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第六章 种子生活力测定的原理和方法一、种子生活力的概念和一、种子生活力的概念和测测定意定意义义二、种子生活力四二、种子生活力四唑唑染色染色测测定定三、种子生活力的其他三、种子生活力的其他测测定方法定方法9/18/20241A1、种子生活力（、种子生活力（seed viability）的概念）的概念 种子生活力种子生活力是指是指种子种子发发芽的潜在能力和种胚所具有的生命芽的潜在能力和种胚所具有的生命力力通常是指一批种子中具有生命力的种子数占种子通常是指一批种子中具有生命力的种子数占种子总总数的数的百分率 一、种子生活力的概念和一、种子生活力的概念和测测定意定意义义第六章 种子生活力测定的原理和方法能能发发芽的种子芽的种子暂时暂时不能不能发发芽而具有生命力的休眠种子芽而具有生命力的休眠种子9/18/20242A2、、测测定种子生活力的意定种子生活力的意义义（（1 1）休眠的种子必）休眠的种子必须进须进行生活力行生活力测测定定（（2 2）快速）快速预测预测种子种子发发芽能力芽能力第六章 种子生活力测定的原理和方法9/18/20243A二、种子生活力四二、种子生活力四唑唑染色染色测测定定（（TTC test or TZ test）） 1、、发发展展简简史史第六章 种子生活力测定的原理和方法l1942年由德国年由德国H. Lakon发发明明l1950年年ISTA成立四成立四唑测唑测定技定技术术委委员员会会l 1953年年ISTA世界大会世界大会第一次将四第一次将四唑测唑测定列入国定列入国际际种子种子检验规检验规程程l《四《四唑测唑测定手册》（定手册》（Handbook on Tetrazolium Test），），Moore，，1984年，年，650多个属和种多个属和种l1995年我国将四年我国将四唑测唑测定列入定列入农农作物种子作物种子检验规检验规程程9/18/20244A 无色的的三苯基四氮无色的的三苯基四氮唑唑被种子吸收后，在胚部活被种子吸收后，在胚部活细细胞中脱胞中脱氢氢酶酶的作用下，的作用下，还还原成原成为为红红色的、色的、稳稳定、不定、不扩扩散散的三苯基甲的三苯基甲 ，，这样这样，就可根据染色的部位和深浅来区分，就可根据染色的部位和深浅来区分种子种子红红色的有生活力部分和无色的死亡部分。

色的有生活力部分和无色的死亡部分2、原理、原理第六章 种子生活力测定的原理和方法9/18/20245A3、特点、特点Ø原理可靠原理可靠Ø结结果准确果准确( (与与标标准准发发芽率芽率误误差一般不超差一般不超过过3-3-5%)5%)Ø不受休眠限制不受休眠限制Ø简简便快速便快速 6-24h 6-24h VitascopeVitascope 20-30min 20-30minØ成本低廉成本低廉第六章 种子生活力测定的原理和方法9/18/20246Aü测测定休眠种子的定休眠种子的发发芽潜力芽潜力ü测测定收定收获获后后马马上要播种的种子的上要播种的种子的发发芽潜力芽潜力ü测测定定发发芽芽缓缓慢的种子的慢的种子的发发芽潜力芽潜力ü测测定定发发芽末期未芽末期未发发芽种子的生活力芽种子的生活力ü测测定种子收定种子收获获或加工期或加工期间损伤间损伤种子的生活力种子的生活力ü解决解决发发芽期芽期间间遇到的遇到的问题问题ü查查明种子明种子贮贮藏期藏期间间劣劣变变衰老程度衰老程度ü时间紧时间紧迫，迫，调调种种时时快速快速测测定种子生活力定种子生活力第六章第六章 种子生活力种子生活力测测定的原理和方法定的原理和方法4、适、适应应范范围围9/18/20247A5、所需、所需试剂试剂第六章 种子生活力测定的原理和方法①①四氮四氮唑唑：：2,3,5-2,3,5-氯氯（溴）化三苯基四氮（溴）化三苯基四氮唑唑 （（2,3,5-Triphenyl 2,3,5-Triphenyl TetrazoliumTetrazolium Chloride or Bromide Chloride or Bromide）） 简简称：称：四四唑唑或或红红四四唑唑 缩缩写：写：TTC，， TTB，，TZ △ △ 理化性理化性质质u白色或淡黄色的粉白色或淡黄色的粉剂剂，熔点，熔点243℃243℃；；u当温度达到当温度达到245℃245℃时时就会分解，易溶于水，具有微毒；就会分解，易溶于水，具有微毒；u遇到直射光遇到直射光线时线时会被会被还还原成粉原成粉红红色，色，ü所以所以该试剂该试剂需用棕色瓶装盛，并用黑需用棕色瓶装盛，并用黑纸纸外面包装。

外面包装ü已配好的四已配好的四唑唑溶液溶液应应装入棕色玻璃瓶里，存放在暗装入棕色玻璃瓶里，存放在暗处处ü在在进进行种子染色行种子染色时时，也，也许许将其放在暗将其放在暗处处和弱光和弱光处进处进行9/18/20248A5、所需、所需试剂试剂第六章 种子生活力测定的原理和方法△ △ 测测定方法定方法l建建议议使用使用 0.1%～～1.0% 四四唑盐唑盐的水溶液的水溶液Ø切开的种子用切开的种子用 0.1%～～0.5% 浓浓度的四度的四唑唑溶液；溶液；Ø整个胚、整粒种子或斜切、横切或穿刺的种子需用整个胚、整粒种子或斜切、横切或穿刺的种子需用 1.0% 浓浓度度的四的四唑唑溶液；溶液；Ø种子染色种子染色时间时间与四与四唑唑溶液溶液浓浓度有关l浓浓度增加，染色反度增加，染色反应应所需所需时间时间也随之也随之缩缩短，从染色效果看，以短，从染色效果看，以较较低低浓浓度度为为宜；宜；l测测定定时时，要求四，要求四唑唑溶液的溶液的 ph 值值在在 6 ～～7 范范围围之内9/18/20249A5、所需、所需试剂试剂第六章 种子生活力测定的原理和方法△ △ 配制方法配制方法l称取称取 1 g 四四唑唑粉粉剂剂溶解于溶解于 100 ml 磷酸磷酸缓缓冲溶液冲溶液中，即配成中，即配成 1.0% 四四唑唑溶液溶液；；l称取称取 0.1 g 四四唑唑粉粉剂剂溶解于溶解于 100 ml 磷酸磷酸缓缓冲溶液冲溶液中，即配成中，即配成 0.1% 四四唑唑溶液溶液；；l可用可用 NaOH 或或 NaHCO3 溶液溶液调节调节 ph 值值。

9/18/202410A5、所需、所需试剂试剂第六章 种子生活力测定的原理和方法②②磷酸磷酸缓缓冲液冲液uISTA TZ手册法手册法 uAOSA 规规程法程法Ø母液母液Ⅰ：：称取称取 9.078 g 磷酸二磷酸二氢钾氢钾（（KH2PO4）溶解于）溶解于1000 ml 蒸蒸馏馏水中；水中；Ø母液母液Ⅱ：：称取称取 9.472 g 磷酸磷酸氢氢二二钠钠（（Na2HPO4）或）或 11.876 g Na2HPO4 · 2H2O 溶解溶解于于1000 ml 蒸蒸馏馏水；水；Ø然后取然后取 2 份份母液母液Ⅰ和和 3 份份母液母液Ⅱ混合即成混合即成 Ø在在1000 ml 蒸蒸馏馏水中加入水中加入 5.45 g NaH2PO4 和和 3.79 g Na2HPO4 ，充分溶解即成充分溶解即成9/18/202411A5、所需、所需试剂试剂第六章 种子生活力测定的原理和方法③③乳酸苯酚透明液乳酸苯酚透明液④④ 用于小粒豆用于小粒豆类类种子或牧草种子种子或牧草种子, ,染色后种皮、稃壳或胚乳染色后种皮、稃壳或胚乳变为变为透明④④过过氧化氧化氢氢溶液溶液1.1. 用于某些牧草种子（黑麦草）的用于某些牧草种子（黑麦草）的预预湿浸种，加快湿浸种，加快酶酶的活化和吸的活化和吸胀胀。

⑤⑤杀杀菌菌剂剂和抗生素和抗生素1.1. 延延缓缓衰弱种子的劣衰弱种子的劣变进变进程⑥⑥胶液硬化胶液硬化剂剂1.1. 有些种子浸种后，种皮表面出有些种子浸种后，种皮表面出现现胶液而胶液而变变得非常光滑，得非常光滑，难难以拿以拿牢牢进进行行样样品准品准备备9/18/202412A6、、测测定程序定程序第六章 种子生活力测定的原理和方法（（1 1））预处预处理理 l预预措：措：是指在种子是指在种子预预湿前除去种子外部的附属物和在种子湿前除去种子外部的附属物和在种子非要害部位弄破种皮非要害部位弄破种皮l预预湿湿: : 为为加快种子充分吸湿，加快种子充分吸湿，软软化种皮，便于化种皮，便于样样品准品准备备，，以提高染色的均匀度，通常种子在染色前要以提高染色的均匀度，通常种子在染色前要进进行行预预湿9/18/202413A6、、测测定程序定程序第六章 种子生活力测定的原理和方法l预预湿湿（（1））预处预处理理u水浸快速水浸快速预预湿：适合于水稻、大豆和花生等作物种子湿：适合于水稻、大豆和花生等作物种子u纸纸床床缓缓慢慢预预湿：适合于葱、玉米和小麦等作物种子湿：适合于葱、玉米和小麦等作物种子 ◎ ◎ 纸纸床床预预湿湿( (小粒豆小粒豆类类种子种子) ) ◎ ◎ 纸纸卷卷预预湿湿( (大豆、菜豆、豌豆）大豆、菜豆、豌豆）uH2O2溶液浸种：溶液浸种： （（为为了加快种子吸了加快种子吸胀胀和促和促进进酶酶的活化以及的活化以及缩缩短短预预湿湿时间时间）） 0.3%, 20～～30℃, 1 h 农农作物种子四作物种子四唑唑染色技染色技术规术规定定9/18/202414Aa)a)不需不需预预湿和附加准湿和附加准备备：：如苜蓿种子如苜蓿种子b)b)采用采用缓缓慢慢预预湿后不需湿后不需样样品准品准备备：：如大豆种子等如大豆种子等c)c)穿刺或切开胚乳：穿刺或切开胚乳：小粒牧草等种子小粒牧草等种子d)d)沿胚沿胚纵纵切：切：水稻、玉米、和麦水稻、玉米、和麦类类等等e)e)近胚近胚纵纵切：切：松柏和松柏和伞伞形科等植物种子形科等植物种子f)f)上半粒上半粒纵纵切：切：莴莴苣和其他菊科等植物种子苣和其他菊科等植物种子第六章 种子生活力测定的原理和方法（（2）染色前的）染色前的样样品准品准备备目的：使四目的：使四唑唑溶液快速和充分渗入种子全部活溶液快速和充分渗入种子全部活组织组织，加快染色反，加快染色反应应，采用适当方法使胚的主要构造和活的，采用适当方法使胚的主要构造和活的营营养养组织组织暴露出来。

暴露出来9/18/202415Ag)g) 切去种子基端：切去种子基端：茜草科等植物种子茜草科等植物种子h)h) 斜切种子：斜切种子：菊科、十字花科和菊科、十字花科和蔷蔷薇科等薇科等i)i)横切胚乳：横切胚乳：黑麦草、羊茅等植物种子黑麦草、羊茅等植物种子j)j)剥去种皮：剥去种皮：矮矮牵牵牛、茶籽和棉花等植物种子牛、茶籽和棉花等植物种子k)k)剥开胚乳取出胚：剥开胚乳取出胚：杜仲等林木种子杜仲等林木种子l)l)横切胚横切胚轴轴和盾片：和盾片：大麦和小麦等大麦和小麦等m)m)从果从果实实内取出胚：内取出胚：桃等桃等n)n)横切种子两端：横切种子两端：山茱萸和胡山茱萸和胡颓颓子等子等o)o)平切果种皮和胚乳，露出胚的构造：平切果种皮和胚乳，露出胚的构造：洋葱和菠菜等植物种子洋葱和菠菜等植物种子第六章 种子生活力测定的原理和方法（（2）染色前的）染色前的样样品准品准备备9/18/202416A第六章 种子生活力测定的原理和方法1.1.禾谷禾谷类类: :通通过过胚和胚和约约在胚乳四在胚乳四分之三个分之三个纵纵切切2.2.燕麦属燕麦属: :靠近胚部横切靠近胚部横切3.3.牧草牧草: :通通过过胚乳末端部分横切胚乳末端部分横切和和纵纵切切4.4.牧草牧草: :种子刺穿胚乳种子刺穿胚乳5.5.莴莴苣属苣属: :通通过过子叶末端一半子叶末端一半纵纵切切6.6.第第5 5种方式种方式进进行行纵纵切切时时的解剖的解剖刀部位刀部位7.7.伞伞形科形科: :沿胚的旁沿胚的旁边纵边纵切切8.8.针针叶叶树树: :种子沿胚旁种子沿胚旁边纵边纵切切9.9.两端横切两端横切, ,打开胚腔打开胚腔, ,并切去小并切去小部分胚乳部分胚乳. .9/18/202417A（（3）染色温度和）染色温度和时间时间第六章 种子生活力测定的原理和方法l将准将准备备好的种子好的种子样样品放入染色品放入染色盘盘中，加入中，加入适宜适宜浓浓度的四度的四唑唑溶液溶液完全淹没种完全淹没种子，移置于子，移置于一定温度一定温度的的黑暗黑暗控温控温设备设备内或内或弱光弱光下下进进行染色反行染色反应应。

l所用染色所用染色时间时间因四因四唑唑溶液溶液浓浓度、温度、种子种度、温度、种子种类类、、样样品准品准备备方法等因素的方法等因素的不同而异不同而异l在在 20～～45℃ 范范围围内，温度内，温度每增加每增加 5℃，其，其染色染色时间时间可减少一半可减少一半l达到达到规规定定时间时间或染色已很明或染色已很明显时显时，倒去，倒去四四唑唑溶液，用清水冲洗溶液，用清水冲洗l已达到已达到规规定定时间时间，，样样品的染色仍不品的染色仍不够够充分，可适当延充分，可适当延长长染色染色时间时间，以便，以便证证实实是由于是由于四四唑唑溶液渗入溶液渗入缓缓慢引起，慢引起，还还是由于种子本身的缺陷所引起的是由于种子本身的缺陷所引起的 农农作物种子四作物种子四唑唑染色技染色技术规术规定定9/18/202418A（（4））鉴鉴定前定前处处理理第六章 种子生活力测定的原理和方法①①直接直接观观察，不需察，不需处处理理②②轻压轻压出胚，出胚，观观察察鉴鉴定定③③扯开扯开营营养养组织组织，暴露出胚，暴露出胚④④切去一切去一层营层营养养组织组织，暴露出胚和活的，暴露出胚和活的营营养养组织组织⑤⑤沿胚中沿胚中轴纵轴纵切切⑥⑥沿种子中沿种子中线纵线纵切切⑦⑦剥去半透明的种皮或种子剥去半透明的种皮或种子组织组织⑧⑧剥去种皮和残余剥去种皮和残余营营养养组织组织⑨⑨切去切面碎片或切去切面碎片或掰掰开子叶开子叶⑩⑩乳酸苯酚透明液的乳酸苯酚透明液的应应用用( (便于小粒种子便于小粒种子观观察察) )9/18/202419A① ① 目目标标：：第六章 种子生活力测定的原理和方法（（5））观观察察鉴鉴定定l计计算种子生活力百分率算种子生活力百分率l按染色程度和按染色程度和组织组织特性，判断种子活力特性，判断种子活力强强弱，并分弱，并分级级l查查明种子劣明种子劣变变和生活力和生活力丧丧失的原因失的原因9/18/202420Al裸眼或在解剖裸眼或在解剖镜镜下逐个下逐个鉴鉴定，分清健壮定，分清健壮组织组织，衰弱，衰弱活活组织组织，衰弱死，衰弱死组织组织和死亡和死亡组织组织并并综综合判断种子活合判断种子活力力第六章 种子生活力测定的原理和方法② ② 鉴鉴定：定：（（5））观观察察鉴鉴定定9/18/202421A l凡是胚的主要构造及有关活凡是胚的主要构造及有关活营营养养组织组织染成有光染成有光泽泽的的鲜红鲜红色，且色，且组织组织状状态态正常的，正常的，为为有活力种子有活力种子l凡是胚的主要构造局部不染色或染色成异常的凡是胚的主要构造局部不染色或染色成异常的颜颜色和光色和光泽泽，并，并且活且活营营养养组织组织不染成部分已超不染成部分已超过过二分之一，或超二分之一，或超过过允允许许范范围围且且组织软组织软化的，化的，为为不正常种子不正常种子l凡完全不染色或染色成无光凡完全不染色或染色成无光泽泽的淡的淡红红色或灰白色，且色或灰白色，且组织组织已腐已腐化、虫蛀、化、虫蛀、损伤损伤、腐、腐烂烂的，的，为为死种子。

死种子l各种植物的种子活力判各种植物的种子活力判别标别标准参照种子准参照种子检验规检验规程第六章 种子生活力测定的原理和方法一般的一般的鉴鉴定原定原则则：：9/18/202422Al水水稻稻：：凡凡是是胚胚的的主主要要构构造造染染成成正正常常鲜鲜红红色色，，或或胚胚根根尖尖端端2/32/3不不染染色色而而其其他他部部分分正正常常染染色色的的种种子子为为有有生生活活力力种种子l大大豆豆：：凡凡是是整整个个种种子子染染成成明明亮亮红红色色，，或或仅仅胚胚根根尖尖端端1/31/3不不染染色色，，或或子子叶叶表表面面有有小小范范围围坏坏死死，，或或子子叶叶顶顶端端1/31/3不染色，不染色，为为有生活力种子有生活力种子第六章 种子生活力测定的原理和方法9/18/202423A（（6））计计算和算和结结果表示果表示第六章 种子生活力测定的原理和方法l计计算各重复有生活力种子百分率，重复算各重复有生活力种子百分率，重复间误间误差不得差不得超超过过最大允最大允许误许误差差l结结果果计计算到近似整数算到近似整数 生活力生活力测测定重复定重复间间的最大容的最大容许许差距差距9/18/202424A种种子子检检验验结结果果报报告告单单9/18/202425A9/18/202426A9/18/202427A9/18/202428A三、种子生活力的其他三、种子生活力的其他测测定方法定方法l甲甲烯兰烯兰法法l溴麝香草酚溴麝香草酚兰兰法（法（BTB法）法）l红红墨水染色法墨水染色法l软软ＸＸ射射线线造影技造影技术术第六章 种子生活力测定的原理和方法9/18/202429A。