动物遗传育种学教学课件 9 实验九 植物多倍体诱发.ppt

遗传育种学实验,中国海洋大学水产学院,实验九 植物多倍体诱发,一、实验目的,了解人工诱导多倍体的原理 了解用秋水仙碱诱发多倍体植物的方法 学习识别多倍体细胞学特点,二、实验原理,秋水仙素: 细胞有丝分裂的抑制剂 作用：抑制纺锤丝微管的形成，进而抑制染色体移向两极的运动，使细胞停滞在中期, 不能分裂成二个新的子细胞 秋水仙素对染色体结构并无明显的影响，对细胞也不产生严重毒害，细胞解除秋水仙素环境后仍可正常生长分裂，因而出现细胞含有多个染色体组的情况，构成多倍体细胞三、实验材料,大蒜(2n=12) 洋葱(Allium cepa, 2n=16) 蚕豆(Vicia faba, 2n=12) 西瓜(Citrullus vulgaris , 2n=22)等作物的种子、根尖、花蕾或幼苗,四、实验用具药品,1.用具：水浴锅、显微镜、培养皿、载玻片、盖玻片、镊子、刀片、解剖针、纱布、吸水纸等 2.药品试剂：秋水仙素、改良品红染色液、无水酒精、冰醋酸、1N盐酸,多倍体诱发 （一）材料准备 选取大蒜瓣去皮，用透明胶带固定放在盛有清水的培养皿中，使根部与清水接触，在 2025光照条件下培养2天左右待根尖长到0.51cm时，将清水换成含0.1%秋水仙素的水溶液中，置阴暗处培养12天，至根尖膨大为止。

（二）恢复生长24小时左右，诱导后细胞为多倍体细胞五、实验方法,（三）固定 卡诺氏固定液 324h 目的是用化学的方法把细胞迅速杀死，并尽量保持原来的分裂状态，同时更易于着色 （四）解离 将固定后的根尖用清水洗几次，吸干水，加入1N HCl溶液，在60下水解6min（解离成功的根尖，分生组织发白，伸长区已呈半透明，似烂状）解离后的根尖用水轻洗23次，以利于着色五）染色、压片 制片时，取一根尖放在洁净的载玻片上，用解剖针切取1mm左右的生长区，其余部分弃掉，滴加改良苯酚品红染色液染色3分钟左右用解剖针在材料的上方轻压几下，使生长区的细胞分散开来，再将多余的染料用吸水纸吸走，加盖玻片用胶头玻璃棒敲击根尖部位，重复几次，力一次比一次大，以盖玻片不破裂为准细胞学观察,细胞学观察,用根尖压片法制成染色体玻片标本，在显微镜下认真观察和染色体计数，与对照进行对比洋葱根尖细胞中期分裂相（左，2n；右，4n）,二倍体和四倍体,大蒜,六、作业及思考题,1.所观察种的染色体数目？处理后得到了哪些染色体数目变异类型的细胞？ 2.许多染色体畸变的类型可以通过多倍体传递下去，且多倍体植物对环境具有更强的适应性，为什么？ 3. 秋水仙诱导多倍体时应注意问题？,。