常用几种感触态区分.docx

常用几种感触态区分常用几种感受态区别常用大肠杆菌感受态JM109，DH5a，BL21得区别1：DH5a菌株DH5a是一种常用于质粒克隆得菌株 E.coliDH5a在使用pUC系列质粒载体转化时，可与载体编码得半乳糖苷酶氨基端实现互补 可用于蓝白斑筛选鉴别重组菌株 基因型：F-，80dlacZM15，(lacZYA-argF)U169，deoR，recA1，endA1，hsdR17(rk-，mk+)，phoA，supE44，-，thi-1，gyrA96，relA12：BL21(DE3)菌株该菌株用于高效表达克隆于含有噬菌体T7启动子得表达载体（如pET系列）得基因 T7噬菌体RNA聚合酶位于噬菌体DE3区， 该区整合于BL21得染色体上 该菌适合表达非毒性蛋白 基因型：F-，ompT，hsdS（rBB-mB），gal，dcm（DE3）3：BL21(DE3)pLysS菌株该菌株含有质粒pLysS，因此具有氯霉素抗性 PLysS含有表达T7溶菌酶得基因，能够降低目得基因得背景表达水平，但不干扰目得蛋白得表达 该菌适合表达毒性蛋白和非毒性蛋白。

基因型：F-，ompThsdS（rBB-mB），gal，dcm（DE3，pLysS，Camr4：JM109菌株该菌株在使用pUC系列质粒载体进行DNA转化或用M13phage载体进行转染时，由于载体DNA产生得LacZa多肽和JM09编码得LacZM 15进行互补，从而显示半乳糖苷酶活性，由此很容易鉴别重组体菌株基因型：recA1，endA1，gyrA96，thi1，hsdR17，supE44，relA1，（lacproAB）/FtraD36，proAB+，lacIq，lacZM155：TOP10菌株该菌株适用于高效得DNA克隆和质粒扩增，能保证高拷贝质粒得稳定遗传 基因型：F-，mcrA(mrr-hsdRMS-mcrBC)，80，lacZM15，lac74，recA1，ara139(ara-leu)7697，galU，galK，rps，(Strr)endA1，nupG6：HB101菌株该菌株遗传性能稳定，使用方便，适用 于各种基因重组实验基因型：supE44，hsdS20（rB-mB），recA13，ara14，proA2，lacY1，galK2，rpsL20，xyl-5，mtl-1，leuB6，thi-17：M110或SCS110大多数大肠杆菌菌株中含有Dam甲基化酶和Dcm甲基化酶，前者可以在GATC序列中腺嘌呤N-6位上引入甲基，后者在CCA/TGC序列得第一个胞嘧啶C-5位置上引入甲基。

常用得菌株都会产生dam,dcm，从而受到甲基化得影响.部分限制性内切酶对甲基化得DNA不能切割，如FbaI和MboI等，一般生物公司提供得内切酶说明中均有说明 大多数酶切位点得甲基化不影响切割，而有些会影响，如X baI,BclI等 而且甲基化只发生在特定序列，以XbaI为例，只有在位点序列旁出现GA或TC，该XbaI位才会被甲基化 而要解除这种限制修饰作用通常有两种方式：（1）选用上述酶得同功酶，如Sau3AI，DNA识别切割位点与MboI相同；但不受甲基化影响；（2）利用甲基化酶缺失得受体细胞进行DNA得制备，如E.coliJM110和链霉菌等，前者Dam和Dcm甲基化酶已敲出，而后者细胞内本就没有甲基化酶，从这些细胞中抽提得DNA就能被上述酶切割 8：E.coliJM110要排除dam,dcm甲基化得影响，需要用特定得dam-,dcm-得菌株，如JM110如果由JM110或SCS110等 甲基化缺失得菌株产生得质粒，则不会被甲基化.各种感受态细胞得区别用途特征Xl1-Blue菌株基因型：endA1gyrA96(nalR)thi-1recA1relA1lacglnV44FTn10proAB+lacIq(lacZ)M15hsdR17(rK-mK+)。

特点：具有卡那抗性、四环素抗性和氯霉素抗性 用途：分子克隆和质粒提取 BL21(DE3)菌株基因型：FompTgaldcmlonhsdSB(rB-mB-)(DE3lacIlacUV5-T7gene1ind1sam7nin5) 特点：该菌株用于以T7RNA聚合酶为表达系统得高效外源基 因得蛋白表达宿主 T7噬菌体RNA聚合酶基因得表达受控于噬菌体DE3区得lacUV5启动子，该区整合于BL21得染色体上 该菌适合于非毒性蛋白得表达 用途：蛋白质表达 BL21(DE3)ply菌株基因型：F-ompTgaldcmlonhsdSB(rB-mB-)(DE3)pLysS(cmR) 特点：该菌株带有pLysS，具有氯霉素抗性 此质粒还有表达T7溶菌酶得基因，T7溶菌酶能够降低目得基因得背景表达水平，但不干扰IPTG诱导得表达 适合于毒性蛋白和非毒性蛋白得表达 用途：蛋白质表达DH5菌株基因型：F-endA1glnV44thi-1recA1relA1gyrA9 6deoRnupG80dlacZM15(lacZYA-argF)U169,hsdR17(rK-,特点：一种常用于质粒克隆得菌株。

其80dlacZM15基因得表达产物与pUC载体编码得-半乳糖苷酶氨基端实现互补，可用于蓝白斑筛选 recA1和endA1得突变有利于克隆DNA得稳定和高纯度质粒DNA得提取 用途：分子克隆、质粒提取和蛋白质表达 JM109菌株基因型：endA1glnV44thi-1relA1gyrA96recA1mcrB+(lac-proAB)e14-FtraD36proAB+lacIqlacZM15hsdR17(rK-mK+) 特点：部分抗性 缺陷，适合重复基因表达,可用于M13克隆序列测定和蓝白斑筛选 用途：分子克隆、质粒提取和蛋白质表达 DH10B菌株基因型：F-mcrA(mrr-hsdRMS-mcrBC)80dlacZM15lacX74endA1recA1deoR(ara,leu)7697araD139galUgalKnupGrpsL-ThemostwidelyusedE.colistrainforBACcloningisDH10B hostforpUCandother-complementationvectors;pBR322usefulforgenera。

tinggenomiclibrariescontainingmethylatedcytosineoradenineresidues，usefulforplasmidrescueprocedures ELECTROMAXDH10BT1CELLS说明：DH10B细胞是高转化效率得E.coli，可以完美应用于大多数实验应用 DH10B基因型具有以下特点：?lacZM15用于重组克隆得蓝/白斑筛选?消除了mcrA、mcrBC、mrr和hsdRMS限制系统，允许构建更多具有代表性得基因组(1,2)?endA1突变，可以增加质粒产量和数量?高效率转化大小为150 kb得质粒，用于产生cDNA或基因组DH10B?可以表达tonA得基因型，tonA能够提供对T1和T5噬菌体感染得抗性(DH10B?T1R) DH10B?得基因型：FmcrA(mrr-hsdRMS-mcrBC)80lacZM15lacX74recA1endA1araD139(ara,leu)7697galUgalKrpsL(StrR)nupGDH10B?T1R得基因型：FmcrA(mrr-hsdRMS-mcrBC)80lacZM15lacX74recA1endA1araD139(ara,leu)7697galUgalKrpsL(StrR)nupGtonA。

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