总结发酵生产注意事项与以往出现问题.docx

实验室优良生产种子的制备和注意事项一：种子的制备1:菌种的筛选：按常规挑选单菌落，选取其中生产性能好，发酵水 平高的菌株接入试管斜面，然后进行摇瓶考核，至少3次以上选取 平均水平最高的接入沙土管，有条件的还可以进一步进行中试，验证 后，确定生产菌株2：种子培养：将沙土管菌种无菌操作接入茄形瓶，30-37度培养4 天即可3：孑包子悬浮液制备：将无菌水倒入茄形瓶，刮下菌落，无菌操作倒 入接种瓶中，热处理待接种二：注意事项1 .超净台的环境（无菌状况）2. 按无菌操作程序3. 所有器皿严格消毒彻底4. 掌握优良菌落的形态5. 显微镜下得优良菌株形态的判断6. 沙土管消毒彻底（进行无菌检查）7. 检查考核原料与生产原料一致发酵车间发酵注意事项一、发酵车间以往出现过的问题1、 空消灭菌后，未把空气排气阀打开，直接进冷却水，会导致罐体 产生负压而变形2、 板框过滤管道与其他发酵罐管道串联，由于压滤过程中储罐罐压 过高，出现轻质碳酸钙与发酵液倒流，使其他发酵罐空气过滤器、滤 芯全部堵死，导致发酵罐后续生产染菌现象3、 冷冻式干燥机不及时排污会导致发酵过程中染杂菌空压机进气 处排气阀要及时排污，空气储罐也要及时排污。

4、 从种子罐移种至大罐前，管道必须空消20分钟后才能移种，发酵 罐发酵液培养结束移至储罐后，管道要及时空消20分钟，否则易染 菌5、 配料装液量要根据发酵经验，装液量要减去因蒸汽灭菌所产生的 冷凝水的量，使发酵液的量与培养基实际所需量一致6、 灭菌时要将所有阀门微开，避免发酵罐因罐体死角而出现的染杂 情况7、 灭菌结束后降温时，要先将发酵罐的空气排气阀全部打开，使内 外压保存一致8、 温度降至40°C时关闭冷却水降温，采取自然降温至37°C,保证温 度在37C时接种，避免接种温度太低而影响菌种后期生长9、 芽孢发酵过程中会产生大量气泡，过程中要及时观察，气泡量较 大时要采取相应的措施（详见芽孢发酵注意事项），否则会造成跑料10、 考虑安全因素，移料时压力不宜过大，压差一般在0.5-1公斤之 间，过大会造成仪表损坏11、 定期检修发酵用关联设备，校正各种仪表，保证设备正常运营12、 发酵罐空气滤芯要定期更换，厂家指导一般3-4月更换一次，仓 库需要储备备用滤芯二、采取新工艺芽孢杆菌发酵注意要点1、 5吨发酵罐投料量按2.5吨体积投料（灭菌完后的体积）；2、 培养基从配料池打入发酵罐后，先调节培养基的PH值到7.5后升 温灭菌；勿在调节PH值的同时，进行升温灭菌。

3、 调节PH值的氢氧化钠要提前溶解好，使用溶解后的碱液调节PH4、 灭菌条件为121°C, 30 min5、 灭菌结束后，冷却水降温至37C，开始接种，接种后发酵温度设 置在32C6、 接种后，搅拌转速设置175rpm,15分钟左右后停止机械搅拌，通 气比设定在1:0.65, 4小时后开启机械搅拌，转速设置在175rpm7、 发酵过程中的通气量的控制：发酵前期通气比1:0.65，发酵中期通气比1:1,发酵后期通气比1:0.8 （具体按照取样镜检结果设置）8、 发酵过程中转速要求在150转/分钟以上9、 发酵温度：前期发酵温度设置在32度，后期发酵温度30度注 意发酵过程中的温度升高，并及时降温，保证温度在32度左右10、 发酵过程中泡沫的控制方法： 适当降低培养温度，缓解泡沫速 度；②降低空气流量，适当提高罐压，罐压可以增大到1公斤；③适 当降低搅拌速度11、调节PH值至4.5左右后进行喷雾干燥技术部2013.1.9。