测定补体实验.docx

50%溶血试验(CH50)测定补体实验溶血CH补体补体实验标题:50%溶血试验(CH50)测定补体实验摘要：50%溶血试验即求得能使50%致敏羊红细胞发生溶血的最小量血清然后计算出每毫 升血清中补体含量以补体量作为横坐标，容血百分数作为纵坐标，可得到一个清晰的"S” 形曲线在50%溶血周围，线段近似一条直线因此当补体用量稍有变动，就可对溶血程 度发生很大影响所以用50%溶血作……关键词:溶血CH补体补体实验50%溶血试验即求得能使50%致敏羊红细胞发生溶血的最小量血清，然后计算 出每毫升血清中补体含量以补体量作为横坐标，容血百分数作为纵坐标，可得到一个清晰的S'形曲线 在50%溶血周围，线段近似一条直线因此当补体用量稍有变动，就可对溶血 程度发生很大影响所以用50%溶血作为终点要比100%溶血更为敏感50%溶血试验定血清中补体含量用以下公式表示：每毫升血清中补体含量］单位汽稀释倍数该公式可以从Von Krogh方程式进一步加以论证:假定X=加入的新鲜血清量y二溶血的百分率，以小数表示V二斜率k二常数转变成对数，上述公式就变成当以讯恋洛血作拘终点.时,y _ 0-31-0.5v册ri生物秀代入上述公式,log = log * + - log 1,由于一 1^1=0, logA = logA:.x = k,也即表示补 n ■ * °郎的刃％溶血单位疋就是加人的新鲜血清壘°材料及器材1•稀释液（磷酸盐缓冲生理盐水）NaCI 17gNa HPO 11g2 4KH PO 0.27g2 4蒸馏水100ml使用时取此原液50ml，加90ml蒸馏水。

经高压灭菌后即可使用加入100% 硫酸镁溶液1ml，可增强补体的效能2 •绵羊红细胞悬液（1x10g/ml）3 •溶血素（2U ）2•被检血清（新鲜豚鼠血清）3•水平离心机4 •水浴箱5 • 721型分光光度计方法:1•浓度为1x10g/ml的绵羊红细胞配制取经稀释洗涤后的绵羊红细胞配成较5%稍浓的细胞悬液取50%细胞悬液1ml，加于14ml蒸馏水中测0.D值为Di按下式求出于一定体积的5%细胞悬液中应加入稀释液的毫升数Di -Ds坯次配制的和％细胞悬液体积，17齿于一定量5为细胞悬液中应加入稀释的mil数：Ds 酋已知标谁优的1创冗个细胞/ ml悬液的0D =,:值一93阪2•致敏绵羊细胞取绵羊红细胞悬液（1x102/ml）加等量的溶血素（2U/ml ）充分混合 置37°C水浴中作用30分钟，每隔10分钟摇动一次以免细胞下降即成5x108 / ml致敏羊红细胞3 •补体CH50单位测定⑴按下表加样:试管号 需卫扁卜\ （ml）■12345G（溶血对唱）71血球对照）8（血渚对證）1 : 800U1W样品1.52.02..53.03.5———-1 : 90血洁样品一一一一一一一1.0致敏综羊红细胞-1.01.0-1.01.0-1.0-1.010一稀釋液5.04.54.03 53.0一6.56.5一一一一一6.5一一⑵ 将各管充分混合。

置37C水浴中60分钟（摇动1~2次,以免红细胞下沉⑶从水浴中取出后，立即将各管以2000转/分离心10分钟，将各管上清液分 别移于另一试管 ⑷测定各管上清液OD值（波长二540nm）4 •补体CH50单位的计算 从测定管（第1~5管）及溶血对照管（第6管）的OD值中减去红细胞对照管（第7管的OD值再减去按待测血清每管实际用量计算出的血清色度OD值（80 / 800 x该管实际量x第8管OD值）即为测定管的校正OD值然后计 算各测定管的溶血率（y值）_测定管的校正0刖£“1■二溶血对照管的校正0一璀再计算各管的y/（l- y）值在双对数坐标纸上，以y/（l— y）值为横坐标，血清用量为纵坐标，得到一条直线由于50%溶血（y=0.5 ）的y/（1—y）值等于1即可由横坐标等于1的—点，在直线上求得在纵坐标上相应的截距，此即产生50%溶血的待测血清实 际用量最后，按下列公式计算出每毫升待测血清的总补体活性，以单位/毫升表示之1丸味■容血特测血清实际用量氷待测血清稀释度。