考马斯亮蓝法实验报告考马斯亮蓝法实验报告精选八篇.docx

    考马斯亮蓝法实验报告考马斯亮蓝法实验报告精选八篇    篇一 ：实验七 考马斯亮蓝G250法测定的蛋白质含量实验七 考马斯亮蓝G250法测定的蛋白质含量一、试验目的1. 学习分光光度计的原理及操作2. 学习利用染色方法提高蛋白质消光系数，以提高分光光度法检测灵敏度二、基本原理1. 根据物质的吸收光谱进行定性或定量分析的方法称为吸收光谱法或分光光度法 该法所用的仪器称为分光光度计或吸收光谱仪该法所使用的光谱范围包括可见光和紫外光，即包括波长在200 - 800 nm之间的光2. 分光光度计灵敏度高，测定速度快，应用范围广，其中的紫外/可见分光光度技术更是生物化学研究工作中必不可少的基本手段之一3.紫外区可分为紫外（近紫外）和真空紫外（远紫外）由于吸收池（又称样品池、比色杯等）和光学元件以及氧气能吸收小于190nm波长的光，因此常规紫外测定集中在近紫外区，即 200nm-400nm可见光区为400nm -800nm4.考马斯亮蓝G250法原理：考马斯亮蓝G250与蛋白质结合后，其最大吸收波长从465nm改变为595nm,该蛋白－染料复合物吸光系数很高，所以检测灵敏度很高，可以测定1μg /mL的蛋白质，染料和蛋白结合只需要2分钟，颜色在1小时内稳定。

操作简便，快速，是常用的蛋白含量测定方法之一去污剂，粘多糖等严重干扰该方法的测定三、试剂1. 标准蛋白质溶液：0.5mg/ml牛血清白蛋白溶液2. 考马斯亮蓝G250蛋白染色剂：四、操作步骤1.标准曲线的绘制：取6只试管，分别加入浓度为0，0.1，0.2，0.3，0.4，0.5mg/ml的标准蛋白质溶液0.1ml，然后加入5ml考马斯亮蓝试剂，震荡混匀，2分钟后于595nm测定吸光值，以蛋白质浓度为横坐标，光吸收值为纵坐标绘制标准曲线2.样品测定：样品液0.1mL , 然后加入5ml考马斯亮蓝试剂，震荡混匀，2分钟后于595nm测定吸光值从标准曲线中查出相应的浓度…… …… 篇二 ：考马斯亮蓝法测定(实验报告)考马斯亮蓝法测定苹果组织微量可溶性蛋白含量摘要本实验以苹果果肉为研究对象，采取考马斯亮蓝比色法测定蛋白质的吸光度值，通过对果实可溶性蛋白提取缓冲液、缓冲液浓度、pH值、外源添加物对果肉可溶性蛋白提取效率的影响的研究，优化苹果果实可溶性蛋白含量测定方法，以期优化果实可溶性蛋白测定条件，为客观反映果实可溶性蛋白水平提供一种可行的方法结果表明：外源添加PVP和EDTA以是苹果可溶性蛋白提取率的主要影响因素。

实验最终确定的提取条件为0.1mol/L pH9.0 Tris-HCl提取缓冲液(内含1mmol/L EDTA和1% PVP)前言果蔬可溶性蛋白质含量(soluble protein content)是一个重要的生理生化指标，也是果蔬品质和营养的重要评价指标之一许多可溶性蛋白是构成果蔬中酶的重要组成部分，参与果蔬多种生理生化代谢过程的调控，与果蔬的生长发育、成熟衰老，抗病性、抗逆性密切相关以比活力(unit/mg protein)表示酶活力大小及酶制剂纯度时，可溶性蛋白的测定也是必不可少的1实验部分1.1实验原理比活力(unit/mg protein)表示酶活力大小及酶制剂纯度，同时采用考马斯亮蓝法测定蛋白质相结合，得到标准曲线考马斯亮蓝G-250在酸性游离状态下呈棕红色，最大光吸收在465nm，当它与蛋白质结合后变为蓝色，最大光吸收在595nm 在一定的蛋白质浓度范围内，蛋白质-染料复合物在波长为595nm处的光吸收与蛋白质含量成正比，通过测定595nm处光吸收的增加量可知与其结合蛋白质的量该方法标本用量少、灵敏度高、重复性好，是一种较为理想的方法[7]但该方法线性范围窄，需要选择适宜的提取缓冲液及缓冲液浓度、pH值、料液比和外源添加物等，以使测定方法有较高的灵敏度，测定值与真值相近。

1.2实验准备1.2.1实验材料…… …… 篇三 ：蛋白质浓度测定——考马斯亮蓝染色法(实验报告)生物化学实验报告——蛋白质浓度测定:考马斯亮蓝染色法蛋白质浓度测定——考马斯亮蓝染色法（实验报告）实验日期：年月日 实验温度：室温 实验地点：生物化学与遗传学实验室 指导老师：***班级：2013级生物技术1班 姓名：** 学号：******** I. 实验目的1.学习考马斯亮蓝法测定蛋白质浓度的原理和方法；2.熟悉蛋白质含量测定的影响因素II. 实验原理考马斯亮蓝是根据蛋白质与染料相结合的原理设计的，这是一种迅速、可靠的通过染色法测定溶液中蛋白质浓度的方法考马斯亮蓝G-250在酸性游离状态下呈棕红色，最大吸收波长465nm，与蛋白质结合后变为蓝色，最大吸收波长595nm，在一定的蛋白质浓度范围内吸光度与蛋白质含量成正比蛋白质与考马斯亮蓝G-250结合，反应2min即可到达平衡，复合物在室温下1h内保持稳定蛋白质—考马斯亮蓝G-250复合物吸光系数，使得在测定蛋白质浓度时灵敏度很高，可测微克级蛋白质含量III. 实验试剂与仪器1.实验试剂- 1 -生物化学实验报告——蛋白质浓度测定:考马斯亮蓝染色法(1) 100μg/mL标准蛋白质溶液 5mg酪蛋白溶于50mL的0.1mol/L氢氧化钠溶液 。

2)考马斯亮蓝G-250试剂 50mg考马斯亮蓝G-250溶于25mL的95%乙醇中，加85%的磷酸50mL，蒸馏水定容至500mL3)正常人血浆 2.实验器材可见分光光度计，100μL 微量移液器16支，5mL刻度吸管8支，中试管 IV. 实验操作步骤1.绘制标准曲线 取中试管8支，按下表加入各种试剂 混匀，室温放置5min后即可比色以“0”号管为空白，记录于下表，绘制标准曲线标准曲线绘制数据表- 2 -生物化学实验报告——蛋白质浓度测定:考马斯亮蓝染色法…… …… 篇四 ：实验考马斯亮蓝测蛋白质含量实验7 考马斯亮蓝考G-250染色法测定蛋白质含量一、目的1、学习一种蛋白质染色测定的方法2、掌握考马斯亮蓝法测定蛋白质含量的基本原理和方法二、原理蛋白质的存在影响酸碱滴定中所用某些指示剂的颜色变化，从而改变这些染料的光吸收在些基础上发展了蛋白质染色测定方法涉及的指示剂有甲基橙、考马斯亮蓝、溴甲酚绿和溴甲酚紫目前广泛使用的染料是考马斯亮蓝考马斯亮蓝G-250在酸性溶液中为棕红色，其所含疏水基团在酸性条件下与蛋白质的疏水区具有亲和力，通过疏水作用与蛋白质相结合，形成蓝色的蛋白质染料复合物，在595nm处有最大吸光度，在一定的蛋白质浓度范围内，蛋白质染料符合物在595nm处的吸光度与蛋白质杭亮成正比，因此可用于蛋白质含量测定。

反应2—5分钟即呈最大光吸收，至少稳定1小时在0.01—1.0 mg蛋白质/ml范围内均可该法操作简便迅速，消耗样品量少，但不同蛋白质之间差异大，且标准曲线线性差高浓度的Tris、EDTA、尿素、甘油、蔗糖、丙酮、硫酸铵和去污剂时测定有干扰缓冲液浓度过高时，改变测定液pH值会影响显色考马斯亮蓝染色能力强，比色杯不洗干净会影响光吸收值，不可用石英怀测定三、材料、试剂与器具（一）试剂1、染色液：取考马斯亮蓝G-250 100mg溶于50ml 95%乙醇中，加100ml 85%磷酸，加水稀释至1升棕色瓶保存，该染色液可保存数月，若不加水可长期保存，用前稀释2、标准蛋白溶液：0.5mg/ml牛血清白蛋白3、未知浓度的蛋白质溶液用酪蛋白配制，浓度控制在10—30mg/ml（二）器具1、试管及试管架2、移液管（1ml,5ml）3、可见光分光光度计四、操作步骤（一）标准曲线的制作3、用分光光度计比色测定吸光值A595nm4、以A595nm为纵坐标，标准蛋白色质浓度为横坐标，绘制标准曲线…… …… 篇五 ：实验 考马斯亮蓝法测定蛋白质含量实验五 考马斯亮蓝法测定蛋白质含量一、实验目的1. 掌握考马斯亮蓝染色法定量测定蛋白质含量的原理与方法2. 熟练分光光度计的使用和操作方法。

二、实验原理考马斯亮蓝G250测定蛋白质含量属于染料结合法的一种，它与蛋白质的疏水微区相结合，这种结合具有高敏感性它在酸性溶液中呈棕红色，最大光吸收峰在465nm，当它与蛋白质结合形成复合物时，其最大吸收峰改变为595nm考马斯亮蓝G-250—蛋白质复合物呈蓝色，在一定范围内，595nm下光密度与蛋白质含量呈线性关系，故可以用于蛋白质含量的测定 考马斯亮蓝结合法是近年来发展起来的蛋白质定量测定法，本方法具有操作方便、快速、干扰因素少的特点离心机的使用说明： 1.要离心的离心管和管套要称重，重量不等时将水加在管套里 2．离心管的放置是对角线放置，要求必须对称 3. 先将离心机转速旋钮恢复到零刻度后，再定时间，定好时间后缓慢旋转转速旋钮，使离心机均匀的提速到预定转速分光光度计的使用说明： 1.接通电源开关，预热20min后，再选择须用的单色光波长 2.放入已加入溶液的比色皿，盖上样品室盖，推动试样架拉手，使对照比色皿（溶液装入4／5高度，置第一格）置于光路上，调节100％透射比按钮，使吸光度值A=0.00 3.推动试样架拉手，使样品比色皿置于光路上，读出吸光度值 4.测量完毕，取出比色皿，洗净后置于乙醇溶液中浸泡脱色。

5.电源开关置于“关”，拔下电源插头三、试剂与器材：1. 试剂：（1）0.9％NaCl：9g NaCl溶解在1L的容量瓶中2）标准蛋白质：称取50mg结晶牛血清蛋白定溶于50ml容量瓶里3）染液：考马斯亮蓝G-250 0.5g，溶于250mL95%乙醇，再加入500mL85％(W／V)磷酸，保存于棕色瓶中，称为母液取150 mL然后加蒸馏水定容到1000mL，保存于棕色瓶中，备用…… …… 篇六 ：实验7 考马斯亮蓝G-250染色法实验7 考马斯亮蓝G-250染色法测定蛋白质含量一、目的1、学习一种蛋白质染色测定的方法2、掌握考马斯亮蓝法测定蛋白质含量的基本原理和方法二、原理蛋白质的存在影响酸碱滴定中所用某些指示剂的颜色变化，从而改变这些染料的光吸收在些基础上发展了蛋白质染色测定方法涉及的指示剂有甲基橙、考马斯亮蓝、溴甲酚绿和溴甲酚紫目前广泛使用的染料是考马斯亮蓝考马斯亮蓝G-250在酸性溶液中为棕红色，当它与蛋白质通过范德华键结合后，变为蓝色，且在蛋白质一定浓度范围内符合比尔定律，可在595nm处比色测定2—5分钟即呈最大光吸收，至少稳定1小时在0.01—1.0 mg蛋白质/ml范围内均可。

该法操作简便迅速，消耗样品量少，但不同蛋白质之间差异大，且标准曲线线性差高浓度的Tris、EDTA、尿素、甘油、蔗糖、丙酮、硫酸铵和去污剂时测定有干扰缓冲液浓度过高时，改变测定液pH值会影响显色考马斯亮蓝染色能力强，比色杯不洗干净会影响光吸收值，不可用石英怀测定三、材料、试剂与器具（一）试剂1、染色液：取考马斯亮蓝G-250 100mg溶于50ml 95%乙醇中，加100ml 85%磷酸，加水稀释至1升该染色液可保存数月，若不加水可长期保存，用前稀释2、标准蛋白溶液：0.5mg/ml牛血清白蛋白3、未知浓度的蛋白质溶液用酪蛋白配制，浓度控制在10—30mg/ml（二）器具1、试管及试管架2、移液管（1ml,5ml）3、可见光分光光度计四、操作步骤（一）标准曲线的制作1、取7支试管，按下表加入试剂2、将试管摇匀，放置20分钟3、用分光光度计比色测定吸光值。