(毛细管电泳软件中文使用手册)pace-mdq_32_karat.pdf

P/ACE™ ™ MDQ 32 Karat™软件使用手册™软件使用手册 715089 AC 2004年年1月月 Beckman Coulter, Inc. 4300 N. Harbor Blvd., Fullerton, CA 92834-3100 © Copyright 2004 Beckman Coulter, Inc. Printed in U.S.A. 目 录 目 录 前言前言 总论 示例数据使用介绍 安全信息 毛细管电泳导论毛细管电泳导论 概述 一般说明 电泳常用模式 毛细管区带电泳（CZE） 毛细管胶束电动色谱（MEKC） 毛细管凝胶电泳（CGE） 毛细管等电聚焦（cIEF） 毛细管电色谱（CEC） 毛细管电泳系统组成概述毛细管电泳系统组成概述 样品承载系统 毛细管卡盒 注射泵 高压电源 LED 显示灯 卡盒及托盘盖连锁装置 打开托盘盖 打开卡盒盖 紫外检测器光学结构 二极管阵列（PDA）检测器 激光诱导荧光检测器 激光模块 488nm 激光模块 635 激光模块 将其它激光器与 LIF 检测器相联 启动启动 32 Karat 软件软件 工具条 菜单条 创建和设置仪器 创建一个新仪器 设置一个新仪器 自动设置 设置选项 仪器选项 手动设置 直接控制界面直接控制界面 简介 直接控制窗口 练习：预处理毛细管 新建及编辑方法新建及编辑方法 简介 初始条件表 辅助数据通道 迁移率通道 温度 峰检测参数 触发设置 进口及出口托盘 检测器初始条件 UV 检测器初始条件 电泳谱图通道 滤镜 继电器 1 和继电器 2 吸收信号 PDA 检测器初始条件 电泳谱图扫描数据 滤镜 继电器 1 和继电器 2 参比通道 吸收值信号 电泳谱图通道数据 LIF 检测器初始条件 电泳谱图通道 1 和 2 信号 数据速率 继电器 1 和 2 时间程序 分离 冲洗 进样 自动归零 停止采集数据 结束 系统运行系统运行 单次运行及序列运行 所需材料 单次运行 设计序列 运行序列 积分计算积分计算 引言 积分数据 优化积分 积分参数 积分结果及报告 校正校正 简介 定性分析 定量分析 建立校正曲线 建立校正方法 产生校正曲线 未知物分析 定性分析定性分析 数据分析及报告 使用淌度使用淌度/迁移率迁移率 淌度参照物 指定淌度值 淌度图 演示：使用淌度特征 通过淌度鉴定峰 建立报告建立报告 引言 建立一个方法用户自定义报告 修改报告模板 保存为新报告模板 报告模板 i 前前 言言 总总 论论 32 Karat™软件使用手册将引导您自学操作Beckman Coulter公司P/ACE MDQ 及32 Karat™软件。

手册内容包括毛细管电泳技术简介；MDQ硬件总论；常用软 件部分指南及有用信息附录 此32 Karat使用手册为CE或32 Karat的初学者掌握软件和仪器使用所编写 此手册通过一些设计好的练习带您一步一步了解从哪里入手来编辑一个您自己 的方法，如何产生和分析数据，如何生成数据报告本手册不是一个全面的软件 说明，也不会覆盖毛细管电泳技术的所有方面 在根据说明书将检测器安装好之后的上机操作内容中包括有关于不同的紫 外、二极管阵列和激光诱导荧光检测的使用指引 本手册中的操作指引是步进式的，每一步都是建立在前一步的基础上我们 建议您按顺序执行手册中的活动，以便您可以得到最多的信息 手册中教授的数据再处理、校正和报告内容都是基于紫外检测器得到的数 据不管使用何种检测器这些数据的处理过程都是很相似的，所以无论您使用的 是何种检测器，这些信息对您来说都很重要练习使用的运行后数据已经连同 32 Karat 软件一起装入您的计算机中如果您没有紫外检测器，请在软件中手动 创建一个虚拟的紫外检测系统来进行这些练习 要得到更多的信息，请使用 32 Karat 软件的帮助功能通过点击菜单条 上的 Help 菜单；或在软件运行中按下 F1 键；或当您看到有“Help”显示时，您 可以随时访问帮助信息。

此操作手册由贝克曼库尔特有限公司的技术编辑、科学家和工程师编写我 们期待您的反馈信息，您的建议对我们如何改进我们的下一版手册非常重要 请将你的建议与意见发至 32Karat@ ，并在题名中注明 User Manual练习中的任何问题也都可以发到相同的地址 ii 示例数据使用介绍示例数据使用介绍 在本手册的一些练习中，您将会被要求打开某些特定的数据或方法文件这 些数据和方法都在 Data Samples 文件夹中，当软件安装完毕后，该文件夹就是 32 Karat 的子文件夹下面的信息也包含在“Readme.doc”文件之中，在使用这 些示例数据之前，仔细阅读并理解如下的信息是非常重要的 这一文件夹包括如下文件：这一文件夹包括如下文件： CE Data Sample 1.dat CE Data Sample 2.dat CE Data Sample 3.dat CE Level 1.dat CE Level 2.dat CE Level 3.dat CE Level 4.dat CE Level 5.dat CE PDA Data Sample.dat CE Calibrate.met CE Quantitate.met CE Quality.met CE ssDNA 40-60.dat 示例文件的用途：示例文件的用途： 这些 Data Samples 文件夹中的文件用于使用手册所讲述的练习。

而且只能用于练 习，而不能用于系统的确认或其它目的 文件的使用：文件的使用： 这些示例文件名称与使用手册中相一致 在使用手册的练习部分会要求您打开其 中的一个或多个文件在使用这些文件时，您在电脑上看到的界面会和使用手册 上的一致 重要提示：使用前请拷贝这些文件重要提示：使用前请拷贝这些文件 在 32 Karat 软件中处理这些数据和方法文件会导致这些数据的更改 为了保持这 些数据的原始性以便以后使用，请按以下步骤操作： 1．打开Windows Explorer可右击Start按钮选择Explorer 2．找到Data Samples文件夹，它是文件夹32Karat的子文件夹 3．在Explorer左手边窗格点击打开Data Samples文件夹 4．从Windows顶端菜单条上选择File | New | Folder，就可以在Data Samples中建 立一个新文件夹 “New Folder”是被激活的从而可以编辑名称输入一个新 文件夹名称最好采用练习人的名字作为文件夹的新名称 5．选择除新建立的文件夹的以上所列文件有很多方法选择多个文件可以使 用以下的其中一种： 选择第一个文件，按住Shift键，然后点击最后一个文件，这两个文件之间 的文件都会被选定。

选择一个文件，然后按住Ctrl分别键点击其它文件 采用鼠标拖拽选择多个文件 6．当选择了所有文件以后，选择Edit | Copy双击打开新建的文件夹，然后选择 iii Edit | Paste 7．你现在在新的文件夹中已经复制了这些文件当练习部分要求您打开这些示 例数据的时候请打开刚才复制的这些文件， 不要打开原始文件 请不要使用原 始文件 请不要使用原 始文件将需要保存的数据和方法保存在您自己建立的文件夹中 8．一旦这些原始数据被修改，他们的备份保存在文件“Backup Files.exe”中 运行这一可执行文件会重新得到原始文件 当运行这一程序的时候系统会提示 你是否要覆盖数据，请点击Yes然后那些被修改的示例数据会被重新改回 iv 安全信息安全信息 您仪器系统所附带的安装与维护手册包含有重要的安全信息提示及系统硬 件和附件的安装向导 以下在手册中或仪器上出现的标志向您提示了一些安全信息， 在安装、 操作、 维护和维修之前，请一定要阅读并理解这些标志的含义 如果在手册中看到这些标志， 请对与这些标志有关的安全信息给予特别的注 意 1-1 第一章 毛细管电泳导论第一章 毛细管电泳导论 概概 述述 本资料说明毛细管电泳仪的一般原理和以 P/ACETM MDQ 为主机，带有紫 外、二级管阵列和激光诱导荧光检测器的基本操作指导。

一般说明一般说明 P/ACETM MDQ 是根据各种电泳的分离线理；在熔融石英玻璃毛细管中进 行十七化合物分离的仪器 在 P/ACETM MDQ 中，在压力、真空或电压的作用下样品进入毛细管后， 在高电压的作用下，样品中的各种化合物以不同的淌度通过毛细管 检测这些化合物有两种方法其一利用化合物对紫外光具有吸收的原理，化 合物在毛细管中通过毛细管的窗口，应用紫外或二极管阵列检测器检测起吸收 值，将吸收光信号变成电信号传给计算机或积分仪由计算机制作成电泳图而被 分析 第二个方法是利用化合物对特定发射光具有吸收并产生激发光的原理 这里 由激光诱导荧光（LIF）来完成在毛细管中的物质吸收激光诱导荧光检测器所 产生的特定波长的发射光， 激光诱导荧光检测器在测定、 并记录其产生的激发光 再由计算机完成电泳图 P/ACETM MDQ 可以分离各种不同的样品，包括：肽类、蛋白、核酸、离 子、手性化合物和药物毛细管电泳比其他分析仪器需要更为少量的样品（5-30 微升，进样的量仅仅 5-50 纳升） 它提供比其他分离技术更为理想的分析手段 电泳常用模式电泳常用模式 毛细管区带电泳毛细管区带电泳 Capillary Zone Electrophoresis (CZE) 毛细管区带电泳也称为自有溶液毛细管电泳， 是毛细管电泳中最简单的一种 形式。

其分离线理是各被分离物质的净电荷与质量之间比值的差异，不同离子按 1-2 照各自表面电荷密度的差异以不同的速度在电解质中移动，而导致分离毛细管 区带电冰要求缓冲液具有均一性，毛细管内各处具有恒定的电场强度 毛细管胶束电动色谱毛细管胶束电动色谱 Micellar ElectroPhoresis Capillary Chromatography （（MEKC）） 在 MECC 中，当把离子型表面活性剂加入缓冲液中，并且其浓度足够大时 这种表面活性剂的单体就结合在一起，形成一个球体我们称其为胶束目前，以 十二烷基硫酸钠（SDS）使用最为普遍 在 MECC 的系统中存在两个相：流动的水相和起到固定相作用的胶束相， 被分离物在这两个相之间分配， 由于它们在胶束中具有保留能力而产生不同的保 留时间和区带电泳一样，缓冲液在管别壁处形成正电，使其显示强烈的向负极 移动的电渗流，而 SDS 胶束由于其外壳带负电性具有向正极迁移的倾向一般 情况下，电渗流的速度大于胶束的迁移速度因此，迫使胶束最终以较低的速度 向负极移动我们把这个移动的胶束固定相也称之“准固定相” 在胶束电动力学色谱中， 中性粒子之间的分离是根据其本身的疏水性的不同 而达到的，不同疏水性的粒子和胶束的相互作用不同，疏水性强的作用力就大， 保留时间就长；反之，保留时间就短。

毛细管凝胶电泳毛细管凝胶电泳 Capillary Gel Electrophoresis（（CGE）） 凝胶电泳是用凝胶物质作为支撑物进行分离的区带电泳 凝胶是一种固态分 散体系，它具有多孔性，具有类似于分子筛的作用被分离物在通过装入毛细管 的凝胶时，按照各自分子的体积大小逐一分离，分子体积大的首先被分离出来， 其后是较小的分子 毛细管等点聚焦毛细管等点聚焦 Capillary Isoelectric Focusing ( cIEF) 两性电解质在分离介质中的迁移形成 pH 梯度，各种具有不同等电点的蛋白 质按照这一梯度迁移到它们的等电点的那个位置，并在该点停下，由此产生一条 非常窄的聚焦区带，并使不同的蛋白质聚焦在不同的位置上 毛细管等电聚焦的运行过程，可分为三个步骤： A 进样把样品与两性电解质混合并进样 B 聚焦加高电压 3－4 分钟，使整个毛细管长度范围内建立一个 pH 梯度， 以便让样品在。