病毒基因组DNA提取试剂盒使用说明书.doc

病毒基因组 DNA 提取试剂盒Virus Genomic DNA Kit(目录号：HS0307)产品包装试剂盒成分 50 preps Buffer GB 15 mlBuffer GD 30 mlBuffer PW 60 mlBuffer EB 10 mlProteinase K 1 mlSpin Columns CG* 50个Collection Tubes (2 ml) 50个自备试剂无水乙醇储存条件蛋白酶 K于-20℃，其他组分室温（15 ~ 25℃）产品简介本试剂盒适用于从新鲜或冷冻的血浆、血清和无细胞体液中提取高质量的病毒 DNA无需使用苯酚、氯仿等有机溶剂抽提，独特的缓冲液/蛋白酶 K体系能迅速裂解病毒，使病毒蛋白与 DNA分离，在蛋白酶 K的作用下降解病毒蛋白，在高盐状态下将病毒 DNA选择性吸附于硅基质膜上，再通过快速的漂洗、离心步骤，去除蛋白等杂质，最后低盐的洗脱缓冲液将高纯度的病毒 DNA从吸附柱膜上洗脱下来本试剂盒操作简单、快速，所得病毒 DNA不含蛋白、核酸酶和其他杂质，可直接用于PCR、RT-PCR、Real-Time PCR、印迹等分子生物学实验产品特点1.简便快速，1 小时内可获得高纯度的病毒基因组 DNA。

2.无需有机溶剂抽提，使用安全3.重复性好，产量高北京厚生博泰科技有限公司Beijing Hooseen Biotech Co., Ltd.4.所得病毒 DNA纯度高，无污染物和抑制剂，方便下游应用注意事项1.血清或血浆避免反复冻融，否则会使蛋白变性或产生沉淀，导致提取的 DNA 片段小，提取量下降2.如缓冲液 Buffer GB、Buffer GD 结晶或产生沉淀，可在 56℃水浴溶解3.所有离心步骤均为室温下操作操作步骤1. 取 1.5 ml 离心管（自备） ，加入 20 ul 的 Proteinase K 溶液2. 向离心管中加入 200 ul 血清或血浆，然后再加入 200 ul Buffer GB，涡旋震荡 15 sec注意：1、样本体积不足 200 ul 可以加入 0.9% NaCl（自备）补足2、为确保样本有效裂解，加入Buffer GB 后，需将样本与 Buffer GB 充分混匀 ）3．56℃孵育 15 min，短暂离心，将管壁上的溶液收集到管底4. 加入 250 ul 无水乙醇，涡旋震荡 15 sec，室温放置 5 min，短暂离心，将管壁上的溶液收集到管底注意：如果环境温度超过 25℃，无水乙醇应在冰上预冷后使用。

)5．将一个 Spin Columns CG*放入 Collection Tubes(2 ml)中，将上一步所得溶液转移到离心吸附柱中，10 000 rpm 离心 30 sec，弃收集管中的废液6. 向吸附柱内加入 500 ul 的 Buffer GD，室温 10 000 rpm 离心 30 sec，弃收集管中废液注意：Buffer GD 中含有乙醇，用后及时盖紧，以防乙醇挥发）7. 向吸附柱内加入 500 ul 的 Buffer PW，室温 10 000 rpm 离心 30 sec，弃收集管中废液注意：如需进一步提高 DNA 纯度，可重复步骤 7 一次Buffer PW 中含有乙醇，用后及时盖紧，以防乙醇挥发）8．向吸附柱中加入 500 ul 无水乙醇，10 000 rpm 离心 30 sec，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中9．室温 12 000 rpm 离心 3 min，甩干残留液体注意：此步不能省略，否则残留乙醇会影响质粒的后续使用）10. 将离心吸附柱置于一个新的 1.5 ml 塑料离心管（自备）中，小心打开吸附柱的盖子，室温放置 3 min，使吸附膜完全变干加入 30 ~ 100 ul 的洗脱液，室温放置 2 ~ 5 min。

12 000 rpm 离心 1 min，离心管底溶液即病毒 DNA注意：为增加洗脱效率，可将洗脱液在 50 ~ 60℃预热如需使用去离子水洗脱，可用 NaOH 调整其 pH值在 7.0 ~ 8.5 之间，为了增加 DNA 回收率，可将得到的溶液重新加入到离心管中，室温放置 2 min，再次离心收集）。