实验理论讲授-小鼠骨髓染色体的制片与观察.ppt

JLU小鼠骨髓染色体的制片与观察核型分析*v核型（karyotype）是指染色体组在有丝分裂中期的表型，是染色体数目、大小、形态特征的总和v核型具有明显的种属特异性v血淋巴细胞是动物和人的核型分析最常用的素材v三个关键技术：低渗处理，秋水仙素处理，植物凝集素（PHA）处理骨髓细胞染色体制片的意义v动物骨髓中的造血干细胞是各种血细胞的来源，具有很强的分裂能力且便于获取，是动物染色体核型分析的理想材料v与血淋巴细胞相比，造血干细胞具有分裂旺盛的优势，无需PHA处理即可用于核型分析实验目的v掌握动物骨髓细胞染色体制片技术v观察小鼠中期染色体的形态特征并对染色体计数实验材料及流程 *v小鼠 2n=40v秋水仙素处理-收集骨髓细胞-低渗处理-固定-滴片-染色-水洗-镜检1 秋水仙素处理 *v原理：秋水仙素能够抑制纺锤丝形成，使中期姐妹染色单体无法分离，大量的有丝分裂细胞被阻断在中期增加了中期分裂相细胞的比例v方法：腹腔注射0.01%秋水仙素溶液 0.5ml 等待2-4h，秋水仙素通过肠系膜吸收进入血液循环2 收集骨髓细胞 *v收集股骨和胫骨内 的骨髓细胞2 收集骨髓细胞 *v用生理盐水（0.85% NaCl溶液）收集骨髓细胞v目的：维持等渗环境，保持细胞自然形态。

3 低渗处理 *v目的：营造低渗环境，使细胞内张力增大，细胞更容易破裂，染色体更分散v低渗液配方：0.075M KCl溶液（0.56%）盐浓度与渗透压 *4 固定v目的：终止细胞生长过程及一切生理生化反应，维持细胞结构不变v固定液配方： 甲醇：乙酸=3:15 滴片 *v 目的：使细胞膜破裂，细胞核或核内染色体分散在载玻片上v 原理：滴片时产生的剪切力破坏细胞膜预冷的玻片使得液体的表面张力增加，液层更薄，有利于细胞的破裂和染色体的分散6 染色v染色液：石碳酸品红（卡宝品红），染色质特异染料v步骤：1 滴加染色液覆盖全部细胞2 染色5min中期分裂相特点 *v染色体浓缩成棒状，着丝点在染色体末端v可见三种形状的中期染色体镜检结果。