斑分泌肾素，激活肾素-血管 紧张素系统，促进水钠潴留且毛细血管内皮损伤、肿胀，致滤过膜通透性降低也引起肾小 球率过滤下降在肾毒物作用下，肾小管上皮细胞变性、坏死、脱落，原尿可经受损肾小管壁出返漏入 周围肾间质，除可直接造成尿量减少外，还引起肾间质水肿，压迫肾小管，造成囊内压升高， 使GFR减少，出现少尿由于肾小球滤过率降低引起少尿或无尿，致使排出氮质和其他代谢 废物减少，血浆肌酐和尿素不氮升高，其升高速度与体内蛋白分解状态有关内生肌酐清除率与尿肌酐成正比关系而与血肌酐成反比关系 在尿量固定的情况下，尿肌酐越高，血肌酐越低，肌酐清除率就越高。

急性肾功能不全时由于肾小球滤 过功能降低使得血肌酐难以排出而增多，尿肌酐难以生成而减少，使得内生肌酐清除 率大大下降，内生肌酐清除率是衡量肾功能不全的良好指标注射大量的葡萄糖溶液是为了造成渗透性利尿，利于排除酚红酚红是一种对人体无害 的红色染料，经静脉注射后，大部分与血浆蛋白结合，除20%为肝脏清除，经胆道排出外， 其余则由肾脏排出在肾脏的排泌过程中，94%由近曲小管上皮细胞主动排泌，小部分不与 白蛋白结合者可从肾小球滤过，尿中排出4%左右，2%通胆汁到大肠由粪便排出，因为酚红 大部分通过近曲小管分泌、排出，所以其尿中排出量，可作为判断近曲小管排泌功能的指标 氯化汞中毒导致肾小管上皮细胞损伤，尿量减少，酚红排泄率降低5结论氯化汞中毒导致的急性肾功能不全时，家兔尿肌酐/血肌酐＜1，酚红排泄率降低； 肾脏的主要病理改变为肾脏肿大、颜色苍白、重量增加；切面皮质苍白、髓质呈暗红色6参考文献[1] .金惠铭 王建枝.缺氧.病理生理学.第7版.人民卫生出版社2010.70〜73[2] .朱大年.呼吸.生理学.北京：人民卫生出版社，2008.160〜162[3] .陆源、林国华、杨午鸣.机能学实验教程.第2版.北京:科学出版社.2010.160〜162。