微生物论文-抗生素预处理留置导尿管对大肠埃希菌所致尿路感染的预防.doc

目 录中 文 摘 要.........................................................................................................1英 文 摘 要.........................................................................................................2前 言.........................................................................................................3正 文.........................................................................................................4参 考 文 献.........................................................................................................9致 谢.......................................................................................................11- -1抗生素预处理留置导尿管对大肠埃希菌所致尿路感染的预防[摘要] 目的 观察抗生素代替传统石蜡油润滑导尿管后生物膜的形成情况，为减少由留置导尿管引起的尿路感染提供方法及理论依据。

方法 制备大肠杆菌，试管稀释法确定MIC，药敏试验，体外用平板法在硅胶导尿管膜片表面经过 3d孵育建立生物膜模型，并用扫描电镜观察生物膜的形态，通过菌落计数法定量了解本实验的方法比传统方法在减少尿路感染上的优势；用冲洗、冲洗+超声振荡2种方法处理附有不同生长时期生物膜的导尿管，通过菌落计数法了解2种方法对不同时期生物膜的清除效应以及减少由冲洗方法引起的误差结果 扫描电镜观察导尿管膜片的生物膜内均有细菌团块聚集，可见纤维素样物质交联不同处理方法结果表明，在生物膜形成的初期，2种处理方法具有相似清除效应；但当生物膜趋于成熟后，单用冲洗方法难于将黏附细菌洗脱下来，2种方法的效应强弱顺序为：冲洗+超声振荡＞冲洗结论 用抗生素预处理的导尿管形成的生物膜数量较少，而对照组形成的生物膜数量较多因此，建议使用抗生素预处理硅胶导尿管，并且在生物膜形成初期，对导尿管一般冲洗能较彻底地清除粘附细菌，在生物膜形成后期，使用冲洗+超声振荡效果好一些[关键词] 抗生素预处理导尿管；大肠埃希菌；生物膜；扫描电镜；冲洗；菌落计数抗生素预处理留置导尿管对大肠埃希菌菌所致尿路感染的预防- 2 -Antibiotic pretreatment indwelling catheter for prevention of Escherichia coli in urinary tract infection[Abstract] Objective To observe the formation of antibiotics instead of traditional paraffin oil lubricated guiding catheter biofilm, in order to reduce urinary tract caused by indwelling catheter infection to provide method and theoretical basis. Methods Preparation of Escherichia coli, MIC two fold dilution methods, drug sensitivity test in vitro, with flat in the silica gel catheter surface of diaphragm after 3D incubation establish biofilm model, and biofilm morphology was observed by scanning electron microscope, by quantitative colony counting method to understand this experimental method than the traditional method in decreasing the urinary tract the advantage of using infection; rinse, rinse + ultrasonic 2 methods of dealing with different growth period of biofilm catheter, by colony counting method to understand the scavenging effect on different period of biofilm and 2 ways of reducing error caused by flushing method. Results Scanning electron microscopic observation of biofilm catheter diaphragm in both bacterial clumps aggregation, shows fibrinoid material crosslinking.The results show that the different processing method, the initial in biofilm formation, 2 methods have similar removal effect; but when the biological film tends to be mature, single flushing method is difficult to bring the adhesion of bacteria eluted, 2 methods of the effect sequence: Rinse + oscillation＞wash. Conclusions the catheter biofilm antibiotic pretreatment formation quantity is less, while the control group the number of biofilm formation. Therefore, recommend the use of antibiotic pretreatment of silica catheter, and early in biofilm formation, to catheters can thoroughly remove flushing of adherent bacteria, biofilm formation in the late, the use of irrigation + effect of ultrasonic oscillation is better.[Key words] antibiotic pretreatment catheter; Escherichia coli; biofilm; scanning electron microscope; flushing; colony count- -3前言随着现代医学高科技的发展，新型生物材料的应用日益增多，生物材料相关的医源性感染逐年上升。

留置导尿是临床上常用的一种操作技术，此技术最常见、最重要的并发症是尿路感染根据流行病学调查，导尿管相关的泌尿系统感染发生率为 92 ~93%，约占院内感染的 40% [1]且有资料表明导尿患者菌血症的发生率是非导尿患者的 5.8 倍目前对减少导尿管表面生物膜的形成进行了多方面的研究，如不同材质导尿管对大肠埃希菌生物膜形成的影响，脂质包被杀菌剂或抗菌药运载体提高药物吸收 [2]，利用藻酸盐单克隆抗体中和藻酸盐 [3]，乳铁蛋白结合铁离子使细菌处于移动状态以减少细菌微菌落形成，开发新的生物材料杀菌和抗细菌黏附，纤维素酶降解铜绿假单胞菌胞外多糖 [9]，抑制 QS信号系统类细菌致病因子 [4]，新型高分子抗菌气管导管对铜绿假单胞菌生物膜形成的体外影响等，此外，研制尿路常见病原菌疫苗 [5]、发展插管微创技术等亦为预防感染的研究方向随着留置尿管时间的延长，引起尿路感染的概率也相应的增加 [6,7]，因此对住院患者，尤其是危重及手术患者已构成较大威胁留置导尿管细菌生物膜（Bacteria biofiln， BBF）是细菌吸附于生物材料或集体腔道表面，分泌多糖基质、纤维蛋白、脂蛋白，将自身包裹于其中而形成的膜样复合物。

细菌生物膜是导尿管相关尿路感染的物质基础，细菌 BBF 一旦形成，使用正常剂量成百倍药物也不易治愈，所以对 BBF 形成的预防和控制较比生物膜形成后再利用药物抗生物膜更为重要和有效 [8]因此现在国内普遍在发生尿路感染后全身使用抗生素的方法对已经形成生物膜的患者往往无效，故提前用抗生素润滑导尿管能有效预防 BBF 形成，运用于临床可以减少由留置导尿管引发的尿路感染问题抗生素预处理留置导尿管对大肠埃希菌菌所致尿路感染的预防- -4正文1.方法和步骤1.1 方法 试管二倍稀释法，药敏试验，导尿管表面细菌生物膜的建立，电镜观察生物膜，菌落计数1.2 步骤1.2.1接种菌液准备 将斜面保藏菌大肠杆菌(沈阳医学院实验中心提供)转接到EMB琼脂培养基上，在（37±1）℃下培养48h，每天转接1次，试验时应采用连续转接2次后的新鲜细菌（24h内接种）用接种环从培养基上取少量(刮1～2环)新鲜细菌，加入培养液中，选择0.5麦氏比浊的菌液浓度作为试验用菌液1.2.2 药敏试验 用棉签将上一步得到的菌株均匀的涂布在在普通琼脂板上，将平板十字划线，分别在十字的上下左右和中间五个点上放置五种不同的药敏纸片，放在 37℃温箱中培养 16～18 小时后用游标卡尺测定抑菌圈的宽度，选择抑菌圈宽的抗生素作为浸泡导尿管的药物。

1.2.3 试管稀释法确定抗生素的最低抑菌浓度（MIC） 取 7 个相同的试管各管分别加入 1ml 已制备的菌悬液和 8ml 的蒸馏水，在第一管中加入 1ml 规格为 40mg/ml 的庆大霉素和 8ml 的蒸馏水，再从第一管中取出 1ml 稀释为相隔 10 倍的浓度梯度(浓度依次为 4000 400 40 4 0.4 0.04ug/ml)及空白对照，从中各取出 2ml 用比浊仪确定MIC 的范围，再以此范围用二倍稀释法确定 MIC1.2.4 大肠埃希菌生物膜的制备 参照 Brown 平板法将实验组（导管载体浸入 100 倍MIC 的抗生素溶液中 30min[9,10]）和对照组的导尿管从中剖开用打孔机制备成直径0.7，0.2cm 厚的圆片，高压灭菌后分别放入每孔含有 2ml MH 肉汤的 12 孔培养板中，在各孔内分别加入大肠埃希菌 100 µl 用封口膜将平板四周严封以防污染，置于 37℃孵箱中培养，每 24h 更换培养液（吸出 1ml 菌液，加入 1ml 新鲜 MH 肉汤）共培养 3 天1.2.5 扫描电镜观察 取出培养 18、24、48、72h 导尿管膜片各 1 片，用 0.9%NS 2ml冲洗 5。