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聚谷氨酸的检测方法

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卖家[上传人]：kms****20

文档编号：39988010

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1、聚谷氨酸测试方法聚谷氨酸测试方法1.0 适用范围：本方法适用于聚谷氨酸半成品及成品的 HPLC 纯度分析(第 4 段、第 5 段中，蓝字为食品级及化妆品级 PGA 纯品粉末的样品制备方法;红字为 PGA 发酵液的样品制备方法) 2.0 仪器与设备： 2.1 Pump：SHIMADZU LC-10AT 2.2 Autosampler：PERKIN ELMER series 200 autosampler 2.3 Col umn ：TOSOH TSK Guard columnTOSOH TSK-GEL G6000PWXL TOSOH TSK-GEL G3000SW2.4 Detector：PERKIN ELMER 785A UV/VIS Detector 3.0 试剂的制备 3.1 0.05M Na2HPO4 (disodium hydrogenophosphate , MW. 141.96g/mol) 称取 Na2HPO4 7.1g ，加入去离水 800mL 溶解，最后以去离水定容至 1L 。 3.2 0.05M NaH2PO4H2O (Sodium dihydrogenophosph

2、ate monohydrate, MW.137.99g/mol) 称取 NaH2PO4H2O 6.9g，加入去离水 800mL 溶解，最后以去离水定容至 1L。 3.3 磷酸缓冲溶液，pH7.0 将 0.05M Na2HPO4与 0.05M NaH2PO4H2O 以约 10：7 的比例混合，微调至 pH7.0，以 0.45m 滤膜过滤。 4.0 PGA 样品前处理 4.1 称取 PGA 样品 0.04-0.05g 置入 50mL 烧杯中。 4.2 加入 40mL 的 0.05M Na2HPO4溶液。 4.3 利用磁石搅拌使样品完全溶解。 4.4 移入 50mL 定量瓶，以 0.05M Na2HPO4溶液定容至 50mL。 4.5 以 0.45m 滤膜过滤，装入样品瓶中。 4.6 将样品放入 HPLC 分析。5.0 发酵液样品前处理 5.1 称取发酵液 2 g 置入 100mL 烧杯中，加入去离子水 80mL，利用磁石搅拌均匀。 5.2 以 1N H2SO4调整 pH4.0。 5.3 移入 100mL 定量瓶，以去离子水定容至 100mL。 5.4 取离心管秤取样品约 80g（重量包含

3、离心管、盖、标签、样品）。 5.5 利用高速离心机将菌体及杂质分离。离心条件为：转速 12,000rpm，时间 10min，温度控制在 4下。 5.6 离心后取上层液，以 0.45m 滤膜过滤后，装入样品瓶中。5.7 将样品放入 HPLC 分析。 6.0 标准品配制 6.1 称取 PGA 标准品 1g，加入 0.05M Na2HPO4溶解，最后定容至 100mL，作为 PGA 标准稀释溶液，浓度为 10000g/mL。 6.2 取 5 只 50mL 定量瓶，分别加入 PGA 标准稀释溶液 (10000g/mL) 1、2、3、4、5mL，以 0.05M Na2HPO4 定容至 50mL，其各点浓度分别为 200、400、600、800、1000g/mL。(分装储存于-20，使用时取出解冻，分析完后丢弃) 6.3 分别以 0.45m 滤膜过滤，装入样品瓶中，待上机分析。 7.0 HPLC 分析条件 Column ： TOSOH TSK Guard columnTOSOH TSK-GEL G6000PWXL TOSOH TSK-GEL G3000SWMobile phase ：磷酸缓衝溶液，pH7.0 Flow ： 0.5mL/min Detector ： UV220 nm 7.1 标准品与样品分别以 Autosampler 取 20l 注入 HPLC 作定性定量分析。 7.2 另作空白组，操作步骤同检液。 7.3 以波峰面积为纵座标，-PGA-H 标准品的含量为横座标，绘制标准曲线，并建立线性回归方程式。 7.4 将样品的波峰面积数值，代入标准品线性回归方程式中，求得 -PGA 样品溶液的浓度，再带入计算公式，换算 -PGA 纯度。8.0 计算 -PGA 样品溶液的浓度以回归方程计算 y = ax + b x (yb) / a a：斜率 b：截距 y：样品的波峰面积 x：样品的浓度,g/mL -PGA 的纯度 (%) = 100 =（C 樣 D.F）/W 100C 样：样品的浓度(g/mL) D.F：样品的稀释倍数 W ：称取样品重量, g 作为拌种剂使用一般稀释作为拌种剂使用一般稀释 5-10 倍拌种。倍拌种。

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