样品采集及处理.docx

精选资料第一章样品的采集和办理范围本章规定了用于人免疫缺点病毒（HIV）检测的全血、血清、血浆、细胞、唾液、尿液以及滤纸干血斑（DBS）样品的采集和办理方法，适用于HIV抗体检测、抗原检测、核酸检测、耐药检测,CD4+和CD8+T淋巴细胞测定和HIV分别培育规范性引用文件《艾滋病和艾滋病病毒感染诊断标准》中华人民共和国卫生行业标准WS293-2008《艾滋病病毒感染者及艾滋病患者CD4+T淋巴细胞检测质量保证指南（试行）》（中国疾病预防控制中心，2006年2月）《HIV-1病毒载量测定及质量保证指南（试行）》（中国疾病预防控制中心，2008年2月）GuidelinesforUsingHIVTestingTechnologiesinSurveillanceWHO/CDS/CSR/EDC/2008《可感染人类的高致病性病原微生物菌（毒）种或样本运输管理规定》，卫生部第45命令2006年2月1日样品种类及相应的用途全血、血清、血浆、唾液、尿液以及DBS样品可用于HIV抗体检测抗凝全血可用于CD4+和CD8+T淋巴细胞测定血浆可用于HIV-1病毒载量、基因型及耐药检测DBS样品可用于HIV-1基因型及耐药检测。

全血、血浆、淋巴细胞富集液、外周血淋巴细胞（PBMC）及DBS样品可用于HIV核酸的定性检测PBMC、全血、淋巴细胞富集液等可用于HIV-1分别培育4操作步骤采样前准备依据检测项目的详尽要求，确立采集样品的种类、办理、保存及运输的时限和方法，依据临床采血技术规范的要求操作，遵守生物安全要求（拜见本规范第八章实验室生物安全）要检查所需物件能否已备齐，能否在有效期内，有无破坏，能否足量，特别应检查受检者信息与样品容器表面的标志能否一致，并注明样品采集时间选择适合的室内（外）采血空间，受检者坐（卧）于适合的地址，准备采血器具、皮肤消毒用品、采血管及试管架、硬质荒弃物容器等样品的编码和记录应拟定样品编码的标准操作程序（SOP），规定样品编码的原则和方法，为样品拟定独一性编码（编号），保证其独一性采血前，先对装有样品的离心管或滤纸进行标志，核对后编码要将标签贴在试管的侧面，最好使用早先印制好的、特地用于冷冻储蓄的耐低温标签应使用特地的样品记录本或登记表记录样品，同时录入电脑保存采集和办理样品血液抗凝全血：消毒局部皮肤，用加有抗凝剂（EDTA钠盐或钾盐、枸橼酸钠、肝素钠）的真空采血管抽取适当静脉血，或用一次性注射器抽取静脉血，转移至加有抗凝剂的试管中，轻轻颠倒混匀6～8次，备用。

可编写更正精选资料末梢全血：消毒局部皮肤（成人和1岁以上少儿可选择耳垂、中指、无名指或食指1岁以下少儿采纳足跟部）用采血针刺破皮肤，用无菌纱布擦掉第一滴血采集滴出的血液，备用血浆：将采集的抗凝全血1500～3000r/min离心15min，上层即为血浆，吸出置于适合的容器中，备用血清：依据需要，用一次性注射器（或真空采血管）抽取5～10ml静脉血，室温下自然放置1～2h，待血液凝固、血块缩短后再用1500～3000r/min离心15min，吸出血清，置于适合的容器中，备用淋巴细胞富集液：将采集的抗凝全血1500～3000r/min离心15min，汲取血浆层下的淋巴细胞富集液，置于适合的容器中，备用PBMC：使用淋巴细胞分别液，进行密度梯度离心，吸出PBMC层，备用依据检测要求采纳适合的抗凝剂，如CD4+和CD8+T淋巴细胞测定可采纳EDTA钠盐或钾盐、枸橼酸钠、肝素钠，HIV病毒分别、核酸定性/定量检测可采纳EDTA钠盐或钾盐或枸橼酸钠样品采集后办理、保存、运输的时限和条件，因不一样的检测项目而异，应拜见不一样检测项目要求采血完成后的穿刺针头一定扔掉于尖锐危险品容器里，妥当办理，防范发生职业裸露。

滤纸干血斑依据需要，可将采集的各种血液样品制备成滤纸干血斑，保存、运输及检测最常用的是用抗凝全血、末梢全血和血浆制备滤纸干血斑用移液器从样品管中汲取100μL抗凝全血（或血浆）样品，对准滤纸印圈的中心处，将样品滴在滤纸上，或将穿刺后自皮肤伤口流出的末梢全血直接滴加在滤纸印圈的中心处依据需要，连续在数个印圈上滴加样品于室温下自然干燥最少4小时（湿润天气下最少干燥24小时），不要加热或堆叠血斑，勿与其他界面接触血斑充分干燥后，将其放入密封袋中，防范血斑之间的互相污染，同时放入干燥剂及湿度指示卡，密封包装，保存备用尿液和唾液尿液：使用洁净的容器采集尿液女性应避开月经期尿液样品可以在2～8℃下存放存放时间、能否冻存以及能否增加防腐剂以试剂盒说明书为准唾液：使用试剂盒供给的容器采集唾液样品存放时间和能否冻存以试剂盒说明书为准样品的保存用于抗体和抗原检测的血清或血浆样品，短期（1周）内进行检测的可存放于2～8℃，一周以上应存放于-20℃以下用于核酸检测的血浆和血细胞样品4天内进行检测的可存放于4℃，3个月之内应存放于-20℃以下3个月以上应置于-70℃以下艾滋病检测筛查实验室检测的筛查阳性样品应及时送确证明验室，筛查阴性样品，可依据详尽需要决定保存时间，建议最少保存1～2个月。

特别用途或专项项目的样品依据详尽要求确立保存时间艾滋病检测确证明验室收到的筛查阳性样品，无论确证结果如何，均应将节余的样品保存最少年，特别用途或专项项目的样品依据详尽要求确立保存时间样品的运送应吻合生物安全要求；要获取相应部门同意并由拥有资质的人员专门护送应采纳三层容器对样品进行包装，随样品应附有与样品独一性编码相对应的送检单送检单应注明受检者姓名、样品种类等信息，并应搁置在第二层和第三层容器之间可编写更正精选资料第一层容器：直接装样品，应防渗漏样品应置于带盖的试管内，试管上应有明显的标志，注明样品的独一性编码或受检者姓名、种类和采集时间在试管的四周应垫有缓冲吸水资料，省得碰碎第二层容器：容纳并保护第一层容器，可以装若干个第一层容器要求不易破碎、带盖、防渗漏、容器的资料要易于消毒办理第三层容器：容纳并保护第二层容器的运输用外层包装箱外面要贴上醒目的标签，注明数量、收样和发件人及联系方式，同时要注明“当心轻放、防范日晒、当心水浸、防范重压”等字样，还应易于消毒用于抗体检测的血清和血浆样品应在冻存条件下运送用于CD4+和CD8+T淋巴细胞测定的样品应在室温下（18～25℃）或4℃（特别要求时）运送。

用于病毒载量检测的样品应在-20℃以下运输DBS样品应在室温下（18～25℃）运送每一件包装的体积以不超出50mL为宜运送样品一定有记录特别状况下经有关部门同意可以用特快专递邮寄样品，但一定按三层包装，将样品管包扎好，禁止使用玻璃容器样品的接收样品包裹一定在拥有办理感染性资料能力的实验室内、由经过培训的、衣着防范衣、戴口罩、防范眼镜的工作人员在生物安全柜中打开，用后的包裹应及时进行消毒核对样品与送检单，检查样品管有无破坏和溢漏如发现溢漏应马上将尚存留的样品移出，对样品管和盛器消毒，同时报告实验室负责人和上一级实验室技术人员检查样品的状况，记录有无严重溶血、微生物污染、血脂过多以及黄疸等状况假如污染过重也许以为样品不可以被接受，应将样品安全荒弃并将样品状况马上通知送样人接收样品时应填写样品接收单样品采集血清样品采集:用注射器抽出3毫升静脉血，室温下自然搁置1－2小时，待血液凝固和血块收缩后离心15分钟，吸出血清备用抗凝血样品采集：用加有抗凝剂的真空采血管抽取静脉血，转移至加有抗凝剂的试管屡次轻摇分别血浆和血细胞备用应依据实验要求采纳适合的抗凝剂(EDTA、肝素、枸橡酸钠等)，如需进行病毒RNA测定,应在48小时之内分别血浆。

采样注意事项临床采血技术规范及试剂说明书要求进行注意安全，直接接触HIV感染者或艾滋病病人血液和体液的操作应戴双层手套建议采纳真空采血管及蝶形针具,省得直接接触血液样品的保存用于抗体检测的血清或血浆样品应存放于-20℃以下，短期(1周)内进行检测的样品可存放于2－8℃用于抗原和核酸检测的血浆和血细胞样品应冻存于-20℃以下，进行病毒RNA检测的样品如长期(3个月以上)保存应置于-80℃样品的运送传达的样品应为血清或血浆，除特别状况外一般不运送全血样品应置于带盖的试管内，试管上应有明显的标志，注明样品的编号或受检者姓名、种类和采集时间随样品应附有送检样，送检样应与标安分开，不可以混放装入专用带盖的容器内，容器的资料要易于消毒办理在试管的四周应垫有缓冲吸水资料，省得碰碎假如行程较远或天气酷热，应在2－8℃条件下运送用于抗体检测的样品可在短期内(48小时)室温递送每一包装的体积不得超出50ml运送感染性资料一定有记录可编写更正精选资料如需对个别样品进行复测，可以用特快专递形式投寄，但一定将盛样品的试管包扎好，防范使用玻璃容器，以保证不会破碎和溢漏样品的接收含有感染性样品的包果一定在拥有办理感染源设备的实验室内由经过培训的工作人员打开，用后的包裹应进行消毒。

核对标本与送检单，检查样品管有无破坏和溢漏如发现溢漏应马上将尚存留的样品移出、对样品管和盛器消毒，同时还要报告有关领导和专家检查样品的状况，记录有无严重溶血、微生物污染、血脂过多以及黄症等状况可编写更正。