细菌的革兰染色法.ppt

实验二、细菌的革兰氏染色实验二、细菌的革兰氏染色一、实验目的一、实验目的1. 掌握细菌革兰氏染色掌握细菌革兰氏染色原理及方法原理及方法、巩固油、巩固油镜的使用；镜的使用；2. 初步掌握初步掌握无菌操作技术无菌操作技术二、实验原理二、实验原理革兰氏染色法（革兰氏染色法（Gram, Gram, 丹麦，丹麦，18841884年）年）（（1 1））是细菌学上最常用的鉴别染色法是细菌学上最常用的鉴别染色法，染色后，可将，染色后，可将细菌分为细菌分为G G+ +菌和菌和G G- -菌2 2）机理）机理 主要因为两类细菌细胞壁结构和成分不同主要因为两类细菌细胞壁结构和成分不同ØG G+ +菌细胞壁：肽聚糖含量高（菌细胞壁：肽聚糖含量高（9090％）、交联程度高、％）、交联程度高、肽聚糖层厚、肽聚糖层厚、脂类含量少脂类含量少→→用乙醇不易脱色；用乙醇不易脱色；ØG G- -菌细胞壁：肽聚糖含量低（菌细胞壁：肽聚糖含量低（1010％）、交联程度低，％）、交联程度低，肽聚糖层薄、肽聚糖层薄、外壁层脂类含量较高外壁层脂类含量较高→→用乙醇易脱色用乙醇易脱色三、实验材料三、实验材料1.1.菌种菌种（（1 1）枯草芽孢杆菌（）枯草芽孢杆菌（Bacillus Bacillus subtilissubtilis））（（2 2）大肠杆菌（）大肠杆菌（Escherichia coliEscherichia coli）） 培养培养24h24h，用于革兰氏染色。

用于革兰氏染色2.2.染色液和试剂染色液和试剂 草草酸酸铵铵结结晶晶紫紫染染液液、、卢卢革革氏氏碘碘液液、、95%95%酒酒精精、、番番红红染染液液、、生理盐水、乙醚生理盐水、乙醚- -乙醇溶液、香柏油乙醇溶液、香柏油3.3.器材器材 废废液液缸缸、、洗洗瓶瓶、、载载玻玻片片、、接接种种环环、、酒酒精精灯灯、、擦擦镜镜纸纸、、显微镜等显微镜等四、实验方法四、实验方法1.1.革兰氏染色革兰氏染色（（1 1）步骤）步骤 取一干净载玻片取一干净载玻片→→→→在两端各加一滴生理盐水在两端各加一滴生理盐水→→→→无无菌操作取菌种菌操作取菌种→→→→涂于生理盐水中（涂于生理盐水中（成菌膜成菌膜）） →→ →→自然干燥自然干燥→→→→火焰固定火焰固定→→→→初染初染（（结晶紫，结晶紫，1min1min）） →→→→水洗水洗→→→→媒染媒染（（碘液，碘液，1min1min）） →→→→水洗水洗→→→→脱脱色色（（乙醇，乙醇，20-30s20-30s）） →→→→水洗水洗→→→→复染复染（（蕃红，蕃红，2min2min）） →→→→水洗水洗→→→→自然干燥自然干燥→→→→观察。

观察 革兰氏阴性杆菌革兰氏阴性杆菌革兰氏阳性杆菌革兰氏阳性杆菌（（2 2）注意事项）注意事项§选用对数期的细菌；选用对数期的细菌；§载玻片要洁净无油迹；载玻片要洁净无油迹；§涂片时，滴生理盐水不要过多，挑菌量宜少，涂片时，滴生理盐水不要过多，挑菌量宜少，涂片要均匀，菌膜宜薄；涂片要均匀，菌膜宜薄；§酒精脱色：是革兰氏染色成败的关键，酒精脱色：是革兰氏染色成败的关键，要求脱要求脱至流出的乙醇不带颜色为止，立即水洗至流出的乙醇不带颜色为止，立即水洗五、实验作业五、实验作业1.1.分别绘出分别绘出枯草杆菌枯草杆菌和和大肠杆菌大肠杆菌的形态图，并注的形态图，并注明两菌的革兰氏染色的结果明两菌的革兰氏染色的结果。