肺气与胸膜免疫关系的实验研究——胸膜间皮细胞的体外培养.pdf

陕西中医学院 硕士学位论文 肺气与胸膜免疫关系的实验研究——胸膜间皮细胞的体外培养 姓名：苏咏梅 申请学位级别：硕士 专业：中医基础理论 指导教师：金志甲;何建升 20040501 陕西中医学院硕士研究生毕业论文 通过祖国医学对肺脏与免疫相关性的认识及现代医学对胸膜生理功能、病理 变化的论述，提出了“肺气与胸膜免疫相关性”的理论假说；通过对组织和细胞 体外培养方法、培养优势的论述，为胸膜组织的体外培养提供了理论依据本实 验从胸膜组织的体外培养入手，采用常用的两种体外培养方法：组织块法和酶消 化法观察胸膜间皮细胞的体外培养生长情况实验结果显示：在现有的实验室条 件下，采用组织块法培养的胸膜组织在培养一周后形成卵圆形的单分子细胞群 关键词：肺免疫 胸膜间皮细胞体外培养实验研究 陕西中医学院硕士研究生毕业论文 瓣黼麟 A c c o r d i n g t oT r a d i t i o n a lC h i n e s e M e d i c i n e ，T h er e l a t i o n s h i po f t h e l u n g a n dt h ei m m u n i t y s y s t e m i ss y s t e m a t i c a l l y s u m m a r i z e d ．A c c o r d i n g t om o d e m m e d i c i n e ，t h ep h y s i o l o g ya n dp a t h o l o g yo f p l e u r aa r ea l s o d i s c u s s e d ．T h et h e o r y h y p o t h e s i so fp l e u r ai m m u n i t y i sb r o u g h tf o n l l ． A c c o r d i n g t ot h ed i s c u s s i o no f t h e w a y a n dt h ep r e d o m i n a n c eo f C e l l c u l t u r ei n v i t r o ，t h et h e o t yb a s i so f P l e u r a lM e s o t h e l i a lC e l lc u l t u r ei n v i t r oi So f f e r e d ．T h ec u l t u r ec o n d i t i o no f t h eP l e u r a l M e s o t h e l i a lC e l li n v i t r oi ss t u d i e d b y t w o w a y s ．T h e r e s u l ts h o w sm a tt h eP l e u r a l M e s o t h e l i a lC e l lC a nb ec u l t u r e d s u c c e s s f u l l yb y t h e w a y o f t h e e x p l a n t c u l t u r eu n d e rt l l ec o n d i t i o no f t h e e x p e r i m e n t l a b ． k e yw o r d s ：L u n g ，I m m u n i t y , C u l t u r eI nV i t r o ， 2 P l e u r a lM e s o t h e l i a l C e l l ， E x p e r i m e n tS t u d y 陕西中医学院硕士研究生毕业论文 H U 舌 在科学迅遮发展的今天．中医学的研究已经突破了长期以来以缀典校液、引证、 袭挥为主的传绕模式，雨是汲取了琥代罴学和诸多学稀豹技零、方法、磷究成暴帮 爨维模式，在峨瘫实践和实验研究中取德了巨大成绩。

中医溅象学说是中暇学理论 体系的核心组成部分，它是研究人体脏腑生理功能，瘸理变化及脏腑相互关系的学 说，其独特之处表现在中医学所说的脏腑不仅仅是一个解裁学的概念，更灌要的楚 一个瘸璞生理学攘念中嚣学豹瓣箨蓦露瑰钱嚣紫豹薤嚣名称缀辐同，惶其生理及瘸 理的涵义却不兜全相同，中医学一个脏腑的功能可能龟括现代医学几个脏器，而现 代医学一个脏器的功能又常分属于中医学的几个脏腑从现代医学的角度来看，中 隈学的簿～个脏腑都楚多系统多葫髓静单位，荚孛氢禽7 大爨匏隶躲因素 麟魅是中医藏象学说教莛要内容之一中联学认为，肺脏在发挥其生理功熊的 同时，也发挥着强有力的抗病御邪作用现代医学研究证实，肺脏作为一个多元性 的功能单位与现代免疫学密切相关胸朕是包囊于肺表面的～层浆膜，裰豳医学把 嚣滚耱各耱不磊爨冬动裁活魂议“气”寒表这露瓣貘包裹予黥簸癸覆，吴鸯撼动黪脏 完成呼吸运动的功能，从中医学角度来讲，胸膜的这一功能成归属于“肺气”的范 畴．肺气抗病御邪，关系到机体正气的藏衰，岛现代免疫学密切相关 据魄，导师金志甲教授觚中隧学角魔出发，并结会瑷钱簇学理论，提出了“舞 气与黢骥免疫棚关性”的理论稷谈如果瑕说成立，不仅可必现代免疫学增添掰的 内容，而且对丰富中医藏象理论，研究中医肺脏的实质乃至摊动中医学理论的深入 研究都将具有积极意义。

要解决这一问鼷首先必须弄清楚胸膜间皮细胞是否产垒激 素或垂窭魏毽予本谍遴运蠲现筏生凌学瓣缀织秘纲魏搭多} 壤券技本，透过辫貘阉发 细胞的体孙分离、培养，为进一步研究胸膜与免疫系统的关系奠定澳孙出；为进一步 研究和解释肺气提供新的依据据初步实验研究发现胸膜培养上清对胸腺细胞自发 ^ 渗入H - T d R 有明显抑制作霸本实验所谶行的胸膜问皮细臆的体辨培养哭楚本谍趱 魏第一除段，炎存在俸多} 臻葬袋窃懿基戳土才疆秀下一步瓣实验磷宠葵窥基礁 陕西中医学院硕士研究生毕业论文 鬻蘩糕 中医学认为肺脏的主要生理功能为主气、司呼吸，宣发卫气，通调水道，朝百 脉，主治节，外合皮毛肺脏在五脏中位置最高，谓为华盖，是唯一能与外界相通 的脏器，其一方面通过口鼻呼吸道和皮毛与自然界相通，另一方面又朝百脉，与全 身的血脉相通因此，外感、内伤等致病邪气，最易伤及肺脏，故称其为娇脏但 是，中医学认为肺脏又是一个充养正气、抗病御邪的重要脏器j 从而能够使机体健 康不病 现代医学研究发现，肺脏确非单纯的呼吸器官，其不但主气，司呼吸，还具有 调节血液循环( 朝百脉) 、协助水液代谢( 通调水道) 及一套复杂的免疫防御功能( 卫 外) “3 。

特别是肺主气，司呼吸、肺宣发卫气、通调水道、外合皮毛等生理功能的 发挥，在机体抵抗细菌和病毒感染中起着一定的作用肺脏抗病御邪的作用与现代 免疫学密切相关 从现代解剖学的角度来讲，胸膜是包裹在肺脏表面的一层浆膜，在祖国医学中， 对胸膜尚无记载，但把由于机体感受外邪导致肺失宣降、通调失常、水不运化，结 聚胸膈引起的饮停胸胁证归属于“悬饮”的范畴祖国医学对“悬饮”的记载与论 述与现代医学中由于胸膜病变引起的胸腔积液的论述具有相似之处要探讨胸膜与 免疫作用的关系，应从胸膜入手，利用现代生物学组织和细胞体外培养技术，通过 胸膜组织的体外分离和培养、通过胸膜间皮细胞与免疫系统相互作用关系的实验研 究，来验证胸膜具有免疫作用的理论假说 1肺脏与免疫相关性的研究 1 ．1肺的生理功能与免疫相关性的研究 肺脏的生理功能主要表现为：一是主持一身之气的生成、输布，尤其是宗气 的生成《素问·五脏生成》日：“诸气者皆属于肺”，说明全身之气皆隶属于肺， 由肺所主肺主气功能的正常与否可直m 一响全身之气所谓肺主全身之气，系指 肺有呼吸自然之清气及总督一身之气的作用，这种功能主要取决于肺气宣肃的正常 4 陕西中医学院硕士研究生毕业论文 与否。

若肺气充足，主一身之气的功能可良好地发挥，人体正气旺盛，邪气不易侵 入而为病；若肺气虚弱，呼吸功能障碍，一身之气生成不足，人体正气衰弱、防御 卫外功能下降，邪气乘虚侵袭而为病气是构成人体的重要组成部分，脏腑组织的 功能活动、血液的循环、水液的代谢，无一不与气的功能有关，肺主全身之气，所 以肺气在人体中起着举足轻重的作用，是机体多种功能的综合表现现代医学指出， 肺是机体内重要的免疫器官之一，肺内的多核粒细胞和肺泡巨噬细胞发挥着重要的 非特异性防御机能，而呼吸道的淋巴细胞也起着重要的免疫防御作用“1 肺的免疫 功能与其解剖学结构有密切关系，首先是呼吸道黏膜中含有浆液腺和粘液腺，呼吸 道粘膜上皮的粘液纤毛机械防御、细胞免疫、体液免疫功能是人体抵抗致病微生物 侵袭的主要屏障之一“肺泡有大量的巨噬细胞，含有多种蛋白水解酶和过氧化物 酶，有巨大的消化和吞噬功能，起着组织免疫的作用“许多临床及动物实验报道 都表明，肺气虚证患者或动物鼻分泌物、唾液、气管灌洗液中细胞及体液免疫功能 显著下降，鼻腔及气管粘膜廓清功能受损，说明上、下呼吸道免疫防御功能都显著 下降，这正是卫外不固、反复上感的根本原因王元勋”’等研究发现肺气虑证的细 胞免疫功能和体液免疫功能均有降低。

童氏“1 等观察到肺气虚患者血清免疫球蛋白 水平低下李氏㈣观察4 0 例肺气虚患者血清干扰素活性显著低于健康人杨氏嘲等 观察到“肺气虚证”s D 大鼠模型免疫球蛋白I g M ，I g G 均显著低于对照组， 二是肺朝百脉全身的血液均通过百脉而聚会于肺，通过肺的呼吸进行气体交 换，然后再通过百脉输布到全身，从而辅佐心推动和调节着血液的运行只有肺朝 百脉的功能正常，气血津液才能环流全身，周而复始肺除去助心行血外，还嗣随 滤和消化有害物质，净化血液的器官肺有丰富的毛细血管床能清洁过滤血液，阻 止有害物质侵害机体，并能通过抗凝和保凝机制，维持皿液的可流动性，保持新鲜 血液在周身的运行网 三是通调水道肺通过宣发、肃降的运动对体内津液的输布、运行和排泄有疏 通和调节作用津液是人体正常水液的总称，包括各脏腑组织的内在体液及其正常 的分泌物，如胃液、肠液、涕、泪、唾等津液广泛存在于脏腑、形体、官窍、组 5 陕西中医学院硕士研究生毕业论文 织器官，是构成和维持人体生命活动的基本物质，津液在疾病的发生、发展及预后 转归中发挥着重要的抗病作用关于津液的抗病作用，早在《内经》中就有认识， 《灵枢·邪气脏腑病形》说：“天寒则裂地凌冰，其卒寒或手足懈惰，然其面不衣， 何也? ⋯‘乃其气之津液皆上熏于面，”‘故天气甚寒不能胜之也。

温病学家直接指 出，“存得一分津液，便有一分生机肺通过口鼻呼吸道与外界相通，涕为鼻腔分 泌物，中医学认为乃肺津所化现代研究证实，涕液含有免疫球蛋白( 如血清I 啦， I g G ，s I g A ) 、溶菌酶、干扰素等多种免疫物质，呼吸道痰液中也含有免疫物质s I g A , I 蛹， 等，具有消灭细菌及中和病毒的作用1 1 0 】肺气虚型慢性单纯性鼻炎患者免疫功能明 显低于正常人 四是宣发卫气肺宣发卫气是指通过肺气的宣发，将卫气布散到全身，敷布于体 表，以发挥其护卫肌表、温养脏腑、肌肉、皮毛、调节控制腠理开合的作用卫气 依赖肺气的宣发构成了一道抗御外邪入侵的坚固屏障《灵枢·本藏》说：“卫气者， 所以温分肉，充皮肤，肥腠理，司开阖者也⋯卫气和则分肉解利，皮肤调柔，腠理 致密矣明·孙一奎在《医旨绪余·宗气营气卫气》中认为：“卫气者，为言护卫 周身，温分肉，肥腠理，不使外邪侵犯也对比现代医学可知，卫气的这种功能相 当于现代免疫学的抗感染免疫功制儿J 在《内经》理论蒸础上，学者们【1 2 ’1 q 己清楚 地认识到卫气是人体内具有抗御外邪、免除病邪从肌表入侵人体及人体能够主动适 应自然界变化的基础，卫气的这一防御作用与机体免疫系统有着惊人的相似。

卫气 昼行于阳，夜行于阴《灵枢·营卫生会》说：“卫气行。