不同检验方法对肺结核早期诊断的应用.doc

不同检验方法对肺结核早期诊断的应用不同检验方法对肺结核早期诊断的应用摘耍：目的探讨痰涂片、PCR、PPD三种检验方法与肺结核早 期诊断中的应用价值，探究快速、可靠、敏感、特异的诊断方法方 法 选取2013年3月〜9月我院收治疑似活动性肺结核患者182例, 据相同医师推断将患者分为高度疑似42例、低度疑似140例，获取 痰样分别进行涂片、PCR、PPD、培养检验，与病理学检验结果进行对 比结果高度疑似组阳性率(40. 48%)高于低度疑似组(5.71%),高 度疑似组痰涂片、PCR、PPD阳性率26.19%、30.95%、30.95%,高于 低度疑似组12.86%、11.43%、5.71%；高度疑似组痰涂片敏感度、特 异度、符合率分别为 64. 71%.80. 65%.85. 71%,PCR 为 76. 47%.86. 21%、 90.48%, PPD 为 76. 47%. 86.21%、90. 48%,差异具有统计学意义(P <0. 05)；低度疑似组差异无统计学意义(P>0. 05)o结论肺结核早 期诊断中，运用影像学与症状诊断，针对高度疑似者，运用PCR可提 高诊断效用，避免漏诊；而针对低度疑似者，运用痰涂片法可基本满 足临床需耍；若有需耍符合条件者可运用PPD。

关键词：结核病；早期诊断；痰涂片；PCR； PPD 结核病是临床常见病与多发病，我国是结核病高发国家，患病率居发展中国家第二位，据不完全 统计，我国每年新增肺结核患者130万，其中传染性肺结核450万例， 肺结核病严重威胁国民健康，肺结核防治工作任重道远［1］肺结核 早期诊断与及时治疗是改善预后的关键，常用的诊断技术包括X线、 CT、细菌性检验等，但结核病临床表现与影像学表现复杂多变、特异 性强，细菌性检验敏感度低，痰涂片法符合率低、培养法耗时长，探 讨快速、敏感、特异的细菌学诊断是结核病早期诊断的难题本研究 就我院收治182例据临床表现与胸部影像学诊断疑似肺结核患者进 行痰涂片结核菌检查、聚合酶链反应(Polyerase Chain Reaction, PCR)与皮肤结核菌索蛋白衍化物(PPD)检验，比较其诊断效用［2］ 1资料与方法 1.1 一般资料选取2013年3月〜9月我院收治疑似活动性肺结核患者182例，其中男113例、女69例；年龄13〜72岁,平均(51・3±5・3)岁纳入标准：均未有肺结核病史；均进行 X线等影像学检查、结核菌素实验据相同医师推断将患者分为高度 疑似42例、低度疑似140例，两组患者年龄、性别等临床资料差异 无统计学意义(P>0.05)。

1・2方法①痰涂片检查，所有患者均于清晨、夜间和即时，指导深呼吸，取痰液或肺部分泌物，取三份 痰标本，若取清晨痰，3h后再取痰标本一份，或留用2份即时痰， 痰量3~5ml,合格痰液应呈脓样、干酪样，标记后运用竹签挑起痰 脓性物质，覆于载玻片形成圆形痰膜，自然干燥后运用萋尼氏染色法 处理，待干后行镜检(淡蓝色背景)，连续观察，填写检验报告［3］ ②PCR检验，取痰步骤与痰涂片相同，取0.5ml痰样，加入1N氢氧 化钠溶液5uL,于37°C温箱内放置40min,运用高速离心机离心，转 速10000r/min,持续5min,弃上清液后运用5%生理生理盐水冲洗至 中性备用取胸水与血清各lml,运用离心机离心后待沉淀后加入裂 解液50 11 1,持续lOmin沸水浴，取出再次行10000r/min离心持续 5mino制备TB-DNA模板:于Taq酶0. 2 u 1中加入15 u 1反应液混匀 后再滴入石蜡油20 » 1封顶，加入上清液5 u 1完成制备后行 10000r/min离心5min,扩增循环35次，取20mlPCR扩增液行上样电 泳，于紫外线下检验，呈S型号曲线增长，最强荧光值较基础荧光值 >20u为阳性［4］。

③PPD检验:于左臂内侧皮内注射PPD液0. 1ml, 进行皮试，若72h后可见直径25mm肿结为阳性［5］ 1. 4统计学处理本次研究中获取的所有资料数据均应用SPSS18. 0软件处理， 以均数土标准差(x±s)表示计量资料，以数(n)与率(%)表示计 数资料，P<0. 05为置信水平，表示差异具有统计学意义 2结果 2.1不同疑似程度检测高可能性组确诊率高于低度疑似者，两组不同检验方法间阳性检出率差异具有统计学意义(P<0. 05)(见 表l)o 注：化与高度疑似者相比，P<0. 05 2. 2不同检查方法诊断效用比较低度疑似组中，痰涂片、PCR、PPD诊断效用差异无统计学意义(P>0. 05)；高度疑似似组中， PCR、PPD法敏感度、特异度均高于痰涂片法，差异具有统计学意义(P<0. 05)(见表 2) 注：与痰涂片法相比，P<0. 05 2. 3假阳性与假阴性情况于高度疑似组中发现2例痰涂片法判断为阳性者，于PCR检验显示为阴性者, 判断为PCR质量控制不合格，随后再行PCR检验检验为阳性；出现1 例痰涂片检验阴性者，而PCR、PPD均呈阳性者，后确诊为肺结核 低度疑似者中，出现痰涂片阴性者，而PCR、PPD均为阳性者，后发 现痰涂片质量控制不合格，确诊为肺结核。

3讨论 我国是肺结核高发国家，肺结核防控治疗是公共卫生服务重要项目，国家大 规模肺结核防控工作成效显著，但近年来因防控力度下降，结核病发 病率有所上升［6］早期诊断与治疗是防治结核病的关键，目前多数 基层医疗机构已具备一定的诊断能力，如CT、X线、症状诊断均可 作为肺结核辅助诊断方法，但因肺结核潜伏期长，表现特异，若需确 诊还需进行病原学检验 目前针对肺结核的诊断，细菌培养法是结核病诊断的金标准，但检验时间较长，不利于结核病的大规模筛 查与早期治疗的开展，且培养需要严格的质量控制，否则易受其它因 素的干扰［7］因此，临床上采用快速检验法进行肺结核早期筛查， 本次研究中痰涂片、PCR、PPD均应用广泛，操作便捷痰涂片法是 开展应用最早的传统检测方法，从形态学的角度检查肺结核杆菌，因 其操作简便、成本低廉、检测速度快，成为基层医院筛查肺结核的首 选［8］但是痰涂片特界性强、敏感度低，易发生漏诊本次研究中 25例肺结核患者仅检出15例，占60%,而据大量的研究表明肺结核 患者于痰涂片阳性可达50%〜70%［9］PCR检验迅速、敏感度高于痰 涂片，此次研究25例肺结核PCR阳性20例，占80%,致PCR漏诊的 主要原因为痰标木不合格等。

PPD全称结核菌素纯蛋口衍生物，针对 结核菌素敏感度较高，木次研究中25例检出21例，检出率较高，但 是值得注意的是PPD显示阳性者并非肺结核患者，仅表示其携带结核 菌的儿率较高，本次研究中以炎性肿块25mm为标准，客观上排除了 弱阳性者 木次研究中运用X线、症状、CT检查等方法筛选出高度疑似者，再进行相关病原菌学检验，结果显示，高度疑似者各项 检验阳性率高于低度疑似者，确诊率高于低度疑似者，由此可见于病 原菌学检验前，先行辅助诊断，筛查出高度疑似者，可缩短检验流程， 提高诊断效用［10］ 运用痰涂片、PCR、PPD方法分别诊断不同程度疑似组患者，于高度疑似组中，PPD、PCR诊断效用高于痰涂片 法，而于低度疑似组中，PPD、PCR、痰涂片诊断效用差异无统计学意 义(PV0.05)因此，痰涂片应用于肺结核大规模筛查能够满足基木 临床需要，再配合X线、CT等辅助诊断，针对高度疑似者行PCR检 验或病原菌培养可有效避免漏诊与误诊 参考文献： [1]中国防虏协会临床专业委员会•结核病临床诊治进展年度报告(2012年) [J]. 2013, 35 (6):405-406. [2]Seagar AL, Neish B, Laurenson IF. Comparison of two in house realtime PCR assays with MTBQ-PCR Alert and Geno TypeMTBDR plus for the rapid detection of mycobacteria in clinical specimens[J]・ J Med Microbiol, 2012, 61 (10) : 1459-1464・ [3]杨光武•不同检验方法在肺结核早期诊断中的应用[J]・航空航天医学杂志，2012, 23(3):309-310. [4]潘云虎，季志宇，李发根，等•肺泡灌洗液联合肺组织PCR方法检测 结核杆菌DNA对肺结核早期诊断的意义[J]•临床军医杂志，2012, 40(2):333-334. [5]陈涛，周琳，周杰，等•环介导等温扩增法快速检测结合分枝杆菌的临床应用评估[J]•中国防虏杂志，2012, 34(7):413-41 & [6]武玮，潘毓萱，田苗•建立增菌PCR方法对痰涂片阴性肺结核的早期诊断[J]•中国防密杂志，2013, 28(4):315-316. [7]陈曼，胡启飞，祝绚，等•肺结核快速检测技术对肺结核的早期诊断[J]・中华实用诊断与治疗杂志，2012, 24(3):304-305. [8]Vishnevskii BI,Manicheva0A, Vishnevskaia EB,et al. The specific features of bacterial isolation and drug resistance of mycobacteria in extra pulmonary tuberculosis[J]・Probl Tuberk Bolezn Lega, 2009,78 (12). [9]Yaday R,Sethi S, Mewara A, et al. Rapiddetection of rifampicin, isoniazid and streptomycin in mycobacteria tuberculosis clinical isolates by high-resolution melting curve analysis[J]・J Appl Microbiol, 2012, 113(4). [10]陈铁奇•不同检验方法对肺结核早期诊断的应用[J] •中外医疗，2009, 33(20):126-127. 编辑/许言。