4.1.1蛋白质地分离与纯化方法.docx

word教学目标： 1、知识与技能： 2、过程与方法： 3、情感态度价值观： 教学重点：教学难点：掌握蛋白质的别离与纯化方法， 知道从生物材料中提取芳香油掌握蛋白质的别离与纯化三种方法的比拟过程培养学生科学实验的观点蛋白质的别离与纯化蛋白质的别离与纯化， 从生物材料中提取芳香油教学方法： 自主、合作、探究学习教具使用： 无教 学 教师主导活动 学生主体活动过程 课前：布置学习目标和预习提纲， 要求学生完成预习任务， 下发与收缴批改导学案〔附导学案〕课中：对上节课存在问题进展点拨新授：根据学生自学情况，引导学生分析主要的问题。

强调 以下几点思维点拨】1．说明用透析法、离心沉降法和电泳等方法纯化蛋白质的原理和大致过程2．影响电泳泳动速度的主要因素有哪些 ?这些因素是如何影 响泳动速度的 ?3． “血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳〞实验最关键的一步是什么?你能说出这一步的操作要求吗 ? 4．漂洗后的薄膜上可以看到几条色带 5．植物芳香油提取的常用方法有哪些 什么 ??分别代表什么 ? ?这些方法的原理各是【疑难解析 】1．蛋白质的别离纯化： ①根据蛋白质溶解度不同的别离方法——蛋白 质的盐析： 中性盐对蛋白质的溶解度有显著影响， 一般在低盐浓度下随着盐浓度升高， 蛋白质的溶解度增加， 此称盐溶； 当盐浓度继续升高时， 蛋白质的溶解度不同程度下降并先后析出， 这种现象称盐析， 将大量盐加到蛋白质溶液中，高浓度的盐离子 (如硫酸铵的 SO：一和 NH}) 有很强的水化力，可夺取蛋白质分子的水化层，使之 “失永〞， 于是蛋白质胶粒凝结并沉淀析出。

由于各种蛋白质分子颗粒大小、 亲水程度不同， 故盐析所需的盐浓度也不一样， 因此调节混合蛋白质溶液中的中性盐浓度可使各种蛋白质分段沉淀②根据蛋白质分子大小的差异的别离方法——透析：透析法是利用半透膜将分子大小不同的蛋白质分开 ③ 根据蛋白质带电性质进展别离——电泳法： 各种蛋白质在同一 pH 条件下，因分子量和电荷数量不同而在电场中的迁移率不同从而得以分开 值得重视的是等电聚焦电泳， 这 是利用一种两性电解质作为载体， 电泳时两性电解质形成一个由正极到负极逐渐增加的 pH 梯度，当带一定电荷的蛋白1 / 3学生进展预习，完成导学案学生对上节存在问题进展讨论学生自学根底知识学生根据导学案内 容 讨 论 并 展 示 个人、小组成果思考：蛋白质的别离常用的细胞破碎的方法：抽提方法：纯化主要是根据：常用的方法：醋酸纤维薄膜电泳的实验的根本步骤：色带：word质在其中泳动时，到达各自等电点的 pH 位置就停止，此法可用于分析和制备各种蛋白质。

2 ．实验原理： 醋酸纤维薄膜电泳 (CAME)是以醋酸纤维薄膜 (CAM)作支持物的一种区带电泳技术，将血清样品点样于醋纤膜上，在 pH 为8． 6 的缓冲液中电泳时，血清蛋白质均带负电荷移向正极由于血清中各蛋白组分等电点不同而致外表净电荷量不等，加之分子大小和形状各异， 因而电泳迁移率不同， 彼此得以别离电泳后， CAM经染色和漂洗，可清晰呈现清蛋白、α1 一球蛋白、α 2 一球蛋白、β球蛋白、 γ一球蛋白 5 条区带，比色即可计算出血清各蛋白组分的相对百分数布置学生课堂检测，并重点提示板 书 设计课后：布置课外作业与下一节预习提纲 〔见导学案〕生物成分的别离与测定技术蛋白质的别离常用的细胞破碎的方法：抽提方法：纯化主要是根据：常用的方法：醋酸纤维薄膜电泳的实验的根本步骤：色带：学生完成课堂检测学生完成课外作业与下一节预习教 学札记2 / 3word三、其他补充教学资料生物成分的别离与测定技术导学案一、学习目标：二、知道蛋白质的别离常用的细胞破碎的方法，蛋白质抽提方法，掌握蛋白质的别离与纯化方法。

二、知识构成：1．蛋白质的别离常用的细胞破碎的方法有：根据蛋白质的不同特性，分别可选择哪些抽提方法？、、蛋白质的纯化主要是根据之间以与之间在 、、 、等方面存在的差异进展的常用的方法包括、 、等2 ．用电泳别离纯化蛋白质时，泳动速度主要取决于，即 此外， 、等因素对泳动速度也有影响3 ．血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳的实验的根本步骤包括： 、、 、 、、、 、、、 4 ．浸泡醋酸纤维薄膜前，用笔做记号是在 ( 填 “光泽面〞或“非光泽面〞或“非光泽面〞 ) ；平悬薄膜时， (填“光泽面〞或“非光泽面〞 ) 朝上5．经电泳后，可以在薄膜上看到条色带，它们分别是、、、、 。

)； 点样是在 ( 填“光泽面〞'6 ．植物芳香油的提取方法有和等三、学法和自检：本节内容主要通过看书、分析蛋白质的提取、别离、纯化的不同方法动手试一试：[1] 盐析法别离蛋白质的原理是 ( )A ．破坏蛋白质的一级结构 BC ．破坏蛋白质水化膜而改变溶解度．破坏蛋白质的二级结构D ．使蛋白质发生变性沉淀[2] 利用透析法将蛋白质和其他小分子物质别离的原理是 A. 利用蛋白质分子不能透过半透膜的特性C．利用蛋白质分子的胶体性 D( )B ．利用蛋白质分子的水溶性．利用蛋白质分子所带电荷[3] ．如下关于血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳实验的说 法不正确的答案是 ( )A ．实验所用的巴比妥缓冲液的 pH 为 8． 6 B ．点样是在薄膜的光泽面上进展的C ．实验后可以得到五条色带 D ．整个实验最关键的步骤是点样[4] ．有一混合蛋白质溶液，各种蛋白质的 pH分别为 4 ． 5、 5． 2、 6． 6、 7． 2，电泳时欲使其中三种泳向正极，如此缓冲液的 pH 应该是 ( ) A ． 2． 0 B ． 5． 0 C ． 6． 0 D ． 7． 0四、 、学习小结和课外作业：1、学习小结：2、上本作业：列举3、课本： 64 页 1、4、补充练习：蛋白质粗提取时次报的破碎、蛋白质的抽提、纯化方法。

2、 3、 4、 58．请根据血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳实验回答下 列问题：(1) 实验所用的主要试剂有：(2) 实验所用的缓冲液的 pH为 ，因为 3) 点样应点在薄膜的面，方法是用在血清中蘸一下，在离薄膜一端(4) 实施电泳时，所用电压为，膜宽电流强度，时间5) 实验结果时，薄膜上呈条色带，分别代表cm处轻轻按下，随即提起3 / 3。