QIAGEN DNA甲基化试剂盒说明中文版
4页1、QIAGEN EpiTect Bisulfite二IBisulfite reactionDNA and EpiTect reaction buffersWashDesulfonationWash (x 2)Load Spin ColumnAdd Buffer BWAdd Buffer BDAdd Buffer BWDNA conversion in thermal cycler (5 h)Transfer to 1.5 ml microtube Add Buffer BLEpiTect Bisulfite Conversion Procedure 重亚硫酸盐处理 DNA 时, 需要经高盐浓度、高温和低 PH 条件,会导致 DNA 断裂和片段 化,并在随后的纯化过程中丢 失,所以需要大量的 input DNA 重亚硫酸盐转化未甲基化 的胞嘧啶,转化率超过 99% Bisulfite Mix 足够做 8 个 反应,用时要将 Bisulfite Mix 溶于 800山 RNase-free water 中, 溶解的 Bisulfite Mix 在-20C可 以保存4周 DNA Protect
2、 Buffer 能保 护重亚硫酸盐处理的DNA在高 温、低ph条件下被片段化 Carrier RNA 能提高小量 DNA (小于500pg,体积大于 40山)绑定在回收柱滤膜上的 效率,帮助核酸沉淀;总量大 于100ng的基因组DNA没有必 要加 Carrier RNA EpiTect Bisulfite Kit 在-20C 可以保存 3 年;可以适用于大 范围的DNA量,input DNA范 围为1ng2yg;模板DNA片段 范围可以在500bp30kb之间ProtocolDNA量在1ng2pg之间,体积20山以上开始前的准备重点: Bisulfite Mix 足够做 8 个反应,如果样本少于 8 个,可以把溶解的 Bisulfite Mix 保存于 -20C, 4周内并不会影响其性能 DNA Protect Buffer在加入DNA-Bisulfite Mix后会由绿变蓝(step 2),表明溶液混合很充 分且PH值正确 所有的离心分离步骤均在室温(15-25C)下完成开始前准备的东西: 加入30ml乙醇(96%100%)到Buffer BW中,室温(15-25C)保存,使用之前摇
3、匀 加入27ml乙醇(96%100%)到Buffer BD中,28C保存,使用之前摇匀,使用之后要 立即盖上盖子。储存一段时间后底部可能会出现白色沉淀,沉淀不影响 Buffer BD 的性 能,但是还是要避免将沉淀吸到回收柱中。 加入310山RNase-free water到冻干的carrier RNA (310 |ig)中,配成1愿/山的溶液。当 一次处理48个样本,将溶解的carrier RNA加入到Buffer BL的瓶子中,摇匀并确认瓶盖 标签。如果处理的样本较少,则将溶解的carrier RNA分装,并储存于-20C,分装的carrier RNA 能保存 1 年。如果少于 48 个样本要在2 周之内完成处理,则参照表 1 的体积比取 一定体积的Buffer BL与carrier RNA混合。DNA量大于100ng不需要加carrier RNA。如 果Buffer BL有沉淀,则需加热(最高不超过70C )并温和搅拌使其溶解。表 1 Buffer BL 与 carrier RNA 的体积比Number of samples48162448Volume ofBuffer BL*6
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