番茄酱中番茄红素和β—胡萝卜素.docx

番茄酱中番茄红素和β—胡萝卜素 番茄酱中番茄红素和β—胡萝卜素的提取分别及分析测定一、试验目的 1、理解有机溶剂提取番茄红素和β—胡萝卜素的方法及原理 2、驾驭萃取分别过程的根本操作 3、驾驭层析柱的操作 4、驾驭分光光度法的测定色素含量的方法 5、驾驭试验数据的处理及色素含量的计算方法 二、试验原理 番茄酱浓缩了番茄中的番茄红素和β-胡萝卜素，二者的构造均属于类胡萝卜素因而在构造上极为相像番茄红素构造化学式如下： β-胡萝卜素构造化学式如下： 类胡萝卜素为多烯类色素，不溶于水而溶于脂溶性有机溶剂本试验先用较高极性的溶剂提取较高极性的色素，同时脱去样品中的存在的少量水分；再用较低极性的溶剂补充提取较低极性的色素因为低极性溶剂不与水混溶，故先除去水分后才能有效地从组织中较完全地萃取类胡萝卜素依据番茄红素与β-胡萝卜素极性的差异，用柱层析可以将它们分别 番茄红素在不同的有机溶剂里均有类似的汲取峰,最大汲取峰的波长在500nm旁边，将分别后的样品溶解在适当的溶剂中,在最大汲取峰处用分光光度 计测定溶液的吸光度；番茄红素标准品价格昂贵,且本身稳定性差,不宜长期保存。

依据苏丹红〔Ⅰ〕在500nm旁边和番茄红素、β-胡萝卜素具有一样的汲取特性，以苏丹红代替番茄红素作为标准品，用氯仿作为溶剂及参比液，在500nm旁边测定苏丹红的系列吸光度，绘制标准曲线；用番茄红素的提取液的吸光度值在此标准曲线上查取相应浓度，以此来表征番茄红素的浓度通过换算得到番茄酱中该色素的含量 β-胡萝卜素的含量采纳色价的测定及计算方法色价是色素在商业上的浓度计量方式，定义为单位质量原料的提取物在1％浓度、以1cm比色皿在其最大汲取峰处的吸光度色价的特点是不须要校准样，也不需作标准曲线，简洁快速详细操作是取样品m克，在天平上精确称重，用Vml石油醚溶解，以石油醚作参比液，在λmax下测量样品溶液的吸光度A，样品色价E按下式计算： 三、物理常数分子相对分名称 外观 式 子质量 番茄红素 β-胡萝卜素 溶解度 最大吸熔点 乙氯石油收波长℃ 水 醇 仿 醚 λ 针状深红色不微可485～536.88 174 可溶 晶体 溶 溶 溶 500nm 紫红或暗红176～不微可536.88 色结晶或结可溶 480nm 182 溶 溶 溶 晶性粉末 四、试剂和仪器 1、试剂及原料 亨氏番茄酱、95%乙醇〔C.P〕、二氯甲烷〔C.P〕、石油醚〔60-90℃〕、氯仿〔A.R〕、中性氧化铝〔C.P〕、氯化钠〔C.P〕、无水硫酸钠〔C.P〕、苏丹红Ⅰ〔C.P〕 2、仪器 回流装置、恒温磁力搅拌器、层析柱(15cm左右内径为1-1.2cm)、分析天平, 移液管、容量瓶、VIS-7320分光光度计 五、试验步骤 1、混合色素的提取 称取别致番茄浆[1]10g于50ml枯燥的圆底烧瓶中，加极性的试剂(建议用95%乙醇)［A］20ml，摇匀，装上回流冷凝管及恒温磁力搅拌器，在相应温度的水浴中加热，回流5分钟，冷却后抽滤，滤液干脆进入一个的50ml锥形瓶中。

残渣转入原50ml圆底烧瓶中瓶内，参加15ml低极性溶剂(建议用二氯甲烷)［A］，在相应温度的水浴上回流5分钟，冷却，混合物常压过滤，滤液干脆滤入以上50ml锥形瓶中，再加5ml低极性溶剂洗涤残渣，过滤合并高极性提取液和两次低极性提取液，倒入101ml分液漏斗中，加4ml饱和氯化钠溶液[2]，振荡萃取，静置分层分出较深色有机相后，使其流经一个在颈部装有疏松棉花且在棉花上铺有6g无水硫酸钠的漏斗，以除去其中的微量水份再用5ml低极性溶剂洗涤枯燥剂，合并枯燥后所得的溶液于一枯燥的50ml圆底烧瓶中 水浴蒸馏溶液，蒸出大局部溶剂后，在通风橱内干脆水浴加热圆底烧瓶 [3]，并用洗耳球不断向圆底烧瓶吹气,直到完全蒸干为止备用 2、层析柱的制备 取一支长15cm左右内径为1-1.2cm的枯燥的层析柱，将其垂直固定于铁架上，底部铺上少量棉花，翻开活塞称取8g氧化铝当心倾入层析柱中，在氧化铝上铺一层棉花[4]然后向柱内参加15ml石油醚，让溶剂浸润并流过层析柱，留意柱顶部溶剂不能干枯待溶剂液面刚好与氧化铝外表相切时，关闭活塞，备用 3、柱层析分别 向蒸干的粗样品中参加2ml苯使其溶解。

用一长颈滴管取样，当心滴入层析柱内，留意产品不能接触柱壁[5] 翻开活塞，让溶液自然流下，待液面刚好与柱顶氧化铝外表相切时，参加2ml石油醚，用50ml枯燥的锥形瓶[6]接收滴出的溶液待溶剂液面与氧化铝外表相切时，再参加8ml或更多的石油醚，至滴出 的溶液无色，关闭活塞，收集黄色的β-胡萝卜素溶液(a)；翻开活塞，再往层析柱中先后参加2ml及8ml的氯仿，洗至滴出的溶液无色，用另一50ml枯燥的锥形瓶[6] 接收，关闭活塞，收集溶液红色的番茄红素〔b〕然后用相应温度的水浴蒸干(a)、(b)，差重法分别称出相应浓缩物的重量Wa、Wb(准确到0.0002) 4、苏丹红(Ⅰ)工作曲线 用分析天平精确称取约5.0mg苏丹红(Ⅰ)于小烧杯中，参加少量溶剂(建议用氯仿)［B］在通风橱内水浴加热搅拌溶解，待溶液冷却至室温后全部转移到101ml的容量瓶中，用溶剂(建议用氯仿)稀释定容至刻度线，可得到50μg/ml的标准液然后用10ml的移液管分别移取该溶液2ml、4ml、6ml、8ml、10ml于五个25ml的容量瓶中，然后参加溶剂将其稀释定容至刻度，它们浓度分别为4μg/ml、8μg/ml、12μg/ml、16μg / ml、20μg/ml。

用该溶剂作参比溶液，在波长为510nm 下分别测其吸光度，以吸光度对浓度作图，可得到吸光度对浓度的标准工作曲线图及关系式 5、番茄红素及β-胡萝卜素含量的测定［D］ 5.1、番茄红素含量的测定及百分含量的计算 往蒸干〔b〕所得的浓缩物中参加5ml的氯仿溶解，此溶液的浓度为C1；用1ml移液管移取0.5ml该溶液于25ml锥形瓶中，用定量的氯仿分步稀释该溶液，使溶液的颜色与吸光度为0.5左右的苏丹红(Ⅰ)溶液的颜色接近，此时溶液的浓度为C2［7］在400-600nm区间测定番茄红素最大汲取波长λmax，在此λmax下测其吸光度［C］将该吸光度值代入标准工作曲线，求出其浓度C2，从而推算出番茄酱中番茄红素的含量 其中：f是C1稀释到C2倍数；各值的单位：C2：μg/ml;W 番茄酱：g. 5.2、β-胡萝卜素含量的测定及色价的计算［D］ 用5ml石油醚作溶剂溶解(a)的浓缩物，取出１ml，再用石油醚稀释3-5倍，使 其吸光度值落在0.3-0.7的范围内然后以石油醚作参比溶液,在480nm测其吸光度由色价公式算出稀释后的浓缩物中β-胡萝卜素的色价，从而推算出样品番茄酱中β-胡萝卜素的色价。

色价计算公式： E：稀释后浓缩物的色价、A：吸光度、V：稀释浓缩物所用石油醚的总体积(ml)、m：浓缩物〔b〕的质量Wb(g) 番茄酱中β-胡萝卜素的色价计算公式： m稀释后浓缩物E稀释后浓缩物 = m番茄酱E 番茄酱试验探究局部(下划线局部为试验探究内容，可以选择不同条件) ［A］、较高极性溶剂可选择: 95%乙醇〔C.P〕，丙酮〔C.P〕，甲醇〔C.P〕；较低极性溶剂可选择：二氯甲烷〔C.P〕、乙醚〔C.P〕，石油醚〔C.P〕〔30-60℃〕 ［B］、溶解苏丹红的溶剂选择：氯仿，甲苯，石油醚选择条件参考物理常数表中 ［C］、波长位点选择： 依据试验测定番茄红素、β-胡萝卜素吸光度的最大波长来选择测定时的λmax ［D］、含量的数据处理方法的选择：科研中常用的运用标准样的百分含量计算法；商业中常 用的不运用校准样的色价计算法 注释 [1]、番茄酱采纳 “亨氏番茄酱”.称取番茄酱时，可干脆用大口胶头滴管从瓶里吸取番茄酱参加到圆底烧瓶底 [2]、饱和氯化钠可防止乳化并有利于分层. [3]、进展该操作时，边振荡边拿着洗耳球向瓶中吹气，有利于加速蒸干溶剂。

[4]、棉花的作用是防止氧化铝被倾入的溶剂冲散，从而保证氧化铝外表的平整 [5]、使层析中各成分能同步流出 [6]、称空锥形瓶的重量,以备用差重法计算产物重量：m稀释后浓缩物E稀释后浓缩物 = m番茄酱E 番茄酱 [7]、颜色深浅与吸光度的大小有对应关系，故相近颜色表相近的吸光度从而依据确定溶液的吸光度选择待测液的吸光度落在合理的测定范围内，使测定结果准确度较高 思索题 1、加饱和氯化钠萃取后，应保存颜色较深的层.颜色较深那一层是有机层还是水层？ 2、为什么在接收滴出的β-胡萝卜素时要在有色物溶液刚滴出时换另一个枯燥的锥形瓶接收溶液,而且此锥形瓶须要称重？ 3、配制不同浓度的苏丹红(Ⅰ)溶液作标准曲线时，能否用量筒量取苏丹红(Ⅰ)溶液和氯仿？为什么？ 本文来源：网络收集与整理，如有侵权，请联系作者删除，谢谢！第8页 共8页第 8 页 共 8 页第 8 页 共 8 页第 8 页 共 8 页第 8 页 共 8 页第 8 页 共 8 页第 8 页 共 8 页第 8 页 共 8 页第 8 页 共 8 页第 8 页 共 8 页第 8 页 共 8 页。