细菌生长曲线
2页1、实验九测定细菌生长曲线实验目的1. 了解细菌生长曲线特征:2.学习液体培养基的配制以及注意事项。3.学 习液体种子和固体种子的不同接种方法和注意事项。4.利用细菌悬液浑浊度间接测定细菌 生长。仪器和材料1. 实验材料(1)大肠杆曲,枯草杆曲培养液及大肠杆菌平板。(2)牛肉膏蛋门胨葡萄糖培养基(150ml/ 250ml三角瓶X 4瓶/大组),配方:牛肉膏5g, 蛋白胨 10g, NaCl 5g,葡萄糖 10g,加水至 1000ml, pH7. 5。2. 实验仪器取液器(5000|J l, 1000p l, 200tp l各一支);培养箱.摇床,722s分光光度汁;1000 p l无菌吸头100个;5000p l无菌吸头2个;1ml或4ml玻璃或塑料比色皿4个,共用参 比杯一个。实验原理将一定量的细菌接种在液体培养基内.在一定的条件下培养,可观察到细菌的生长 繁殖有一定规律性,如以细菌活菌数的对数作纵坐标,以培养时间作横坐标,可绘成一条曲 线,称为生长曲线(图9 1)。单细胞微生物发酵具有4个阶段,即调整(迟滞期)、对数期(生长旺盛期)、平衡期(稳定 期)、死亡期(衰亡期)。生长曲线可表示
2、细菌从开始生长到死亡的全过程动态。不同微生物有不同的生长曲线, 同一种微生物在不同的培养条件下,其生长曲线也不一样。因此,测定微生物的生长曲线对 于了解和掌握微生物的生长规律是很有帮助的.测定微生物生长曲线的方法很多,有血细胞计数法,平板菌落计数法,称重法和比浊 法等。本实验采用比浊法测定,由于细菌悬液的浓度与浑浊度成正比,因此,可以利用分光 光度计测定菌悬液的光密度来推知菌液的浓度。将所测得的光密度值(测OD550或OD620 或OD600或OD420,可任选一波长)与对应的培养时间作图,即可绘出该菌在一定条件下的 生长曲线。注意,由于光密度表示的是培养液中的总菌数,包括活菌与死菌,因此所测生长 曲线的衰亡期不明显。从生长曲线我们可以算出细胞每分裂一次所需要的时间,即代时,以G表示。其 计算公式为;G=(t2-t1)/(1gW1lgW2) / lg2式中tl和t2为所取对数期两点的时间;w1和w2分别为相应时间测得的细胞含量(g/L) 或OD。实验步骤1. 准备菌种:将大肠杆菌,枯草杆菌分别接种到装有牛肉膏蛋白胨葡萄糖培养基 的三角瓶中,37C, 200r / min振荡培养14-1
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