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1 CFX96 快速梯度定量快速梯度定量 PCR 仪快速操作指南仪快速操作指南 一．运行实验一．运行实验 1. 确认系统数据线和电源线连接正常后，打开 CFX96 开关，系统将自主进入自检模式 2. 自检完成后， 双击启动 Bio-Rad CFX Manager 控制软件, 软件将自动搜索仪器设备， 完成连接后， “Detected Instruments”列表出现设备名称的序列号，同时 PCR 仪器屏幕 显示有红色 “Under remote control”字体 3. 软件启动后，会出现“Startup Wizard”操作导航指示，选择“Create a New Run”,同时 选择“CFX96“，最后点击”OK” 确认进入新运行程序等编辑界面；如需要运行如“打 开文件” 、 “运行相同实验”等请分别选择不同的选项即可 4. 在“Run Setup”的条件下，点击“”标签，可分别选择“Create New” ： 可新建热循环程序； “Select Existing”可调用已有程序；”Express Load”：下拉菜单中可 选择的各种标准预设的热循环程序； “Edit Selected” ：对选中程序进行再编辑。

4.1 新建或编辑程序时，可在图形或文字区域输入各步骤设定温度、时间值等 4.2 ：插入一个普通控温步骤 4.3 ：插入一个温度梯度步骤 4.4 ：插入热循环范围，包括循环起始步骤和重复次数（总 循环数＝输入的重复次数’More Time’+1）. 4.5 ：插入一个融解曲线程序 4.6 或 ：插入或删荧光采集步骤 4.7 ：对反应条件进行优化，包括温度梯度设置、降落 PCR 设置、升降温速率调节等 4.8 ：删除步骤 4.9 编辑完成后点击“OK”确认并保存程序，该保存的程序方便下次调用 5. 在完成程序设置后，点击后下角的“NEXT”或左上角的“”, 进入检测样品 设置界面可分别选择“Create New” ：可新建样品信息设置； “Select Existing”可调用 已有设置；”Express Load”：下拉菜单中可选择的各种标准的简单预设模块； “Edit 2 Selected” ：对选中样品设置信息进行再编辑 新建或编辑样品设置请按如下操作进行： 5.1 从“”下拉框中选择荧光扫描模式， “SYBR/FAM Only” 为单通道快速 扫描模式，适合使用染料法（如 SYBR Green / EvaGreen）或 FAM 探针的检测； “All Channels” 为全通道检测模式， 可同时对 5 个通道扫描， 适合与任意探针的检测； ”FRET” 模式适用与 FRET 探针的使用。

在完成这步后可直接跳入步骤在完成这步后可直接跳入步骤 6 运行实验，从而节约时 间，在这种情况下，以下 运行实验，从而节约时 间，在这种情况下，以下”5.*”步骤可在实验运行中或实验运行结束后再进行编辑，从 而尽最大可能的节约时间 步骤可在实验运行中或实验运行结束后再进行编辑，从 而尽最大可能的节约时间 5.2 “” ：选择实验时所使用的荧光分子，注意如果为” SYBR/FAM Only” 模式其仅能选择“FAM、SYBR Green” 5.3 “” 通过下拉框选择所选反应孔的检测样品类型，包 括未知样品（Unknow） 、标准品、阴性对照、阳性对照等等 5.4 在“”打勾：为所选样品指定检测的荧光类型（此 列为 SYBR Green） ，根据实验需要还可以在“Target Name”中输入扩增基因名称 5.5 在”” 输入所选检测孔的样品名，并打勾确认 5.6 如有重复性设置，可在复选重复性测试孔后在“”中 逐一指定；或者点击“”进行快速的重复反应孔设定即 在“”中分别填入重复的次数和重复起始编号，并 在””中选择重复放置的方向最后点击“”即可 5.7 如果在样品类型“Sample Type”中选择的为“Standard” ，则需要为标准品浓度赋值， 可在“”中对对应孔逐一赋值。

5.8 可在“”设定相对表达量差异分析时的内参、对照 样品及各样品的实际扩增效率 5.9 在“”可解除所选样品重复状态设置 3 5.10 “”可删除当前选定的样品孔设置 5.12 如有疑问，点击“”再次查看板编辑的流程 5.13 最后点击左上角的“Settings－Plate Type”选择实验所用耗材的类型 5.14 编辑完成后点击“OK”确认并保存孔位设置，该保存的设置可方便下次调用 6. 确定样品设置后点击右下角的“NEXT”或者点击“” 进入运行系统 此时可在“Notes”中输入实验测试的目的等相关信息，并在“”输入 样品反应体积最后点击“”按钮仪器会自动打开样品槽，此时 按照设置好的样品位置放置好样品，然后点击“”让仪器自动关 闭 样 品 槽 （ 注 意 ： 样 品 槽 开 或 关 闭 时 请 勿 强 行 扳 开 或 压 合 ） ， 热 盖 闭 合 后 “”会变亮，此时点击“” ，确定实 验数据的保存位置后，程序将开始运行 7. Note：程序运行中或运行结束后都可点击“”对“第 5 步骤”编 辑的样品类型进行再编辑，也可按照“第 5 步骤”的流程编辑新的设置类型等 8. 实验结束后，点击“” ，取出并丢弃反应板或管，同时点击 “”关闭样品槽后，再退出程序，关闭仪器电源，最后关闭电脑 后方可离开。

二．数据查看二．数据查看 9. 如需查看后分析数据， 可直接点击 “.pcrd” 文件或点击软件左上角 “File-Open-Data file” ， 选择需要分析的测试结果文件 10. 对于“” 中的“Quantification”可查看扩增曲线、标准曲线、96 孔板位置及 Ct 值； “Quantification Data”可查看所有反应孔的实验数据（包括设置的样品名、检测基因名及 Ct 值和标准差 等） ； “Melt Cure”可查看所选反应孔其检测因子的融解曲线等； “Melt Cure Data”可查 看所有反应孔的各因子其扩增子的 Tm 值等信息； 在编辑完成各样品反应孔的样品名 及检测因子名后， 再指定内参因子或指定内参因子和对照样品后， 点击 “Gene Expression” 4 即可得到各样品中各因子的表达量差异变化示意图和变化倍数； “End Point”指扩增完 成后其终点荧光值； “Customer Data View”可在同一界面查看扩增曲线、融解曲线、Ct 值、96 孔板设置的样品信息等； “QC”可设置数据判定的标准； “Run Information”可查 看实验反应程序。

详细的数据查看方式可查看 CFX Manager Soft 的中文使用说明书 11. 如需对不同的反应文件综合起来进行相对定量表达量差异分析，可点击左上角的 “File-New-Gene Study” ，打开窗口后，点击“”添加需要进行综 合进行表达量差异分析的文件；添加完场后选择“”进入另一个 界面，此时在“”设定相对表达量差异分析时的内参、 对照样品及各样品的实际扩增效率即可显示各样品中各因子的表达量差异示意图及差 异倍数等详细的数据分析方式可查看 CFX Manager Soft 的中文使用说明书 三．使用注意事项三．使用注意事项 1. 设备长时间不使用时，请勿将热盖打开，以免灰尘在 Block 上长期积累，影响热传递 2. 热盖打开和闭合时让设备自由运行，不得强行扳开或压合 3. 请勿同时使用不同规格的耗材 4. 为避免意外断电，建议为设备配置 UPS 稳压电源 5. 程序未结束时不得关闭系统电源，不得带电扳动设备背后的锁定杆 6. PCR 运行时请不要搬动设备，如需长途运输仪器请将仪器设备设置到运输状态，并合 理打包后在运输（可联系 BIO-RAD 工程师） 7. 该仪器为贵重设备，最好有专人管理！ BIO-RAD 广州地区售后服务广州地区售后服务 020-87322339 。