细胞油红O染色的操作步骤.doc

细胞油红0染色的操作步骤点击次数：348发布时间：2011-4-11、10%中性甲醛的配制材料：中性甲醛(多聚甲醛)密封瓶称取1g中性甲醛粉末，加入10ml的三蒸水中，密封，在60度水浴中过夜才能溶解配好的溶液1个星期内有效，最好4度保存2、染色液的配制材料：油红染料棕色可密圭寸瓶异丙醇研钵漏斗定性滤纸称取预先研磨粉碎的0.5g油红干粉，溶于少量异丙醇中，然后加异丙醇至100ml，棕色瓶密封(或锡箔纸包裹避光)4C保存，为储存液，可长期保存用时取6ml加三蒸水4ml混匀，定性滤纸过滤，稀释后数小时内用完3、培养载体3毫升培养瓶如果培养载体为塑料制品，hoechst33342染核的话，塑料板自发荧光也为蓝色，必须考虑4、.染色对象间充质细胞脂肪诱导后不同时间段5、注意事项：脂肪油红染色，有的是动物/人体脂肪组织切片，或细胞爬片各有操作差异以下是各论坛方法小结，不全1) .完全成熟饱满的脂肪细胞，容易破裂，脂滴泄漏，所以压片，切片都要考虑到这个问题2) .细胞爬片细胞溶液脱落，特别是脂滴大的操作务要轻柔不要把细胞冲掉3) .如果做脂肪组织冰冻切片，冰冻温度比普通要低，切片厚度加厚6、染色步骤:（1）先小心轻缓倒去培养夜。

2）用pbs轻缓漂洗（不洗没问题）3）加10%中性甲醛固定30min（实际固定时间过夜都没问题固定液用95%酒精也可）固定的是细胞膜4）稀释油红储存液，油红：去离子水=3:2，滤纸过滤，室温放置10min（除去一些杂质，染色结果更清晰）5）染色10min左右，加的体积覆盖住板底即可，如6孔加1.5ml，24孔加0.5-1ml（实际染色时间1小时都可以）6）脱色，用75%酒精/60%异丙醇漂洗，除去多余的染料（实际用其他平衡液洗也没问题，背景并不会残留多少）7）复染，淡苏木染色1/5分钟，pbs漂洗（这一步不做也可，看试验需要，并且苏木素会把胞浆染红，如要显示核，hoechst33342也可以，浓度5微克/毫升染10分钟即可把核染上）8）甘油明胶封片（封片后可长期保存）9）显微镜观察三、显示脂类的油红法：（1）操作步骤：?1、福尔马林固定后的恒冷箱切片附贴于载片上或游离切片，厚5-10nm2、60%异丙醇稍洗切片，3、油红O液染5-15min，4、60%异丙醇洗去多余染液，5、自来水洗，6 、苏木素染细胞核2min，7 、自来水洗，如果需要可分化，8 、水洗至细胞核蓝化5-10min，9 、擦去多余水分，甘油明胶封固。

结果：脂类物质显示红色，细胞核显示蓝色II)试剂的配制：油红o(oilredo)0.5g异丙醇(isopropanot)100ml将异丙醇放入三角烧瓶，再加入油红0,于水浴中慢慢加热使之溶解，待至完全溶解后取出，冷却至室温后，过滤，装于棕色小磨沙口瓶保存，临用前取6ml加蒸馏水4ml，混合后静置10min后过滤,染色时间5-15min。