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树突状细胞介导肿瘤免疫治疗【摘要】树突状细胞(DC)与肿瘤的发生发展有一定 的关系，在这个方面最引人注目的研究工作是应用抗原或抗 原多肽在体外冲击致敏DC,然后将之回输或免疫接种至荷瘤 宿主，进行免疫治疗随着DC对肿瘤抗原处理、递呈及识 别的分子基础以及DC作用机制的进一步阐明，推动了以DC 为基础的肿瘤免疫治疗的发展DC抗肿瘤疫苗具有很好的临 床应用前景关键词】树突状细胞；肿瘤免疫治疗树突状细胞(Dendritic cells, DC)是目前发现的功能 最强大的抗原提呈细胞，它能激活初始型T细胞，激发初始 免疫应答，在体内发挥强大的免疫监视功能DC与肿瘤的发 生发展有一定的关系，不同的肿瘤免疫存在肿瘤相关抗原， 若肿瘤患者体内DC功能缺陷，不能有效递呈肿瘤抗原，则导 致免疫无能或免疫耐受，使肿瘤得以发生发展［1］在这个 方面最引人注目的研究工作是应用抗原或抗原多肽在体外 冲击致敏DC,然后将之回输或免疫接种至荷瘤宿主进行免疫 治疗DC疫苗在众多的动物肿瘤模型的治疗中取得了显著的 效果，应用此方法对DC进行肿瘤抗原修饰可以解决因DC功 能缺陷造成的肿瘤免疫逃逸，而使用何种肿瘤抗原及如何将 肿瘤抗原在体外与DC结合，则成了应用DC瘤苗进行免疫治 疗的关键。

1临床用DC的来源及诱导分化方法DC在体内外分布广泛，普遍存在于除脑组织外的各种 组织中，但其数量极少，在血液中仅占单核细胞总数的 0.5%~1.0%,在淋巴器官中虽然数量较多，但难以收集，而 且由于分离出的DC具有异质性，难以满足对DC的基础研究 及临床应用需要因此，必须进行DC体外培养，诱导分化 获取大量的DC以满足对DC临床治疗的需要目前体外获取 人DC的常用方法包括：（1）以外周血直接分离获得DC； （2） 来源于外周血、脐血或骨髓的CD34+细胞体外+GM GCF和 TNF a的培养条件下获取DC； C kit配体可提高DC的产 量，肝细胞生长因子（HGF）和PMA也是有效的DC分化扩增 激活因子[2] ； （3）单核细胞诱导分化扩增Garderet等[3] 总结了外周血单核细胞体外诱导扩增DC的基本过程，包括 用白细胞提取法收集外周血单核细胞，淘选法分离单核细 胞，人血清培养液（含患者自体血清或AB血清）或无血清 培养液加GM GSF加IL 4与单核细胞共同培养另一种方 法就是从脐血单核细胞诱导扩增DC,培养条件与外周血单核 细胞诱导DC相同来源于外周血的CD 14+单核细胞DC与来 源于CD34+细胞的DC在形态、表型、抗原提呈方面基本相似。

但前者与后者相比更多的处于成熟阶段，在激活肿瘤特异性 的CTL能力上，后者可能更强一些到目前为止，大多数研 究应用单核细胞起源的DC (MoDC),在体外使大量的单核细 胞分化为DC,虽然需要外源性细胞因子刺激和较长的培养时 间，但是因其具有产量大、纯度高、易获得等优点，能满足 实验和临床研究的需要2负载DC常用的方法2. 1肿瘤特异抗原修饰的DC由于使用已知的肿瘤抗原多肽，可以避免不必要的免 疫刺激用前列腺特异性膜抗原致敏的DC治疗对激素治疗 不再有效的前列腺癌患者，以NPCP标准评估，30%的病人产 生了部分免疫应答血清前列腺特异性抗原和以前可测知的 损害下降了 50%,并且无副作用产生2.2肿瘤相关抗原(TAA)修饰的DC这些 TAA 包括 MAGE 1, MAGE 3,MUCI,Her 2/neu, CEA, Melan/MART等晚期前列腺癌，恶性黑色素瘤及表达 CEA的实体肿瘤患者采用相应抗原刺激DC,均取得了较好的 效果2. 3肿瘤特异性表位肽修饰的DC采用特异性表位肽由于其纯度较高，浓度较大，可 以激发较强的免疫反应，且抗原单纯，无诱发自身免疫反应 之忧，但不利之处在于其受MHC的限制，绝大多数肿瘤的特 异性抗原表位仍是未知的。

因此，这种方法仅见在B细胞 淋巴瘤、多发性骨髓瘤及黑色素瘤等肿瘤抗原表位肽比较明 确的患者中使用第1期树突状细胞介导的肿瘤免疫治疗 吴 志刚2. 4全肿瘤抗原修饰的DC由于只有一部分肿瘤的肿瘤相关抗原或肿瘤特异性 抗原已知，大部分肿瘤尚未明确，无需明确肿瘤抗原，因而 将整个肿瘤细胞作为抗原来源，诸如将DC与肿瘤裂解物或 提取物、凋亡或坏死的细胞共培养，或将DC与肿瘤细胞融 合将肿瘤细胞与DC融合，可以获得既具有DC特殊功能又 表达肿瘤抗原的杂合体，这种杂合体细胞表达MHC I, MHC II抗原，协同刺激分子以及DC特异性或肿瘤细胞表面 分子输注以后可以产生抗瘤作用自体肿瘤细胞与抗原提呈 细胞融合制备的杂交细胞，在体内外均可以激发CD4+和 CD8+T淋巴细胞介导的免疫反应此方法应用困难，因为难 于获得高纯度并处于增殖状态的肿瘤细胞2.5肿瘤抗原基因转染构建DC采用转基因手段以某些功能修饰DC,使其在DC中表 达，激发特异性抗肿瘤免疫反应将编码肿瘤抗原的DNA和 RNA分子转入DC,可提供较大范围的抗原表位递呈，并且增 加了 MHC I和MHC II分子递呈抗原肽的能力，HLA限制性 的抗原选择也可被避免，而且肿瘤抗原编码基因导入DC后 能在DC内持续表达肿瘤抗原，可以克服由于DC上抗原MHC 复合物解离或细胞MHC分子降解对其诱导T细胞免疫应答产 生的不利影响。

用差异筛选等方法获得肿瘤细胞特异性表达 的肿瘤mRNA,再用于刺激DC,同时也可将差异筛选获得的 肿瘤特异性表达mRNA的导入DC,用于肿瘤的免疫治疗，这 样可以避免自身抗原诱发自身免疫性疾病，又可诱导强烈特 异抗肿瘤免疫反应，但目前这种技术要求较高，非特异性影 响因素较多，操作复杂2. 6 mRNA 瘤苗因为单一细胞的mRNA成分易于扩增，则肿瘤RNA或 相应的CDNA文库为肿瘤抗原提供了无限的来源Heiser等 ［4］将前列腺癌细胞mRNA转染DC治疗13例患者，可诱导出 明显的T细胞免疫Ashley等［5］用B16总RNA致敏骨髓来 源的DC,介导产生了针对B16肿瘤细胞的特异性CTL,可以 保护无瘤动物免受中枢神经系统肿瘤的攻击，延长荷瘤小鼠 的生存期2.7病毒瘤苗目前发现某些肿瘤的发生与病毒感染密切相关，如EB 病毒感染与B细胞淋巴瘤、霍奇金病、鼻咽癌、外周血T细 胞淋巴瘤等多种肿瘤有关用B细胞淋巴瘤表达的EB病毒 核抗原及潜在膜蛋白的表位肽致敏外周血来源的DC,可以激 活记忆性T淋巴细胞，产生明显的CTL反应细胞毒实验证 实这些CTL可以杀死B细胞淋巴瘤细胞用重组腺病毒载体 负载的EB病毒抗原基因，如潜在膜蛋白2B(LMP2B)修饰DC 基因，48 h后95%以上的DC展示了有效的基因转染，用转 染之后的DC激活CD8+细胞，在第14天针对LMPI肽的T淋 巴细胞反应显著增强，21 d后可以观察到针对自体EB病毒B淋巴瘤细胞的特异性细胞溶解反应，这一现象为EB病毒 疫苗用于EB病毒相关肿瘤的免疫治疗提供支持。

2.8肿瘤抗原编码基因构建DC将IL 12基因修饰的DC细胞直接注入黑色素瘤 和肉瘤小鼠模型的肿瘤病灶中，可以诱发抗肿瘤免疫 IL 12基因的转染可以促进DC细胞成熟，表现为MHC I, MHC II和共同刺激分子的表达增加肿瘤抗原编码基因导 入DC后可以使其不断释放出肿瘤抗原，从而能更加有效地 激活T细胞3 DC的临床应用DC疫苗已经在一系列肿瘤的临床实验中取得了较好 的效果，在许多患者体内激发了肿瘤特异性的细胞毒性T细 胞反应，并使某些患者体内肿瘤显著消退瑞典和德国的一 个联合小组用抗原多肽或肿瘤细胞溶解产物体外冲击DC,对 16例晚期黑色素瘤患者进行治疗，有5例取得治疗效果，其 中2例多个器官的转移灶完全消失，另3例部分消退美国 斯坦福大学一个研究小组［6］应用抗特异抗体体外冲击致敏 自体DC过继回输，治疗非霍奇金B淋巴瘤患者，结果诱导 患者产生了显著的细胞与体液免疫反应，经治4例患者有1 例瘤体完全消失，另1例瘤体显著缩小用人工合成的 MAGE 3表位肽负载自身的DC治疗HLA A24膀胱癌患者， 可在体外诱导出高效的、特异性的CTL,经治疗的4例膀胱 癌患者3例淋巴结和(或)肝的转移灶明显缩小［7］。

Liso 等［8］采用独特型抗原肽负载DC治疗26例多发性骨髓瘤患 者，结果有24例产生了 KLH特异性的细胞增殖反应，4例产 生了 1 d特异性的细胞增殖反应，其中3例病灶完全消退 在平均30个月的随访时间内，17例生存美国西雅图1个 研究小组选择PSMA的HLA A0201特异性抗原多肽体外冲击 致敏外周血来源的自体DC,回输治疗51例对激素治疗无效 的前列腺癌患者，结果表明该疗法具有一定的临床应用前景 ⑼4临床治疗存在的问题及展望由于存在阻碍肿瘤特异性CTL效能 的问题，需要采取以下策略：(1)动员、激活肿瘤的免疫T 细胞2)通过增强Fas配体的表达以及抑制IL 10和血 管内皮生长因子的表达3)逆转下降的抗原递呈4)细 胞因子基因修饰增强抗肿瘤作用，如腺病毒介导的IL 2基 因修饰DC,使受抗原冲击的DC在体内诱导出更强的抗肿瘤 免疫应答总之，DC瘤苗是抗肿瘤免疫治疗的新方向根据 目前所进行的临床实验，可以说DC瘤苗用于人体是安全的, 但治疗方案必须个体化、最优化疫苗的制备方案、具体注 射剂量及途径、与其他佐剂联合应用等问题有待进一步的临 床实践和探索现已进行的治疗大部分集中于晚期患者，随 着DC瘤苗的进一步深入研究，由DC介导的抗肿瘤治疗将有 很好的前景。

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