ge离子交换层析柱protocol.docx

GE离子交换层析柱protocol 5ml （举例子）Preparation1. Buffer:（pH根据蛋白的pl进行调整，pH尽量远离plpH>pl,过Q柱；pH>pl,过S柱）A: 50mM Tris-HClB: 50mM Tris-HCl 1M NaCl过滤除杂质，4°C静置过夜除气泡2. Protein:用滤器过滤除质；或者分装于EP管，14000rpm, 4°C离心20min,去除沉淀3 .Prepare enough tubes有流速时，禁止将泵的探头暴露到空气中!!! 柱子在仪器上时，无论何时均要限压!!!Procedure1 打开仪器总开关，电脑检查：泵的探头是否放入纯水中洗泵： Manual--pump--pump basic wash--A on ,B on--insert--execute洗系统： Manual--pump--flow--10ml/min--insert--executeManual--other--End time--volume--40 ml2 安装柱子给流速：Manual--pump--flow--3ml/min--insert--execute（仪器显示系统压力为*Mpa） 限压力： Manual--Alarms--Alarms pressure--+*）Mpa--insert--execute 是 Hitrap Q柱子的最大限压）装柱子：先装上面，再下面，装完后用纸巾擦干，观察是否漏液。

3 清洗柱子限压力：Manual--Alarms--Alarms pressure--+*）Mpa--insert--execute给流速：Manual--pump--flow--1ml/min--insert--execute （低流速下装柱子）Manual--other--End time--volume--10 ml（第一次使用的新柱子或者装有乙醇的柱子，必须先用纯水洗以上CV：柱体积, 其中 Hitrap Q HP5ml 的 CV 是 5ml）停流速： End装溶液：将A泵放入buffer A,将B泵放入buffer B必须在零流速下操作）限压力：Manual--Alarms--Alarms pressure--+*）Mpa--insert--execute低盐洗：Manual--pump--gradient--0%B--insert--executeManual--pump--flow--3ml/min--insert--execute清洗至基线走平（大约需要 20ml） 高盐洗：Manual--pump--gradient--100%B--insert--executeManual--pump--flow--3ml/min--insert--execute清洗至基线走到平低盐洗： Manual--pump--gradient--0%B--insert--executeManual--pump--flow--3ml/min--insert--execute清洗至基线走平停流速： End4 上样品选择合适的上样环，例如 5ml loop.用纯水清洗 loop 三次，再用 buffer A 清洗 loop 三次，赶走气泡；同时清洗上样口将样品置于上样口，用针筒抽吸样品进入loop。

切忌吸入气泡）5 运行程序File--设定的程序--show detail--确认无误--START 特别注意更改压力，上样量大小6 清洗柱子（同 3）限压力（勿忘）--低盐洗--高盐洗--低盐洗最后还要用水洗柱子停流速：End装溶液：将A泵，B泵用水清洗后，放入纯水中必须在零流速下操作水洗： Manual--pump—gr adient--0%B--insert--executeManual--pump--flow--3ml/min--insert--execute清洗 至基线 走平7 卸 柱子限压力： Manual--Alarms--Alarms pressure--+*）Mpa--insert--execute 是 Hitrap Q 柱子的最大限压，*：系统压力）给流速： Manual--pump--flow--1ml/min--insert--execute卸柱子：先卸下面，再卸上面，卸下的柱子置于4C保存低流速下卸柱子）。