real-time_qpcr全攻略
22页1、Real-time qPCR 手册-手把手教你从菜鸟到高手 Real-time qPCR 手册手册手册手册-手把手教你从菜鸟到高手手把手教你从菜鸟到高手手把手教你从菜鸟到高手手把手教你从菜鸟到高手 2 北京百泰克生物技术有限公司 E-mail: Tel:010-62951781 62979408 82783852 目录目录目录目录 前言前言前言前言. 3 一一一一、 Real-time qPCR 发展史发展史发展史发展史.3 二二二二、 Real-time qPCR 概述概述概述概述.3 三三三三、 Real-time qPCR 实验设计实验设计实验设计实验设计8 四四四四、 Real-time qPCR 操作操作操作操作过程过程过程过程.9 五五五五、 Real-time qPCR 数据分析数据分析数据分析数据分析.16 六六六六、 Real-time qPCR 常见问题分析常见问题分析常见问题分析常见问题分析.19 Real-time qPCR 手册手册手册手册-手把手教你从菜鸟到高手手把手教你从菜鸟到高手手把手教你从菜鸟到高手手把手教你从菜鸟到高手 3 北京百泰克生物技术有限公
2、司 E-mail: Tel:010-62951781 62979408 82783852 Real-time qPCR 手册手册手册手册-手把手教你从菜鸟到高手手把手教你从菜鸟到高手手把手教你从菜鸟到高手手把手教你从菜鸟到高手 前言前言前言前言 由于由于由于由于 Real-time qPCR 的众多优点的众多优点的众多优点的众多优点,现在已经是现在已经是现在已经是现在已经是生命科生命科生命科生命科学领域的一项常规技学领域的一项常规技学领域的一项常规技学领域的一项常规技 术术术术。越来越多的研究文章中涉及越来越多的研究文章中涉及越来越多的研究文章中涉及越来越多的研究文章中涉及 RT-PCR 的实验的实验的实验的实验,也基本上被也基本上被也基本上被也基本上被 real-time qPCR所代替所代替所代替所代替。由于由于由于由于 real-time aPCR 输出的数据不同于常规的输出的数据不同于常规的输出的数据不同于常规的输出的数据不同于常规的 PCR 电泳检测电泳检测电泳检测电泳检测,很很很很多没多没多没多没 有做过有做过有做过有做过 real-time qPCR 的研究者的研究者的
3、研究者的研究者常常常常常常常常感到高深莫测感到高深莫测感到高深莫测感到高深莫测,不知从何入手不知从何入手不知从何入手不知从何入手;甚至一些甚至一些甚至一些甚至一些做过次实验的研究者也会对数据处理分析做过次实验的研究者也会对数据处理分析做过次实验的研究者也会对数据处理分析做过次实验的研究者也会对数据处理分析感到迷惑感到迷惑感到迷惑感到迷惑,不知所措不知所措不知所措不知所措。本文就从本文就从本文就从本文就从 real-time qPCR 的发展史说起的发展史说起的发展史说起的发展史说起,包括包括包括包括 real-time qPCR 的原理的原理的原理的原理,实验设计实验设计实验设计实验设计,实际实际实际实际操作操作操作操作(以以以以 ABI StepOne 仪器仪器仪器仪器,和北京百泰克生物技术有限公司的试剂为例和北京百泰克生物技术有限公司的试剂为例和北京百泰克生物技术有限公司的试剂为例和北京百泰克生物技术有限公司的试剂为例) ,) ,) ,) ,数数数数 据分析据分析据分析据分析,常见问题解答五个方面常见问题解答五个方面常见问题解答五个方面常见问题解答五个方面,手把手教你从各个方面了解
4、手把手教你从各个方面了解手把手教你从各个方面了解手把手教你从各个方面了解 real-time qPCR,彻底的从菜鸟到高手彻底的从菜鸟到高手彻底的从菜鸟到高手彻底的从菜鸟到高手! 一一一一、Real-time qPCR 发展史发展史发展史发展史 Real-time qPCR 就是在 PCR 扩增过程中,通过荧光信号,对 PCR 进程进行实时检测。由于在 PCR 扩增的指数时期,模板的 Ct 值和该模板的起始拷贝数存 在线性关系,所以成为定量的依据。由于常规的 PCR 的缺点,real-time qPCR 由于其操作简便,灵敏度高,重复性好等优点发展非常迅速。设在已经涉及到生命 科学研究的各个领域,比如基因的差异表达分析,SNP 检测,等位基因的检测,药物开发,临床诊断,转基因研究等。 在 Real-time qPCR 技术的发展过程中,定量 PCR 仪的发展起了至关重要的作用。1995 年,美国 PE 公司(已经并入 Invitrogen 公司)成功研制了 Taqman 技术,1996 年推出了首台荧光定量 PCR 检测系统,通过检测每个循环的荧光强度,通过 Ct 值进行数据分析。从而
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