孕酮检测试剂注册技术审查指导原则（2022年）范文.docx

孕酮检测试剂注册技术审查指导原则（2022年） 附件3 孕酮检测试剂注册技术审查指导原则 本指导原则旨在指导注册申请人对孕酮检测试剂注册申报资料的准备及撰写，同时也为技术审评部门审评注册申报资料提供参考 本指导原则是对孕酮检测试剂的一般要求，申请人应依据产品的具体特性确定其中内容是否适用，若不适用，需具体阐述理由及相应的科学依据，并依据产品的具体特性对注册申报资料的内容进行充实和细化 本指导原则是供申请人和审查人员使用的指导文件，不涉及注册审批等行政事项，亦不作为法规强制执行，如有能够满足法规要求的其他方法，也可以采用，但应提供详细的研究资料和验证资料应在遵循相关法规的前提下使用本指导原则 本指导原则是在现行法规、标准体系及当前认知水平下制定的，随着法规、标准体系的不断完善和科学技术的不断发展，本指导原则相关内容也将适时进行调整 一、适用范围 从方法学考虑，在本文中孕酮检测试剂是指采用化学发光免疫分析技术，以竞争法为基本原理，利用全自动、半自动化学发光免疫分析仪，在医学实验室对人体样本中孕酮的含量进行体外定量分析的试剂依据《体外诊断试剂注册管理办法》（国家食品药品监督管理总局令第5号）、《体外诊断试剂注册管理办法修正案》（国家食品药品监督管理总局令第30号）和《食品药品监管总局关于印发体外诊断试剂分类子目录的通知》（食药监械管〔2022〕242号），孕酮检测试剂管理类别为Ⅱ类医疗器械，分类编码为6840。

本指导原则不适用于： （一）单独申请注册的孕酮校准品和质控品 （二）化学发光免疫分析法原理之外的其他孕酮检测试剂 二、注册申报材料要求 （一）综述资料 孕酮是一种重要的孕激素，属于类固醇激素，相对分子量 314.5，主要由卵巢黄体和妊娠期胎盘生成，是睾酮、雌激素及肾上腺皮质激素的前体正常男性和女性卵泡期产生的孕酮水平很低，分泌入血后主要结合于白蛋白和性激素结合蛋白在体内进行循环孕酮水平与黄体的发育和萎缩有关 孕酮的主要功能是使子宫为受精卵的着床做好准备，并维持妊娠在月经周期的卵泡期，孕酮水平很低排卵之后，由黄体产生的孕酮迅速升高，并在排卵后5—7天达到浓度最大值10ng/mL—20ng/mL，使子宫内膜从增生状态转为分泌状态若未受孕，在月经周期的最后4天黄体萎缩，孕酮浓度降低若受孕，黄体不会凋落，继续分泌孕酮，使孕酮保持在相当于黄体中期的水平，并一直持续到妊娠的第六周在怀孕期间，胎盘逐渐成为孕酮的主要来源，浓度从怀孕前3个月的10ng/mL—50ng/mL升高到7—9个月的50ng/mL—280ng/mL临床研究证明孕酮在非孕期女性体内发挥着促进排卵和维持黄体的正常功能。

如果黄体产生的孕酮不足，可能说明黄体功能不足，而黄体功能不足与不孕及早期流产有关 血中孕酮升高可见于以下情况：（1）观察妇女排卵的时间及黄体酮的生成情况：在排卵的－1、0、+1天，孕酮含量成倍增加，提示为有排卵2）正常妊娠、双胎和多胎妊娠时孕酮合成量明显增加，血液中孕酮水平相对升高3）妊娠毒血症、先兆子痫、葡萄胎及原发性高血压时，孕酮含量也会升高 血中孕酮含量降低见于以下情况：（1）先兆流产、宫外孕、早产、闭经、不孕症2）黄体功能不全、卵巢黄体发育不全时，孕酮含量相应降低3）肾上腺、甲状腺功能严重失调也可影响卵巢功能，使排卵发生障碍，孕酮含量也会相应降低 孕酮的检测方法主要为酶联免疫法、化学发光免疫分析法，化学发光免疫分析法是目前临床检测孕酮应用较多的检测方法 综述资料主要包括产品预期用途、产品描述、生物安全性方面的说明、产品主要研究结果的总结和评价以及同类产品上市情况介绍等内容，其中同类产品上市情况介绍部分应着重从方法学、临床应用情况、申报注册产品与目前市场上已获批准的同类产品之间的异同方面进行介绍，应符合《体外诊断试剂注册管理办法》和《关于公布体外诊断试剂注册申报资料要求和批准证明文件格式的公告》（国家食品药品监督管理总局公告2022年第44号）的相关要求。

（二）主要原材料研究资料（如需提供） 1.主要原材料的选择、制备、质量标准及实验验证研究资料 检测试剂所用抗体的制备、筛选、纯化以及鉴定等详细试验资料如抗体为申请人自制，则应详述抗体的名称及生物学来源，申请人对该抗体技术指标的要求（如外观、纯度、蛋白浓度、效价等），且其生产工艺必须相对稳定，并对其工艺有相关的验证同时确定该抗体作为主要原材料的依据和质量标准；如为申请人外购，则应详述其名称及生物学来源，外购方名称，提交外购方出具的抗体性能指标及检验报告，详述申请人对该抗体技术指标的要求以及申请人确定该抗体作为主要原材料的依据供货商应相对固定 其他主要原材料的选择及验证资料，申请人应详述每一原材料技术指标的要求以及确定该原材料作为主要原材料的依据，确定质量标准若为外购，应提供外购方名称并提交外购方出具的检验报告 2.质控品、校准品的原料选择、制备、定值过程及实验资料 3.校准品的溯源性文件，包括具体溯源链、实验方法、数据及统计分析等详细资料申请人应根据GB/T21415—2022/ ISO17511:2022《体外诊断医疗器械生物样品中量的测量 校准品和控制物质赋值的计量学溯源性》提供所用校准品的来源、赋值过程和相应指标，以及不确定度等内容。

（三）主要生产工艺及反应体系的研究资料（如需提供） 1.主要生产工艺介绍，可以图表方式表示； 2.反应原理介绍； 3.检测方法的介绍：含样本采集、标准品和质控品、测试步骤、结果计算等； 4.反应体系研究：含样本采集及处理、样本要求、样本用量、试剂用量、反应条件、校准方法（如有）、质控方法等的研究资料； 5.不同适用机型的反应条件如果有差异应分别详述 （四）分析性能评估资料 申请人应提交在产品研制阶段对试剂盒进行的所有性能验证的研究资料，包括具体研究方法、试验数据、统计方法等详细资料应当对多批（至少3批）产品进行性能评估对于孕酮检测试剂，建议着重对以下分析性能进行研究 1.通过重复性和批间差考察精密度 1.1重复性 在重复性条件下，对浓度（2—14）nmol/L和（46—85）nmol/L的样品分别重复测定10次，计算10次测定结果的平均值（）和标准差（SD），根据公式（1）得出变异系数（CV），其测量结果的变异系数（CV）应不大于10%（仪器自动操作法）或不大于15%（手工操作法） CV=SD/100%........................................（1） 1.2批间差 使用3个批次试剂盒对浓度在（2—14）nmol/L和（46—85）nmol/L范围内的样本各重复测定10次，计算30个测量值的平均值（）和标准差（SD）。

按公式（1）计算变异系数（CV）其测量结果的变异系数（CV）应不大于15% 2.准确度性能评估 按以下优先顺序选择准确度性能评估方法： 2.1相对偏差 2.1.1用可用于评价常规方法的参考物质/有证参考物质（CRM）对试剂（盒）进行测试，重复检测3次，取测试结果记为（Xi），按公式（2）计算相对偏差（Bi）如果3次结果都符合要求，即判为合格如果大于等于2次的结果不合格，即判为不合格如果有1次结果不符合要求，则应重新连续测试20次，并分别按照公式（2）计算相对偏差，如果大于等于19次测试的结果符合要求，则准确度符合企业规定要求 Bi = （Xi －T）/T………………………（2） 式中：Xi—单次测试结果； T—有证参考物质标示值或各浓度人源样本定值； Bi—单次相对偏差 注：首选国家参考物质，如无国家参考物质可选用国际参考物质 2.1.2对企业参考品进行检测 用参考方法定值的企业参考品对试剂（盒）进行测试，重复检测3次，取测试结果记为（Xi），按公式（2）计算相对偏差（Bi）如果大于等于2次的结果不合格，即判为不合格。

如果有1次结果不符合要求，则应重新连续测试20次，并分别按照公式（2）计算相对偏差，如果大于等于19次测试的结果符合要求，则准确度符合企业规定要求 2.2回收实验 选择接近参考区间的常规检测样本，分为体积相同的3—4份，在其中2—3份样本中加入不同浓度相同体积的待测物标液制备待回收分析样本，加入体积不大于原体积的10%，制成2—3个不同浓度的待回收分析样本，计算加入的待测物的浓度在另一份样本中加入同样体积的无待测物的溶剂，制成基础样本用待评价系统对待回收分析样本和基础样本进行测定，通常对样本进行3次重复测定，计算均值，取其均值进行下述计算 回收率应在85%—115%范围内用公式（3）计算回收率： …………………………………（3） 式中：R-回收率； V-加入待测物标准液的体积； V0-基础样本的体积 C-样本加入待测标准物质后的检测浓度； C0-基础样本的检测浓度； Cs-待测物标准液的浓度 2.3比对实验 参考相关国际或国内有关体外诊断产品性能评估的文件进行准确度评估 用不少于40个覆盖检测浓度范围内不同浓度的人源样品，以申请人指定的试剂（盒）作为比对方法，每份样品按待测试剂（盒）及比对试剂（盒）的操作方法分别检测。

线性回归计算两组结果的相关系数（r）、斜率及偏差，结果应符合企业规定要求 3.检出限性能评估 申请人需提供试剂盒的空白限、检出限及参考区间等相关信息根据提供信息，对5份浓度近似检出限的低值样本进行测定，每份样本测定5次对测量结果按照大小进行排序，符合如下条件，即可认为所提供的空白限和检出限的设置基本合理 3.1低于申请人提供的空白限数值的检测结果数量应小于等于3个； 3.2无高于3.18nmol/L的测量结果 4.线性范围性能评估 将接近线性范围上限的高值样本按一定比例稀释为至少5个浓度其中，低值浓度的样本须接近线性范围的下限将每一浓度的样本重复测定最少2次，计算平均值，将结果平均值和稀释比例用最小二乘法进行直线拟合，并计算线性相关系数（r） 5.特异性性能评估 推荐参考《WS/T416-2022 干扰实验指南》或相关国际、国内有关体外诊断产品性能评估的文件进行特异性评估孕酮的干扰物质选取可参见表1，企业可在不低于行业标准的前提下根据实际情况选择适用的干扰物质进行评估干扰程度 5.1溶血（血红蛋白）、脂血（甘油三酯）、黄疸（胆红素）等干扰因素对检测结果的影响； 5.2样本中其他可能干扰试剂反应的物质对检测结果的影响； 5.3资料中所提到的干扰物质，其干扰程度均不应使用模糊的描述方式，而应细化到干扰量，并提供相应的实验数据予以支持。

表 1 孕酮干扰物参考表 序号 干扰物质 序号 干扰物质 序号 干扰物质 1 11-去氧皮质酮 6 17β-雌二醇 11 克罗米酚 2 孕烯醇酮 7 雌酮 12 11-脱氧皮质醇 3 皮质醇 8 雌三醇 13 保泰松 4 皮质酮 9 醛甾酮 14 睾酮 5 17a-羟基孕酮 10 丹那唑 15 强的松龙 评估方法：设置对照样本组，使孕酮目标浓度为64nmol/L（允许相对偏差为15%），重复测定（n≥7）并计算平均值（M）与标准差（SD）设置待测样本组，分别添加潜在干扰物于含有孕酮的样本中，获得待测样本中孕酮的目标浓度为64nmol/L （允许相对偏差为15%），待测样本测量结果的平均值（n≥2）应在对。