[精品]心肌细胞内游离钙的检测 取Petri皿进行心肌细胞培养.doc

建屯离体心脏langendorff缺血再灌注损伤模型处理离体心肌.提取离体心肌组织U差速离心分离提取心肌线粒体Nycodenz密度梯度肉心纯化心肌线粒体2-D电泳MALDI—TOF—MS初步味定蛋【I质研处心肌细胞内游离钙的检测 取Petri皿进行心肌细胞培养，分组处理后，加入终 浓度为8gM的Fluo-3/AM, 37C避光孵育45min, PBS液洗涤2次，采用单盲法 行激光共聚焦显微镜检测细胞内游离钙的荧光强度每组选择八个不同视野扫描 细胞图像，利用分析软件选择30个细胞分析细胞内游离钙的平均荧光强度台盼蓝染色细胞存活率检测试剂盒产品编号：AR1175Lot : 06I20B75规格:100次价格：80元组成：台盼蓝染色液(2X) 10ml细胞稀释液 100ml保存条件：49保存，一年有效产品简介:作为细胞染色剂之一的台盼蓝(TrypanBlue)已被证明受到活体细胞的排斥，而死亡细胞摄入 染料显示蓝色通过常用的光学显微镜可以观察到细胞染色情况，同时可以定量计数，但是该染色无 法定性区别自杀细胞还是坏死细胞博士德生产的台盼蓝染色细胞存活率检测试剂盒(Typan Blue Staining Cell Viability AssayKit),是利用正常的健康细胞能够排斥台盼蓝，而丧失细胞膜完整性的细胞可以被台盼蓝染色。

通常认为细胞膜丧失完整性，即可认为细胞已经死亡台盼蓝染色后，通过显微镜下直接计数或显微镜下拍照后计数，就可以对细胞存活率进行比较 精确的定量注意事项1. 本产品为100次操作2. 建议待测细胞样品最好为每毫升1 X 106细胞浓度左右3. 避免台盼蓝染色时间过长，否则由于其毒性导致细胞死亡4. 本产品可直接染色生长中的贴壁细胞5. 细胞计数时乘上稀释倍数104标准血细胞计数器(Hemocytometer)的计算方法是：1毫米方块的细胞计数X 104 (稀释倍数〉=实际细胞数/毫升使用说明：1. 收集细胞：对于贴壁细胞先用胰酶和/或EDTA消化下细胞；对于悬浮细胞，则可以直接收集细胞把收集的细胞在1000-2000g离心1分钟，弃上清；收集细胞悬液，用细胞稀释液适当稀释；或离心弃上清，估测细胞数量，向沉淀中适量加入细胞稀释液，吹打重悬细胞2. 台盼蓝染色:吸取100微升细胞悬液到EP管内，加入100微升台盼蓝染色液（2X）,轻轻吹打混匀，3-5分钟（染色时间不宜过长）后滴板计数3. 细胞存活率分析吸取适量加有台盼蓝染色液的细胞悬液，滴加血细胞计数板计数于大方格内分别计数细胞总数 和蓝染细胞数。

细胞存活率=（细胞总数一蓝色细胞数）/细胞总数X100%o。