皮肤科免疫荧光技术.ppt

皮肤科免疫荧光技术皮肤科免疫荧光技术河北医科大学第二医院皮肤科郭兵申免疫荧光技术概述¡原理 将不影响抗原抗体活性的荧光色素标记在抗体（或抗原）上，与其相应的抗原（或抗体）结合后，在荧光显微镜下呈现一种特异性荧光反应¡分类直接法：将荧光素标记的抗体与标本中的抗原直接结合进而荧光反应间接法：将荧光素标记的抗抗体与相应的特异性抗体抗原复合物反应，形成抗原-抗体-抗抗体复合物体系，进检测的一种特异性荧光反应免疫荧光原理示意图临床常用荧光素染料⑴异硫氰酸荧光素（FITC）λ吸=490--495nm 、λ发=520--530nm、黄绿色荧光 ⑵四乙基罗丹明（RIB200）λ吸=570nm、 λ发=595～600nm、呈橘红色荧光⑶四甲基异硫氰酸罗丹明（TRITC）λ吸=550nm、 λ发=620nm、呈橙红色荧光皮肤直接免疫荧光检测¡适应症：—非感染性大疱性皮肤病非感染性大疱性皮肤病¡天疱疮、类天疱疮、疱疹样皮炎、线状天疱疮、类天疱疮、疱疹样皮炎、线状IgAIgA大疱大疱性皮病、获得性大疱性表皮松解等性皮病、获得性大疱性表皮松解等—结绨组织病：如红斑狼疮等结绨组织病：如红斑狼疮等—各种血管炎各种血管炎—皮肤肿瘤皮肤肿瘤—某些感染性皮肤病某些感染性皮肤病皮肤间接免疫荧光检测适应症：血清中各种抗微生物抗体测定血清中各种抗微生物抗体测定¡如：梅毒螺旋体、支原体、衣原体、立克次体、如：梅毒螺旋体、支原体、衣原体、立克次体、疱疹病毒等疱疹病毒等血清中各种自身抗体的测定血清中各种自身抗体的测定¡系统性疾病：如红斑狼疮、皮肌炎、硬皮病等系统性疾病：如红斑狼疮、皮肌炎、硬皮病等¡大疱性皮肤病：如天疱疮抗体等大疱性皮肤病：如天疱疮抗体等¡糖尿病：如抗胰岛细胞抗体等糖尿病：如抗胰岛细胞抗体等操作方法及流程放入生理盐水放入生理盐水送检送检手术取材手术取材外观正常未受外观正常未受累皮肤累皮肤直径直径1-2mm带疱带疱皮损皮损（米粒大小水疱）（米粒大小水疱）直接荧光直接荧光患者标本采集患者标本采集操作方法及流程¡冰冻切片、染色、镜检组织修材，成组织修材，成适合冰冻包埋适合冰冻包埋块的大小块的大小冰冻切片冰冻切片抗原与荧光抗抗原与荧光抗体结合体结合荧光显微镜下荧光显微镜下镜检及成像，镜检及成像，打印报告打印报告操作方法及流程¡间接免疫荧光染色步骤操作方法及流程实验室操作图片直接荧光组织修材直接荧光组织修材冰冰冻冻切切片片实验室操作图片荧光染色荧光染色水浴箱孵育水浴箱孵育实验室操作图片荧光显微镜镜检荧光显微镜镜检免疫荧光镜下天观（天疱疮患者标本）IgG抗体抗体镜下描述： 镜下可见荧光抗体IgG于表皮棘细胞间呈网状沉积，荧光阳性。

免疫荧光镜下天观（类天疱疮患者标本）C3补体补体荧光镜下： 镜下可见荧光标记的C3补体于表皮基底膜带呈线状沉积，荧光阳性免疫荧光在大疱性皮肤病中的意义大疱性皮肤病大疱性皮肤病沉积部位沉积部位荧光抗体荧光抗体沉积形状沉积形状靶抗原靶抗原寻常型天疱疮寻常型天疱疮细胞间细胞间IgG、、C3（少数有（少数有IgM和和IgA））网状网状Dsg3可有可有Dsg1增殖型天疱疮增殖型天疱疮细胞间细胞间同上同上网状网状Dsg3可有可有Dsg1落叶型天疱疮落叶型天疱疮细胞间细胞间IgG或或IgG、、C3网状网状Dsg1副肿瘤性天疱疮副肿瘤性天疱疮细胞间（少数细胞间和表皮下）细胞间（少数细胞间和表皮下）IgG或或IgG、、C3网状或线状网状或线状少数少数BP230IgA天疱疮天疱疮细胞间细胞间IgA（偶有（偶有C3、、IgG和和IgM））网状网状---疱疹样天疱疮疱疹样天疱疮细胞间细胞间IgG、、C3网状网状---大疱性类天疱疮大疱性类天疱疮基底膜带基底膜带IgG、、C3或仅有或仅有C3（少数有（少数有IgM和和IgA）盐裂后）盐裂后IgG在表在表皮侧皮侧线状线状BP180、、BP230瘢痕性类天疱疮瘢痕性类天疱疮基底膜带基底膜带IgG、、C3（（25％可有％可有IgM或或IgA））线状线状---妊娠疱疹妊娠疱疹基底膜带基底膜带C3（（10％％-20％可伴有％可伴有IgG））线状线状可有可有BP180疱疹样皮炎疱疹样皮炎90％真皮乳头，少数基底膜带％真皮乳头，少数基底膜带IgA、、C3（偶伴有（偶伴有IgG和和IgM））乳头处颗粒状，乳头处颗粒状，少数线状少数线状---线状线状IgA大疱性皮病大疱性皮病基底膜带基底膜带IgA也可伴有也可伴有C3、、IgG和和IgM线状线状可有可有BP180获得性大疱性表皮松解获得性大疱性表皮松解基底膜带基底膜带IgG、、C3（少数有（少数有IgM和和IgA）盐裂后沉积于真皮侧）盐裂后沉积于真皮侧线状（比类天的线状（比类天的荧光带要宽）荧光带要宽）---暂时性和持久性棘层松解性皮暂时性和持久性棘层松解性皮病病免疫荧光检测阴性免疫荧光检测阴性。