分光光度计性能检查.docx

1、分光光度计的性能检查（1）波长校正：使用光电比色计或分光光度计，在更换光源灯、重新安装、 搬运或检修后，以及仪器工作不正常时，都要进行波长校正就是正常工作的仪 器，每隔一个月也要检查一次波长，必要时进行校正，这样才能保证波长读数与 通过样品的波长符合，保证仪器的最大灵敏度方法常用谱钕滤光片校正法，适 用于721型仪可见光区的波长校正，常以585nm或529nm处的吸收峰或T%为标 准鉴于721型仪器的出射光波长较宽，不易将573nm和585nm的两峰或两谷分 开，校正时易产生误差，故推荐用529nm处的峰或谷为标准来进行波长校正校 正时，将仪器按要求预热要求电源电压稳定波长度盘置580nm处，T%调至最 大，在比色杯处放一白纸条，观察是否有光强均匀、边缘无光晕或杂光的光斑， 如不符合要求，可调节灯泡位置使其符合要求，是为波长校正的粗调再把灵敏 度扭置于“ 1”（最低档），波长度盘对准529nm，电表机械零点为零，在光路 空白时调T%为100%T,并反复查零点和100%T稳定情况将谱钕滤光片插入光路， 慢慢旋转波长度盘，找到透光率最低的一点（向左右微旋波长度盘时，该点透光 率值均增加），这一点即为波长529nm。

检查波长度盘的指示值是不是529nm， 如指示值为534nm，此时波长工误差为5nm，超出规定（土 lnm）必须进行调整调整方法：将波长度盘对准529nm，从光路取出谱钕滤光片，光路空白时调 电表指针到100%T，再将谱钕滤光片插入光路打开仪器左侧小盖板，找到波长 校正螺丝（3 个中左侧柄长的一个）；反时针方向微微调节（负误差时顺时针方 向），使电表指针的指示T%为最低反复检查波长误差情况，直到符合仪器技 术指标为止盖好左侧小盖板，校正结束有些高档仪器如岛津UV-260型双光束分光光度计，可使用氢灯或置谱钕滤 光片于测定比色槽内，编入滤工扫描程序后，仪器即可自动地在一定波长范围内 进行波长校正高档分光光度仪的光学系统密封在一个单元组件内，若发生故障， 波长不准，常须请制造商派专人修理其它尚有谱线校正法、干涉滤光片校正法 和有色溶液校正法等，可参考有关资料2）线性检查：线性检查包括仪器线性及测定方法线性两个方面的检查 线性误差表现为溶液的浓度与吸光度不成线性关系，出现正偏离或负偏离的现 象这种偏离，按比耳定律的现象来自两个方面：一是溶液本身不符合比耳定律， 这种现象叫做化学偏离；二是仪器本身各种因素的影响，使吸光度测定值与浓度 之间不成线性关系，这种现象叫仪器偏离。

此处研究的是后者仪器偏离的因素 很多，如杂光、有限带宽、检测器噪声、环境条件变化、波长的变动、比色杯的 误差、辐射光的非平行性、检测器本身的非线性等仪器线性检查常用一种在一定波长及一定浓度范围内确知其服从比耳定律 的有色物质，配成不同浓度的溶液，来检查仪器本身是否能如实地反映有色物质 的浓度变化这种检查方法与任何被测物质呈色反应等方法学上的问题无关用 测得的吸光度对浓度作图，在理想情况下应是一条直线常用的方法是用 0.8、 1.6、2.4、4.0mg/L伊文蓝浓度系列来检查，波长用610nm3）杂光（散光）检查：在吸光度测定中，凡检测器感受到的不需要的辐 射都称为杂光杂光对吸光度测定法的准确性有严重的影响，但却往往被忽视 杂光的来源有：①仪器本身的原因，如单色器的设计、光源的光谱分布、光学原 件的老化程度、波带宽度以及仪器内部的反射及散射等；②室内光线过强而漏入 仪器，仪器暗室盖不严；③样品本身的原因，如样品有无荧光、样品的散射能力 强弱等杂光检测方法：①紫外光区的杂光监测可用10±0.1g/L的碘化钠溶液，在 240nm处测定的吸光度应大于2.00此外，也可用12g/L的氯化钾溶液，在220nm 处测其透光度，即为杂光量，一般应小于1%T。

以上测定均用石英杯，以蒸馏水 校零②在可见光区可使用谱钕滤光片或硫酸镍法检查先用谱钕滤片校正波长， 然后用黑纸片挡住比色杯光路（进口仪器带有比色杯样黑色标柱）之后调整 0%T， 再用空气做空白调100%T插入谱钕滤光片，在585nm处测定，其测定值即为杂 光水平4）比色杯的质量检查：比色杯一般由玻璃、石英或荧石制成，光径1.0 或0.5cm，光线通过时有一部分光为空气与玻璃接触面的反射而损失（4%），另 一部分（很少）为玻璃吸收比色杯的质量除其原料外，再就是玻璃的厚度均匀， 上下一致，各杯彼此相配厂家多以四个一套供应，且杯口上部外面标有箭头， 箭头对光源侧使用尽管如此，在使用前还是应作质量检查常用伊文蓝法：将 一定量的2.0mg/L的伊文蓝溶液注入比色杯中，比色杯内液面应相等用一个比 色杯作标准，用红色滤光片（波长600〜610nm），用水校零后将此杯的读数准 确调至50%T，接着读取其余杯的透光度透光度相差在土0.5%T范围内者为合格5） 稳定性检查：检查方法：将分光光度计及附件接于0.5kVA以上的可调 变压器，先调电压为220V，波长固定在650nm，在光路比色杯装以空白液，调读 数为90%T处，再将电压升至230V及降至190V，观察透光度的漂移值。

若介于 88.5%〜91.5%T之间为合格在电源电压不变的条件下，在3分钟内其读数漂移 不应超过标尺上限值的±0.5%6） 重复性检查：在波长、工作状态、电源电压、比色杯配套等合格的前 提下，进行重复检查在用交流电源供电时，仪器对一种溶液重复测定的读数值 差应小于或等于标尺上限值的1%试验方法：将分析纯重络酸钾于120〜150摄 氏度烘干2小时，干燥器中冷却精称509.1mg于1000ml容量瓶中，以蒸馏水 溶解并加至刻度，混匀（此液180mg/L铬）就用液为30、60、180mg铬/L取 波长440nm，将应用液各浓度管连续测3〜5次，各浓度管中最大误差小于1%T 为合格7）灵敏度检查:将重铬酸钾液配制成30和32.5mg铬/L及120和122.5mg/L 铬的4种应用液（浓度差两组各为2.5mg/L铬）波长440nm，以水校零点，将 上述应用液连续测 3 次吸光度，两组 2.5mg/L 铬浓度差的吸光度值差都不小于 0.01 为合格2、分光光度计日常工作状态监测在可见光区范围内，用一种有色溶液检查 仪器是否处于较好的工作状态（包括波长、杂光水平等），常用硫酸镍水溶液该液在400〜700nm之间有吸收峰，峰值在510nm。

检查时，在400、460、510、 550及570nm处测定硫酸镍溶液的透光度值，记录并保存待一定时间后用该溶 液再检测比较前后两次的数据，即可知仪器的工作状态硫酸镍溶液的制备：将硫酸镍溶于0.1%的硫酸中，用量的多少以在510nm 测得的透光度达80%T为准，以0.1%硫酸校零点，配好后密封备用监测的意义：在400、700nm处的测定可以监测杂光，这些波长处的测定值 升高说明杂光增加，其中任一值增加3%就需要进行检修510nm处的测定值可以 监测带宽，这个波长的测定值减小说明带宽加大光源强度减弱或波长不准可以 产生这种结果，如降低2%T，对于带宽为20nm的仪器就需要修理460与550nm 处的读数主要作为监测波长之用，称二次波长校正这两个波长的读数相互关联， 一个升高另一个就降低如460nm的测定值（透光度）降低，而550nm的测定值 升高，说明透过比色杯样品的波长小于波长度盘指示的波长（图16-2左）反 之，如 460nm 的测定值升高，而 550 的测定值降低，说明透过比色杯样品的波长 大于波长度盘指示的波长（图16-2右）400 460 510 550 TOO (nm) 400 4W 510 550 700 (nm)图 16-2 硫酸镍溶液监测仪器工作状态实线代表波长正确时的吸收光谱，虚线代表波长不正确时的吸收光谱。

箭头 1表示510nm处的透光度，左右图均下降；箭头2表示460nm处的透光度，左图 下降，右图升高，箭头3表示550处的透光度，左图升高，右图下降仪器工作状态测定后，若波长与杂光符合要求时，记录并保存各项数据，以 备以后测定时对比一般应每月监测一次，当400nm及700nm处杂光增强时，可 能的原因包括：①激发光源陈旧，变黑或表层模糊不清②透镜有灰尘③色散 元件失效等如510nm处透光度减弱，可能原因为光源灯丝故障，比色池出光缝 失灵或光栅损坏。