葡萄酒中诱惑红分析方法研究_毕业论文.doc

目录第一章绪论 11.1引言 11.2诱惑红的检测方法研究进展 21.2.1分光光度法 21.2.2玻碳电极法 31. 2. 3高效液相色谱法 3第二章实验材料及原理 62.1实验材料 62. 1. 1实验试剂 62. 1.2实验主要仪器 72. 2溶液的配制 82. 3实验原理 92・4实验方法 92.4. 1样品前处理 92.4.2样品溶液测定 92.4.3样品溶液定性测定 102.4.4样品定量测定 10第三章 实验结果及讨论 113.1液相色谱法测定条件的选择 113. 1. 1液相色谱法检测器种类的选择 113. 1. 2实验测定波长的选择 123.1.3液相色谱柱的选择 123.1.4流动相的选择 133.1.5流动相配比的选择 133. 1・6色谱柱温度的选择 15163.1.7流动相流速的选择3. 1.8液相色谱分离的最终条件173.2标准曲线的测定183.3线性范围及最低检出限193.4精密度的测定203.5重现性的测定213.6葡萄酒样品前处理21收率测定 223. 7.1硫酸铜沉淀法样品含量的测定及回收率测定 223. 7. 2聚酰胺吸附法样品的测定和加标回收率的测定・・・25结论与展望 29参考文献 31致谢 35附表 37第一章绪论1.1引言葡萄酒行业中，通常会使用各种人工合成色素来提高改善酒的品 质。

但加入人工合成色素也产生了很多问题，过量使用或使用禁止使 用的色素等会影响消费者的身体健康3）因此，寻找一种简便、快 速、准确、低耗的检测方法，对保障食品安全具有重要的意义冃前 国内外常用的检测方法有高效液相色谱法紫外分光光度法2闾、 玻碳电极法⑴、示波极谱法3等现代的检测方法比较成熟而且常用 的高效液相色谱法作为国家标准检测方法精密度和灵敏度高，重现 性好但是此种方法的样品前处理较为耗时，步骤复杂，冋收率较低 且选用该法时检测波长多数选用的是254nm,样品中很多杂质在 254nm处有吸收，干扰较严重，容易误判本文根据实际检测中遇到 的实际问题，参考标准方法代纫与文献，对葡萄酒中人工合成着色剂 （诱惑红）的测定方法进行了改进本次用聚酰胺吸附法⑷、硫酸铜 处理法呦进行前处理，分别用分光光度法和高效液相色谱法对样品进 行分析采用2种前处理方法进行比较，期望找到更好的前处理方法, 硫酸铜处理方法可以消除葡萄酒中大量的糖分和蛋白质等对聚酰胺 柱的色素吸附，减少分析物的损失釆用高效液相色谱法可以有效避 免各种色素的干扰通过多种方法比较建立一种更加准确，简便的检 测方法1.2诱惑红的检测方法研究进展1.2. 1分光光度法分光光度法是根据物质分子对波长为200-760nm这一范围的电 磁波的吸收特性所建立起来的一种定性、定量和结构分析方法。

其特 点是操作简单、准确度高、重现性好波长长（频率小）的光线能量 小，波长短（频率大）的光线能量大分光光度测量是关于物质分子 对不同波长和特定波长处的辐射吸收程度的测量早期刘慧，胡仰栋财等提出一种用连续波长的紫外光谱吸光度数 据对多组分合成食用色素进行定量分析，相对标准偏差为1. 6%~2. 2%, 该法简单、准确、快速，可对色素混合物体系进行定量测定时振强问柱层析富集分离一分光光度法测定饮料中食用合成色 素方法探讨等人又对样品前处理进行改进，采用高分子多孔小球 GDX-203对饮料中食用合成色素进行富集、分离,然后用分光光度法 测定，依次进行了标准曲线的绘制，样品处理，检测条件PH、洗脱剂 的选择以及精密度和回收率的实验方法简单、干扰因素影响较少， 冋收率较好偏最小二乘法是一种新型的多元统计数据分析方法，它是由伍德 （S. Wold）等人首次提出的近年來，它在理论、方法和应用方面都 得到了迅速的发展,偏最小二乘回归在光度法多组分同时测定中的应 用也日益受到重视和亲睐司圣柱皿将偏最小二乘法（PLS）与可见 分光光度法相结合对胭脂红、觅菜红、日落黄三种人工合成色素在 不分离的情况下定量分析，结果让人满意，具有可靠性和适用性。

王 丽平、司圣柱创等人用小波变换对光谱数据进行处理，然后将小波变 换系数用偏最小二乘（PLS）法进行回归分析结果表明回收率在 94. 4~109・4%,为不分离混合食用色素同吋测定提供了一种新的简便、 可靠的方法上面这两种使用偏最小二乘法的检测和分析方法都比较 复杂，适用于单纯的色素分析，对于普通样品的分析并不适用刘冷呦、孙延春凶等人曾先后采用紫外分光光度法，对饮料中的 色素进行过分析研究他们分析的样品和本次分析样品都属于液态， 因此在分析过程中具有相似性，本实验选用此方法对葡萄酒人工合成 色素进行检测，具有简单快速，易于推广的优势1.2.2玻碳电极法玻碳电极法是梁敏思，邹永德胁等以极谱法测定为参照，对饮料 中的柠檬黄、日落黄在玻碳电极上的伏安特性及定量检测的可行性进 行研究方法简便快捷，灵敏度高电极电位对色素比较灵敏，容易 受其他色素的十扰1.2.3高效液相色谱法由于高效液相色谱法的高效快速的分析技术，应用范围较广的特 点，高效液相色谱法成为近年来分析研究过程常用的分析方法因此 用高效液相色谱法检测人工合成色素的改进和优化方法等都比较多陈欣欣，谢娅黎⑸等釆用ACQUTTYUPLC BEH C18色谱柱，以甲醇 -20 mmol - L"乙酸鞍水溶液作流动相进行梯度洗脱，采用变化波长 分析各色素以消除杂质干扰。

线性范围是1・0〜100・0 mg - L'1,加标 回收率为95. T99. 5%,相对标准偏差为1. 0%~2. 1%分析速度较快， 分离效果较好、灵敏度高、干扰小、前处理简单，线性范围宽，精密 度和准确度都较好，对葡萄酒的检测有实用价值黄薇、刘祥萍⑹将样品（饮料，糖果）中的诱惑红色素提取后在 聚酰胺粉中吸附、解吸附，采用C18色谱柱，以甲醇-20 mmol • U乙 酸鞍水溶液作流动相进行梯度洗脱，使用二极管阵列检测器，此方法 的线性范围是0. 010 mg • mL 1〜0.200 mg • ml ' ,最低检出限是 0. 001g • kg1,相对标准偏差为2. 8%〜4. 0%,回收率为91. 5%~97・2% 这种方法灵敏度高，垂现性好张予林，马静远⑷等用三种前处理方式对葡萄酒中四种人工合成 色素进行分析，确定了其检测波长，流动相梯度，流速，柱温等检测 条件，进行了精密度和加标回收实验，最终确定了以聚酰胺吸收为最 佳前处理方法，线性关系良好进行的精密度及加标回收试验表明， 检测的相对标准偏差（RSD）为0. 73% ~ 1. 51%,回收率为87. 83% 〜107. 42%。

此种方法建立的葡萄酒人工合成色素变波长检测方法简 单快速，精确可靠，重复性较好刘瑜冏等人果汁饮料中合成色素检测方法的改进等人在原来的 基础上对饮料等较复杂的前处理进行了考察，降低了天然色素的干 扰本次试验综合高效液相色谱法各种条件，对样品进行多种前处理, 选用变化波长，以甲醇、乙酸钱缓冲溶液为流动相，方法简单快速、 精确度高、回收率高的分析方法2. 1实验材料2. 1. 1实验试剂第二章实验材料及原理表2. 1试剂表药品分子式厂家纯度诱惑红C1 «H 14N2O8S2N a，2上海源叶生物科技有限公AR司通天葡萄酒通化通天酒业有限公司7%vol冰醋酸CH3COOH西陇化工股份有限公司AR柠檬酸C6H807 • H20成都市科龙化工试剂厂AR甲酸HCOOH成都市科龙化工试剂厂AR甲醇（液相分析CH3OH西陇化工股份有限公司HPLC纯）醋酸鞍CHbCOONH,成都市科龙化工试剂厂AR乙醇c2h5oh成都市科龙化工试剂厂AR氨水nh3 • H20西陇化工股份有限公司AR硫酸铜CuSO4 • 5H,0西陇化工股份有限公司AR氢氧化钠NaOH西陇化工股份有限公司AR聚酰胺粉(GHhNO).江苏长丰化工有限公司100-200胭脂红CA0.3 中国医药公司上海化学试剂采购供应站Standar d stain2.1. 2实验主要仪器表2. 2仪器表仪器名厂家规格/型号紫外可见分光上海菁华科技仪器有限752光度计公司电子天平沈阳龙腾电子有限责任ESJ210—4B分析天平超声波清洗机公司SB-3200D真空泵宁波新芝生物科技股份SHB-III有限公司郑州长城科工贸有限公nJ电热恒温水浴北京中兴伟业仪器有限锅公司PH计上海雷磁仪器厂PHS-4C+高效液相色谱岛津（香港）有限公司SPD-15C仪2. 2溶液的配制(1) 储备液(1. OOOmg • ml/1)配置：称取0. 1000g诱惑红于烧杯中, 用蒸僻水溶解，转移至100mL容量瓶，加蒸僻水定容至刻度。

2) 工作液1：用移液管取储备液10mL定容至100mL,得 0. lOOmg • mL 1 的溶液3) 工作液2：用移液管取(2)步溶液lOmL定容至lOOmL,得 0. OlOmg - mLH 的溶液4) 硫酸铜溶液(0. lg • mL *)：称取 7. 8019gCuS04 • 5H20 于烧 杯中，加蒸憾水溶解，转移至50inL容量瓶定容5) 氢氧化钠溶液(0. 04g -mf1)：称取2. 0052gNa0H于烧杯中 溶解，转移至50mL容量瓶定容至刻度6) 柠檬酸溶液(0.2g・inlJ)：称取20. 006g于烧杯中溶解，转 移至lOOmL容量瓶中定容至刻度7) 甲醇+甲酸溶液(60:40)：用量筒取甲醇60mL于lOOmL容量 瓶中，用甲酸定容至刻度8) 乙醇+氨水+水(70:1:29)：量筒取70mL乙醇于lOOmL容量 瓶中，取lmL氨水于容量瓶中，最后用蒸憾水定容至刻度9) 乙醇+氨(99:1):分别取乙醇90mL,氨水lmL配成乙醇氨混 合液10) 甲醇+水(70:30)：用量筒取70讥甲醇于lOOmL容量瓶中 加水定容至lOOmLo(11) 醋酸鞍缓冲溶液(PH=4.0)：称取0. 7708g醋酸鞍于500mL 容量瓶中，加水定容至刻度，转移至烧杯，加醋酸调节PH至4.0, 即配成缓冲溶液。

2. 3实验原理葡萄酒样品成分复杂，葡萄酒样品在流动相甲醇和醋酸鞍的带动 下经过固定相，和固定相发生作用葡萄酒各组分性质和结构的不同, 与固定相发生作用时根据保留时间的长短来定性测定诱惑红由于葡萄酒样品组分复杂的原因，且易受其他物质干扰，故本实 验采用标准加入法对诱惑红进行定量测定（即在一系列诱惑红标准溶 液中加入等量的葡萄酒样品，通过标准曲线的方程计算出样品中诱惑 红的浓度）2.4实验方法2. 4. 1样品前处理葡萄酒中成分复杂，包含大量的酒精、糖类及一些天然色素、人 工合成色素等这些物质都对分析有干扰，因此用聚酰胺吸附法和硫 酸铜沉淀法对葡萄酒进行前处理人工合成色素中的胭脂红的最大吸 收波长是507nm™,对分析的干扰严重，故此参照胭脂红的洗脱方法 去除干扰间，过滤后用液相色谱法分析（分光光度法可不用过滤）。