试验槐米中芦丁、槲皮素的提取、分离及鉴定.doc

实验二 槐米中芦丁及椭皮素的提取分离及鉴定槐米为豆科植物槐（Sophora japonica L.）的未开放花蕾味苦性凉、具淸热凉血、止血Z功常用于治疗 多种出血症：肠风便血、痔血、尿血、血、崩漏下血、赤血下痢等槐米常炒炭应用槐米的主耍化学成分为芦丁，其含量可达12〜16%,其次含有懈皮素、三砧皂昔、槐花米甲素、槐花米乙素、 槐花米内素等芦丁具有Vitp样作用，可降低毛细血管脆性和调节通透性临床上用作毛细血管脆性引起的 出血症，常作为高血压症的辅助治疗药［目的要求］1 •通过芦丁的提取与精制拿握碱酸法提取黄酮类化合物的原理及操作2. 掌握榊皮素的制备原理及操作3. 熟悉紫外光谱在黄酮结构鉴定小的应用4. 通过芦丁的结构检识，了解昔类结构研究的一般程序和方法［实验原理］芦丁 （rutin）： C27H30O16 - 3H2O,浅黄色针状结品，mp174〜178C （含三分子水）；188C （无水物）难 溶于冷水（1： 8000〜10000）,可溶于热水（1： 180〜200）,燕P醇（1： 10）,冷甲醇（1： 100）,热彌（1： 60）,冷乙醉（1： 650）；难溶于乙醴、三氯甲烷、石汕醴、乙酸乙酯、丙酮等，易溶于碱液。

懈皮素（quercetin）： Ci5H10O7 - 2H2O,黄色结晶,mp313〜314C （2分子结晶水）,316C （无水物）能溶于冷乙醇（仁290）,易溶于沸乙醇（1： 23）,可溶于甲醇、乙酸乙酯、冰醋酸、毗噪、丙酮等；难溶于水、苯、石汕瞇等溶剂肌皮素0H+鼠李糖+葡萄糖芦丁为黄酮廿，分了中具有酚疑基，显酸性，可溶于稀碱液中，在酸液中沉淀析出，可利用此性质进行提取 分离利用芦丁易溶热水、热乙醇，较难溶于冷水、冷乙醇的性质选择重结晶方法进行精制芦丁可被稀酸 水解生成桝皮素及衙豹糖、鼠李糖，依此进行制备懈皮素通过纸色谱及紫外光谱进行黄酗及糖的鉴定［实验内容］」、芦丁的提取分离及精制方法（1）槐米粗粉（50g）置1000ml烧杯中，加入500ml饱和石灰水，加热，并维持pH8〜9煮沸20分钟，趁热用脱脂棉滤过滤液 药渣用300ml饱和石灰水煮沸10分钟，维持pH8〜9 趁热滤过滤液 药渣（X）在60€〜70匸下用浓1_10调卩日至4 〜5静置，抽滤V沉淀低温（80C）干燥，称重按1： 200的比例加水, 加热使溶解，趁热滤过滤液静置,抽滤,减压干燥，计算收率▼芦J精制品方法⑵ 利用芦丁在冷热溶剂中的溶解度不同进行提取分离。

槐米粗粉沸水煮沸5〜10分钟，反复2次趁热滤过水提取液 药渣放冷沉淀析出（粗芦丁）热水重结品或乙醇垂结晶芦丁结品二、榊皮素的制备称取精品戸J ig置250ml烧瓶中加 2%H2S04200ml加热回流1小时放冷，静置，抽滤酸性滤液中和中性滤液浓缩浓缩液沉淀水洗两次，干燥 乙醇重结品称重，计算收率黄色细针状结晶(欄皮素)(供糖的PC鉴定)三、检识反应1. 芦丁的定性反应取芦丁适最，加乙醉使溶解，分成三份供下述试验用：(1) 盐酸镁粉试验：取样品液适量，加2滴浓HCI、再酌加少许镁粉，即产生剧烈的反应，并逐渐出现红色至深红色2) 链■枸试验：取样品液适量，然后加2%ZrOCl2的甲醉溶液，注意观察颜色变化，再加入2%枸椽酸的甲醇 溶液，并详细记录颜色变化3) a ■蔡酚■浓硫酸反应：取样品液适量，加等体积的IO%a ■蔡酚乙醇溶液，摇匀，沿管壁缓加浓硫酸，注意观 察两液界血的颜色2. 芦丁的UV(1) 鉴泄试剂的配制%1 甲醉钠溶液：取0.25g金属钠，切碎，小心加入色谱甲醇10ml中，此液置于玻璃瓶中，用橡皮塞密封1 三氯化铝溶液：取1g无水三氯化铝，小心加入色谱甲醇20ml中，放置24小时后全部溶解即得。

1 醋酸钠：用无水粉末醋酸钠④⑤硼酸饱和溶液：取无水硼酸，加入适量色谱甲醇、制成饱和溶液上述贮备液可放置六个月)(2) 芦丁溶液的配制精密称取芦丁纯品0.5g,用甲醇适量溶解至50ml容量瓶中，用甲醇稀释至刻度3）光谱的测定%1 甲醇光谱：取样詁液置石英杯中，至200-500nm内进行扫描，重复一次，观察紫外光谱1 甲醇钠光谱：取样晶液置石英杯中，加入甲醇钠溶液3滴后，立即测定，放置5分钟后再测一•次1 三氯化铝光谱，在盛有样品液的石英杯中，加入三氯化铝6滴，放置1分钟示进行测定测定示加入3滴盐 酸溶液（盐酸：水=仁1）再进行测定1 醋酸钠光谱：取样品液约3ml,加入过赧的无水醋酸钠固体，摇匀（杯底剩有约2mg的醋酸钠），加入醋酸 钠示两分钟内测定，5分钟到10分钟示再测定一次3. 芦丁及懈皮素的色谱支持剂：中速层析滤液（5X20cm）展开剂：正丁醇■醋酸■水（4： 1： 5）上层样品：门制懈皮素的乙醇溶液门制芦丁的乙醇溶液对照品：懈皮索标准品的乙醇溶液芦丁标准品的乙醇溶液显色剂：三氯化铝乙醇溶液喷雾4. 糖的纸色谱检识支持剂：中速层析滤纸（5X20cm） 样站：取水解后的滤液10ml,水浴加热，11在搅拌下加适量碳酸锁细粉至PH中性，过滤，取滤液并浓缩至2ml左右，放冷示，供纸色谱点样用。

对照品：1%葡萄糖标准品醇溶液及1%鼠李糖标准品醇溶液 展开剂：正丁醇■醋酸■水（4： 1： 5）上层显色剂：喷以邻苯二甲酸苯胺溶液，105C烘烤5分钟至斑点显色清晰［实验说明及注意事项］1. 用石灰水调节芦丁提取溶液的PH,既可以达到碱捉取芦丁的目的，还可以除去槐米中含有的大量粘液质但住离子浓度及pH值均不宜过肓，否则多余的钙能与芦丁形成螯合物沉淀，同时黄酮母核在强碱性条件下易 被破坏2. 用HCI调PH时，应注意PH不要过低，因为PH过低（PH2以下）会使芦丁形成弾盐而使已形成的沉淀重新溶解，同时黄酮母核也会在强碱性条件下被破坏，导致收率下降3. 注意观察懈皮素制备过程中的实验现象。