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作者：杨明利 天然药物化学实验（本科）讲稿 第一章 黄柏中小檗碱的提取、分离与鉴定教学目的要求掌握黄柏中小檗碱(季胺型生物碱) 的提取原理和方法掌握干法装柱和湿法装柱的操作方法1、 掌握鉴定小檗碱(已知化合物 )的一般方法教学重点难点季铵型生物碱的理化性质及提取方法2、 渗漉法的操作过程及注意事项3、 结晶法的注意事项4、掌握薄层色谱鉴定的方法实验一 黄柏中盐酸小檗碱的提取（一）实验原理根据黄柏中含粘液质较多的特点，首先用石灰乳使粘液质生成难溶于水的钙盐，用碱水自黄柏中提出小檗碱，再加盐酸使其转化为盐酸小檗碱沉淀析出小檗碱能缓缓溶解于水中，在冷乙醇中的溶解度不大，但易溶于热水或热乙醇，难溶于苯、氯仿、丙酮小檗碱与酸结合脱去一分子水而成盐小檗碱盐酸盐在冷水中溶解度小，较易溶于沸水，几不溶于乙醇，小檗碱的硫酸盐、磷酸盐在水中溶解度较小，与大分子有机酸生成的盐在水中的溶解度很小黄柏中主要含有小檗碱，其结构如下 OONOMeOe NOO OMeOeOH NHOO OMeOeCOH+ :季铵式（红棕色） 醇式（黄色） 醛式（黄色）小檗碱的三种互变异构体川黄柏含小檗碱约 1.37％～5.8％，关黄柏含小檗碱约 0.60％～1.64％。

作者：杨明利 天然药物化学实验（本科）讲稿 (二)实验方法»Æ°Ø´Ö·Ûʯ»ÒÈé½Á°è ¾ùÔÈ£¬Ë®½þ×Õºó ÉøäõÉøäõÒº¼ÓÈë×ÜÌå »ý10£¥NaCl£¬¾²Ö㬹ý Â˳Á µí²» ÈÜÎï ÂËҺŨHClÖÁpH2£¬·ÅÖ㬹ý ÂËÂËÒº ³Á µí´¿ ˮϴ ÖÁÐÔ£¬³é¸ÉÑÎ ËáСéÞ¼îÈÜÓÚ20±¶Á¿·ÐË®³ÃȳéÂË实验二 黄柏中盐酸小檗碱的纯化及鉴定一、纯化1.湿法装柱色谱法 吸附剂：中性氧化铝(100～200 目)35g 置于烧杯中，加入 50ml 95％乙醇，调成浆状，湿法装柱上样：取 50～100mg 自制盐酸小檗碱，溶于少量 95％热乙醇中，加入色谱柱中洗脱：95％乙醇洗脱，收集开始流出的鲜黄色带，即为纯化的盐酸小檗碱2.结晶法抽率上次提取液，将得到的滤饼用少量水加热溶解，趁热抽率，滤液放冷等待析晶，再抽率得到晶体，即盐酸小檗碱纯品二、薄层色谱鉴定将提取分离出的盐酸小檗碱样品与盐酸小檗碱的对照品共薄层色谱，比较其 Rf 值是否一致。

吸附剂：硅胶 G 薄层板展开剂：① 苯一醋酸乙酯一异丙醇一甲醇一水(6：3：1.5：l.5：0.3)，氨蒸汽饱和②氯仿-甲醇-氨水(15：8：1) 显色剂：改良碘化铋钾试剂1、渗漉前为什么要加入石灰乳搅拌？2. 提取时加氯化钠的作用是什么？3、在制备薄层色谱板时有哪些注意事项？第四章 芦丁的提取、分离、精制和鉴定1、掌握碱溶酸沉法提取黄酮类化合物的原理及操作2、掌握黄酮苷的水解原理及操作3、掌握黄酮类及糖类化合物的检识1、碱溶酸沉法提取的原理2、黄酮的检识反应实验七 槐米中芦丁的提取作者：杨明利 天然药物化学实验（本科）讲稿 实验原理：芦丁结构中具有酚羟基，显酸性，可用碱溶酸沉法提取，碱用石灰水，酸用浓盐酸实验步骤： 称取槐米 30g，在乳钵中研碎，置 l000ml 的搪瓷杯中，加入 300ml 饱和石灰水①(以棉花过滤至澄明)加热煮沸 30 分钟，趁热过滤( 以棉花)，残渣再用 200ml 饱和石灰水煮沸30 分钟趁热过滤，合并两次滤液．加浓盐酸(边加边搅拌 )调 PH3～4②(放置过夜)次日倾出上清液，抽滤沉淀，蒸馏水洗至 PH5～6，70℃干燥，得粗芦丁。

注意：①加石灰乳既可以达到碱溶解提取芦丁目的还可以除去槐花米中的多糖类、粘液质等②酸化时 PH 过低会使芦丁形成烊盐而降低收率实验八 芦丁的精制、水解及鉴定实验原理：芦丁在水中热溶冷不溶，可用水做溶剂，利用结晶法精制芦丁一、芦丁（芸香苷）的精制水结晶法：率上次提取液，得芦丁粗品，加蒸馏水 300ml，煮沸至芦丁全部溶解，趁热立即抽滤，冷却后即可析出结晶，抽滤，60～80℃烘干，得芦丁精制品二、芦丁的水解和槲皮素的分离取芦丁 1g 置 500ml 圆底烧瓶中加 2％H2SO4100ml 回流 30 分钟，( 加热约数分钟后，溶液完全澄清，20 分钟后又逐渐析出黄色针状结晶)过滤即得槲皮素．必要时用稀乙醇重结晶即可得以含 2 个分子结晶槲皮素，110℃真空干燥，即可得无水物滤液：供糖的鉴定三、化学鉴定取芦丁 3～4mg，加乙醇 5～ 6ml 使溶解，制成样品溶液 A，取槲皮素 3～4mg，加乙醇5～6ml 使溶解，制成样品溶液 B，取芦丁的水解滤液为 C，按下列方法进行试验呈色反应(1)盐酸－镁粉反应 取样品溶液 A 和 B 各 1～2ml，分别加 2 滴浓盐酸，再酌加少许镁粉，注意观察颜色变化情况。

2)锆盐－枸橼酸反应 取样品溶液 A 和 B 各 1～2ml，分别滴加 2％ZrOCl2 的甲醇溶液3～4 滴注意观察颜色变化情况，再继续向试管中加入 2％枸橼酸的甲醇溶液 3～4 滴，并详细记录颜色变化情况3)a-萘酚反应(Molish 反应) 取样品溶液 C l～2ml，然后再加 10％a-萘酚乙醇溶液 2～3 滴，摇匀，沿管壁缓缓加入浓硫酸 lml，注意观察溶液界面产生的颜色变化作者：杨明利 天然药物化学实验（本科）讲稿 »±»¨Ã×´Ö·Û£¨20g£©ÖÃ500mlÉÕ±-ÖУ¬¼ÓË®300ml£¬ÔÚ½Á°èϼÓÈëʯ»ÒÈ飨1~1.5g£©£¬µ÷ÖÁPH8~9£¬¼ÓÈÈÖÁ΢·Ð£¬±£³Ö30min£¬³ÃÈȳéÂË¡£²ÐÔü ÂËÒºÔÚ60~70¡æÏÂÓÃŨÑÎËáµ÷ÖÁPH4~5£¬¾«ÖÃ1hr,³éÂË¡£ÂËÒº ³Áµí£¨´ÖÆ«¶¡£©Öؽᾧ½«³ÁµíÐü¸¡ÓÚÕôÁóË®ÖУ¬¼ÓÈÈÖó·Ð15min£¬³ÃÈȹýÂ˲ÐÔü ÂËÒº³ä·Ö¾²Öúó¹ýÂË£¬60~70¡æϸÉÔ﫶¡£¨¾«ÖÆ·£© 2、薄层色谱鉴别（糖的纸色谱鉴定）点样：取新华一号滤纸，15 厘米长，宽度按需要决定。

用毛细管点上以下溶液：1、水解浓缩液 2、葡萄糖(Rf0.18)对照品溶液 3、鼠李糖 (RfO.37)对照品溶液展开：用正丁醇一醋酸一水(4：1：5) 上行展开显色：喷苯胺-邻苯二甲酸试剂，于 100℃加热 5 分钟 1、简述碱溶酸沉法的原理2、芸香苷水解时为何会出现沉淀——澄清——沉淀的现象3、怎样确定芦丁结构中糖基是连接在槲皮素 C3-OH 上?第二章 大黄中游离蒽醌成分的提取、分离和鉴定 1、掌握 PH 梯度萃取法的原理和操作技术2、掌握柱色谱法分离精制大黄酚的实验方法3、掌握羟基蒽醌类化合物的理化性质及鉴定方法1、PH 梯度萃取法的原理和操作技术2、柱色谱法分离精制大黄酚的实验方法3、羟基蒽醌类化合物的理化性质及鉴定方法实验三 大黄中蒽醌类化合物的提取作者：杨明利 天然药物化学实验（本科）讲稿 实验四 虎 杖 粗 粉9 5 % 乙 醇 回 流 三 次 , 滤 过滤 液药 渣减 压 回 收 乙 醇 至 干膏 状 物加 水 2 0 m l , 乙 醚 1 0 0 m l , 充 分 振 摇 后 放 置 , 倾 出 醚 层 ,再 加 5 0 m l 乙 醚 振 摇 , 放 置 , 倾 出 醚 层 , 同 法 操 作 五 次 .醚 层 І ( 总 游 离 蒽 醌 ) 剩 余 物 ( 含 苷 类 )大黄中游离蒽醌的分离及鉴定1、化学检识：分别取大黄素、大黄酚等少许，用乙醚溶解，做如下反应：A．碱液试验：取试液 1ml，加 20%NaOH 数滴，观察颜色。

B．醋酸镁反应：取试样 1ml，加醋酸镁试剂数滴，观察现象2、薄层鉴定：吸附剂：硅胶 G－CMC-Na 板展开剂：石油醚（30~60℃）-乙酸乙酯- 甲酸(15：5：1) 上层溶液显色剂：（1）氨蒸气熏 （2）5%KOH 喷雾[实验说明及注意事项](1) 在乙醚提取过程中，如乙醚挥发，可酌量补加2) 加 HCl 酸化时产生大量 CO2 气体,小心防止气体产生时，内容物溢出1、P醚 层 І5 % N a H C O 3 液 萃 取 完 全乙 醚 层5 % N a H C O 3 液沉 淀 物强 酸 性 成 分大 黄 素 结 晶6 N H C l 调 P H 至 2 ,稍 放 置 , 滤 过水 洗 至 中性 , 干 燥5 % N a 2 C O 3 液 萃 取 完 全5 % N a 2 C O 3 液 乙 醚 层浓 H C l 调 P H 至 2 ,放 置 , 滤 过滤 液沉 淀水 洗 至 中 性 , 抽干 , 干 燥 , 依 次 以丙 酮 、 甲 醇 重结 晶2 % N a O H 萃 取 4 ～ 5 次N a O H 液沉 淀 物乙 醚 层( β - 谷 甾 醇 )H C l 调 P H 至 3 ,放 置 , 抽 滤水 洗 至 中 性 , 抽 干 ,干 燥 , 以 M e O H -C H C l 3 重 结 晶大 黄 酚 和 大 黄 素 - 6 - 甲 醚混 合 物H 梯度萃取法的原理是什么?适用哪些中药成分的分离?作者：杨明利 天然药物化学实验（本科）讲稿 2、大黄酚、大黄素和大黄素-6-甲醚酸性及极性强弱，应如何排列 ?3、根据虎杖中所含羟基蒽醌的结构，说明为什么它们可以分别被不同强度的碱性水溶液提取出来？第八章 天然药物化学成分的预试验 1、掌握植物主要成分试管预试及纸色谱、薄层色谱预试的一般方法。

2、了解未知成分的植物怎样进行初步分离，根据各类化合物的性质，判断该植物应含有什么类型的成分1、药物化学预试验的意义2、药物化学预试验的操作流程实验十五 天然药物化学成分的预试验一、样品液的制备液1、水提取液取样品粉末 10g(过 20 目筛)，加水 10 倍量，室温浸泡过夜，滤取部分滤液，供检查氨基酸、多肽、蛋白质剩余滤液和滤渣在 60℃水浴中加热 10 分钟～1 小时，过滤，滤液供检查糖、多糖、皂苷、苷类和鞣质、有机酸盐、生物碱盐等2、乙醇提取液乙醇提取液可供黄酮、蒽醌、苷类、生物碱、有机酸、鞣质、香豆精、萜类、甾类及内脂化合物等项的检查提取方法如下：二、各类成分的检查（一）氨基酸、多肽、蛋白质的检查l、加热沉淀试验 取检液，加热至沸，如出现浑浊或沉淀时，表明有蛋白质；加入 5％硫酸溶液也能出现沉淀2、茚三酮试验(Ninhydrin) 取检液，加入 0.2％茚三酮的水溶液后，在沸水浴上加热 5 分钟，冷后，如有蓝或蓝紫色反应，表明含有氨基酸、多肽、或蛋白质；或将试液滴在滤纸片上，加入或喷洒 0.2％印三酮溶液后，在 100℃左右烘烤 2 分钟．如有氨基酸和肽则呈现紫红色或蓝色斑点，也有少数氩基酸呈黄色斑点。

二）糖、多糖的检查α-萘酚试验(Molish 反应) 取检液．加热浓缩，使溶于乙醇中，再加等体积的 10％α－萘酚乙醇溶液，摇匀，沿管壁滴加浓硫酸，二液界面处产生紫红色环，表示有糖、多塘、苷类三）酚类成分的检查三氯化铁试验 取检液，加入 l％三。