超详细微生物学实验报告.doc

微 生 物 学 实 验 报 告（格式标准）　　　　〔生命科学专业〕　　　　教 师：黎 勇　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　目录索引　　精品.　　试验一　油镜的使用和细菌的简洁染色法 3　　试验二　细菌的革氏染色与芽孢染色 5　　试验三　常用培育基的配制 7　　试验四　酵母菌霉菌的外形结构观看及酵母死活细胞的鉴别 8　　试验五、微生物大小的测定与显微计数 10　　试验六　环境中微生物的检测和分别纯化 11　　试验七　细菌鉴定中常用的生理生化反应 12　　试验八　（综合试验）化能异养微生物的分别与纯化 13　　　　　　　　　　　　　　　　　　课程名称：　微生物学　　　　　　　试验班级：化生系生命科学本科　　试验日期：　　　　　　　　　　　　指导老师：黎勇试验一　油镜的使用和细菌的简洁染色法　　〔目的要求〕学习并娴熟把握油镜的使用技术；观看细菌的基本外形；学习观看细菌的运动性的基本方法；　　〔基本原理〕　　1. NA=nsinα 　　2. D=λ/2N.A　　3. 目镜可提高放大倍数，但有效放大率取决于镜口率；已经辨论的物体不放大看不清，未辨论物放得再大也看不清；　　4. 用悬滴法或凹玻片法观看细菌的运动性时，可以通过真运动能定向地由一处快速运动来区分于颗粒的布朗运动；　　〔器材用具〕显微镜、载玻片、凹玻片、盖玻片、接种环、香柏油、二甲苯、凡士林、吸水纸、擦镜纸；细菌、放线菌等固定装片；培育18小时左右的B.subtilis. S.arueus菌斜面培育物；无菌水、生理盐水；精品.　　〔方法步骤〕：（一） 油镜的使用镜检装片在中倍（或高倍镜）下找到目的物，并使位于视野正中　　聚光镜上升到最高位置，虹彩光圈开到最大，镜头转开成八字形　　在玻片的镜检部位（光斑处）滴一滴香柏油　　油镜转入正下方　　　侧视当心上升载物台（缩短镜头与装片距离，镜头浸入油中，至油圈不扩大为止镜头几与装片接触）　粗调器渐渐下降载物台（亲密凝视视野，当捕获到物像时，立刻用细调器校正）　认真观看并绘图取出装片，清洗油镜：擦镜纸拭去镜头上的香柏油　　擦镜纸沾少许二甲苯擦去残留（用手指帮助，快速拭擦一、二次）　　　用清洁擦镜纸认真擦干二甲苯（2-3次）；（二） 细菌的简洁染色法：涂片　　干燥　　火焰固定　　染色　　水洗　　干燥　　油镜观看（三） 细菌运动性的观看　取干净盖玻片，四周涂上凡士林　　　滴加一小滴菌悬液　　凹玻片的凹窝向下盖于盖玻片上　　翻转观看　　〔结果分析〕　　1、画一圆圈表示视野，选取所观看的微生物绘图，留意特别结构、外形和排列；（描画时按视野实际大小5－10倍绘制）　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　菌名：大肠杆菌　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　菌名：金黄色葡萄球菌　　　　放大倍数：10010（5）　　　　　　　　　 放大倍数：10010（5）　　　　特别结构：无 特别结构：无 　　视野观看下微生物的外形　　2、油镜使用时为什么必需干燥装片？　　防止水油分层，光受到折射而影响油镜性能的发挥　　〔试验争论〕　　首次试验中有几个要点：一是按无菌操作取用菌；二是涂片技术的把握；三是油镜使用技术；凡试验中同学的所思所想，如无菌操作技术要点、自行处理试验材料、失败与摸索等均可进行争论（如涂片时蒸馏水不宜过多、取用菌时防止菌被灼烫变形、取菌宜少不宜多等均是可以争论的内容）；精品.试验二　细菌的革氏染色与芽孢染色　　〔目的要求〕观看细菌菌落的特点；把握简洁染色法、革兰氏染色法的原理及操作步骤；在油镜下观看细菌个体外形；学习环境中微生物的检查方法，并加深对微生物分布广泛性的熟悉　　〔器材用具〕E.coli\B.subtilis\S.aureus.的斜面培育物（18－24小时）以及菌落平板各一个；染液：草酸铵结晶紫、划兰氏染液、卢戈氏碘、95%的乙醇、蕃红；无菌水、显微镜、载片、滤纸、液体石蜡是、、擦镜纸、接种环；　　〔方法内容〕：　　（一）试验室环境中微生物的检查　　（二）革兰氏染色法　涂片固定　　冷却　　结晶紫染色1min　　水洗　　碘媒染1min　　95%乙醇30-60s　　水洗　　番红复染2－3min　　　水洗　　　干燥　　　油镜镜检　　（三）芽孢染色　涂片固定　　　孔雀绿加热染色（勿干）5min　　水洗　　　番红复染1min　 　　水洗　　　镜检　　〔结果分析〕试验结果被染成紫色者即为革兰氏阳性，被染成红色者为革兰氏阴性；菌体染成红色，芽孢被染成绿色；　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　精品.　　　　菌名：大肠杆菌　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　菌名：金黄色葡萄球菌　　　　放大倍数：10010（5）　　　　　　　　　 放大倍数：10010（5）　　　　染色反应：红色（阴性） 染色反应：紫色（阳性） 　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　菌名：枯草芽孢杆菌　　　　　　　　　　放大倍数：10010（5）　　　　　　染色反应：紫色（阳性） 　　图1　视野观看下细菌的革兰氏染色反应　　　　　　 　　　　　　　　　　　　　　　　　　图2　枯草芽孢杆菌芽孢外形图　　　　〔试验争论〕　　严格把握脱色程度，是成败的关键；如脱色时间过度，就阳性菌初时之紫色脱出，复染成红色，误成阴性，反之脱色时间不足，阴性菌在初染时的紫色未能脱出，复染时不能染成红色，误以为阳性菌；涂片不能厚；卢弋氏碘即用即配；　　　　作业　　1、 绘出所观看到到细菌的视野图，并说明染色反应；　　2、 哪些因素会影响到革兰氏染色结果的正确？其中是关键的一步是什么？菌龄及培育条件和染色技术是最主要的，关键是脱色；　　3、 怎样对未知菌进行革兰氏染色，以证明你的结果的正确？精品.　　与已知菌混合涂片比较；　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　试验三　常用培育基的配制　　〔目的要求〕明白培育基的配制原理；明白培育基常规配制程序；明白培育基过程各环节的要求和留意事项；明白半合成培育基的配制原理，学习把握肉膏蛋白胨培育基、马铃薯培育基的配制方法；　　〔器材用具〕等配各种培育基的组成成分，琼脂、1N NaoH溶液 1N HCl天平或台秤高压蒸汽灭菌锅、移液管、试管、烧杯、量筒、锥形瓶、培育皿、玻璃漏斗等；药匙、称量纸、pH试纸、记号笔、棉花、纱布、线绳、塑料试管盖、牛皮纸报纸等；　　〔方法步骤〕　　〔一〕 玻璃器皿的洗涤和包装　以小组为单位清洗、控水，按9个为一组，分别用报纸包好并放入烘箱中等待灭菌；　　〔二〕 液体及固体培育基的配制过程　　原料称量（按配方次序）　　溶解　　调剂ｐH　　过滤澄清　　分装　　塞棉塞和包札　　灭菌　　分别按教材配方配制牛肉膏蛋白胨、马铃薯液体及固体培育基；　　〔三〕 培育基的分装　用玻璃漏斗，橡皮管，小玻璃管及弹簧夹制作分装装置　　选用15150平口试管或150mL锥形瓶贴上标签　　分装（至试管高度1/4-1/3，斜面制作用1/5，半固体用1/3）　　要求：每人制作斜面3支；其余分装至锥形瓶中；　　〔四〕 棉塞的制作及试管、锥形瓶的包扎　分别制作试管及锥形瓶棉塞并塞好好以牛皮纸包装头部；　　〔五〕 培育基的灭菌　培育基用湿热法灭菌；皿用干热法分别灭菌；　　〔六〕 斜面和平板的制作（下次试验完成）　　〔七〕 培育基的无菌检查（下次试验完成）　　〔八〕 无菌水的制备　同时制作无菌生理盐水，置锥形瓶中备用；　　〔结果分析〕　　以斜面接种培育验证培育基配制成效；　　以平板制作及接种24小时培育验证灭菌成效；　　简述移液管包装的留意事项；　　〔试验争论〕　　灭菌器的灭菌成效必需间隔一段时间，加以验证，主要方法除无菌检查外，仍通过压力试纸同时灭菌来验证其压力与温度；培育基通常成批制作备用；但制作后，其贮藏时间有肯定限制，一般室温条件下不超过三周；冰箱4℃条件下可贮藏半年，过期不能用；　　作业：精品.　　1、 记录培育基的成分和名称　　2、 分析所配制培育基的碳源、氮源、能源及无机盐、维生素的来源；所配制均为自然培育基，各成分主要来自有机质，微量元素可以由自来水供应；　　3、 什么是自然培育基？什么是半合成、合成培育基？试验四　酵母菌霉菌的外形结构观看及酵母死活细胞的鉴别　　〔目的要求〕观看并把握酵母菌霉菌的菌落特点、个体外形、生长及繁衍方式；学习酵母死活细胞的鉴别方法；　　〔材料用具〕酿酒酵母、红酵母、假丝酵母；〔酿酒酵母和红酵母菌落平板各一个；酿酒酵母豆芽汁斜面及酿酒酵母醋酸钠斜面各一支，假丝酵母加盖片培育的平板〕；7.6%孔雀绿染液，0.5%蕃红染液，苏丹黑染液，二甲苯，中性红染液，碘液；目镜测微尺、镜台测微尺；载片及盖片；　　〔方法步骤〕　　〔一〕 菌落特点的观看　　〔二〕 个体外形与出芽　　〔三〕 子囊孢子的观看　　〔四〕 酵母死活细胞的观看；　　〔结果分析〕描述酿酒酵母霉菌的菌落外形特点；绘图酿酒酵母的菌体、出芽方式及细胞细节；　　（一）酵母的菌落潮湿，大而隆起，颜色多样，正反面颜色一样，不透亮，边缘整齐；　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　菌名：酿酒酵母　　　　　　　　　　　　　放大倍数：10010（5）　　　　精品.　　　　　特别结构：芽（出芽繁衍）　　　　（二）霉菌　　菌落特点：干燥，正反面及中心与边缘不一样；大而疏松；　　（如右图）　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　菌名：青霉（Penicillium）　　　　　　　　 菌名：毛霉（Circinella）　　　　　　　　　　放大倍数：10010（5）　　　　　　　 　放大倍数：10010（5）　　　　　　　　　特别结构：分生孢子梗（帚状分枝）　　　 　特别结构：孢子囊　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　 菌名：曲霉（Aspergillus）　 菌名：根霉（Rhizopus）　　　放大倍数：模式图　　　　　 。