果蝇的三点试验.docx

果蝇的三点试验一、实验目的1. 掌握三点试验的原理与方法2. 学习三点试验的数据处理及分析3. 了解绘制遗传图谱的原理和方法二、实验原理 位于同一染色体上的基因是随染色体一起遗传的，即这些基因是连锁的，而同源染色 体上的基因之间会发生一定频度的交换，因此其连锁关系发生改变，使子代中出现一定数量 的重组型重组型出现的多少反映出基因间发生交换的频率的高低而基因在染色体上是呈 直线排列的，基因间距离越远，其间发生交换的可能性就越大，即交换频率越高，反之则小， 交换频率就低也就是说基因间距离与交换频率有一定对应关系基因图距就是通过重组值 的测定而得到的如果基因座位相距很近，重祖率与交换率的值相等，可以直接根据重组率 的大小作为有关基因间的相对距离，把基因顺序地排列在染色体上，绘制出基因图如果基 因间相距较远，两个基因往往发生两次以上的交换，这是如果简单的把重组率看作交换率， 那么交换率就会被低估，图距就会偏小这时需要利用试验数据进行校正，以便正确估计图 距基因在染色体上的相对位置的确定除进行两个基因间的测交外，更常用的是三点测交法， 即同时研究三个基因在染色体上的位置如a、b、c三个基因是连锁的，要测定三个基因的 相对位置可以用野生型果蝇（+++,表示三个相应的野生型基因）与三隐性果蝇（abc，三 个突变型基因）杂交，制成三因子杂种abc/+++，再用三隐性个体对雌性三因子杂种进行测 交，以测出三因子杂种在减数分裂中产生的配子类型和相应数目。

由于基因间的交换，除产 生亲本类型的两种配子外，还有六种重组型配子，因而在测交后代中有8 种不同表型的果蝇 出现，这样经过数据的统计和处理，一次试验就可以测出三个连锁基因的距离和顺序，这种 方法，就叫三点测交或三点试验三、实验材料黑腹果蝇（Drosophila melanogast）r品系： 野生型果蝇（+++）：红眼，长翅，直刚毛 三隐性果蝇（wmsn3）：白眼，小翅，焦刚毛 三、器具和试剂解剖镜，培养瓶，麻醉瓶，毛笔，吸水纸 培养基所需成分（参阅实验一），乙醚四、实验说明1. 性状特征：三隐性果蝇（wmsn3）个体的眼睛是白色的（w）；翅膀比野生型的翅膀 短些，翅仅长至腹端，称小翅血）；刚毛是卷曲的，称焦刚毛或卷刚毛（sn3）0这三个基因 都位于 X 染色体上，所以在本实验中可以同时进行伴性遗传的实验观察故实验步骤中列 出正反两种交配方式2. 交配方式：把三隐性雌蝇与野生型雄蝇杂交，所得子一代的雌蝇是三因子杂种⑷论,雄雌是wmsn3 （横线——表示一条X染色体，箭头横线 表示一条Y染色体）子T代雌、雄果蝇相互交配，得测交后代，如下图所示：F1wmsn3 %wmsn3子一代的雌蝇表型是野生型，雄蝇是三隐性。

得到的测交后代其中多数个体与原亲本 相同同时也会出现少量与原亲本不同的个测体交，即后重代组型重组型是基因间发生交换的结果在连锁的三基因里，交换可以发生在m-sn3之间（a）,也可以发生在sn3—w之间（b）, 或同时发生在m-sn3之间和sn3—w之间（c）总共可以产生8种不同的配子子一代雌蝇是三因子杂合体，可形成 8 种配子，而子一代雄蝇是三隐性个体，所以子 一代雌雄蝇相互交配时，即进行测交，子二代可以得到8种表型根据8种表型的相对频率， 可以计算重组值，并确定基因排列顺序3. 图距和重组值的关系：图距表示基因间的相对距离，通常是由两个临近的基因图距 相加得来的重组值表示了基因间的交换频率，所以图距往往并不同于重组值图距可以超 过 50％，重组值只会逐渐接近而不会超过50％，只有基因相距较近时，图距才和重组值相 等sn3 wsn3 wsn3 wm sn3 w+ sn3 w五、实验 ——+形成配子msn3wmsn3wmsn3+m+w++w+sn3++士++++形成配子c)1. 收集野生型的三隐性品系的处女蝇，培养在培养瓶中2. 按下列组合进行杂交：A.wmsn3wmsn3wmsn3野生型早 三隐性£每瓶接入5对，贴好标签，置25°C培养。

三隐性早 野生型£3. 7 天后 F1 蛹出现，倒净杂交亲本4. 再过4 — 5天后，F1成蝇不断孵出，观察A、B两种组合的F1代表型及性别，同时 作伴性遗传观察5.从F1中选出若干对果蝇（A、B组合不能弄混!）分别放到新的培养瓶中继续杂交每瓶 5 对6. 7 天后，蛹出现，倒净亲本7. 再过4 — 5天后，F2成蝇逐渐孵出，可开始观察统计8. F2观察统计：把F2果蝇倒出麻醉，放在白瓷板上，用双筒立体解剖镜检查眼色宁翅形和刚毛形态A组合和B组合分别统计，A组合只需统计雄性个体各类果蝇分别计 数检查过的果蝇倒入水池冲掉两天后再检查统计第二批，连续检查8〜10天，即3〜4次再25C下，自第一批果蝇孵出10天内是可靠的，再迟时F3代可能会出现要求每组 合至少统计 250 只果蝇六、实验作业 按下列顺序记录并统计 B 组合数据并计算：1. 先写出所得到的F2代8种表型，填入相应的数据于下表中2. 填写基因重组发生的情况由于测交亲本是三隐性，所以若基因间有交换，便可在 表型上显现出来因而从测交后代的表型便可推知某两个基因是否重组3. 确定正确的基因次序4. 计算基因间的重组值3. 计算双交换值。

4. 根据计算结果画出遗传学图5. 计算并发系数和干涉值三点测交实验观察记录测交后代表型观察数重组发生在w_mm—sn3w —sn3合计重组值七、思考题1. A组合F2统计为什么只需统计雄性个体？其雌性F2个体的表型如何？用A组合 的统计数据按“实验结果”的步骤再做一次计算和作图，与B组合结果作一比较2. 如果进行常染色体基因三点测交，在实验程序设计上与本实验有什么差别？需要注 意什么？。