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食品生物化学实验PPT课件(共38单元)14 实验十四 蛋白质的性质实验 (二) ———蛋白质沉淀反应
10页食品生物化学实验FOOD BIOCHEMISTRY EXPERIMENT实验十四实验十四 蛋白质的性质实验 (二) 蛋白质沉淀反应一、实验目的() 加深对蛋白质胶体溶液稳定因素的认识。 () 了解蛋白质变性与沉淀的关系。 () 学习沉淀蛋白质的几种方法。二、 实验原理水溶液中的蛋白质分子由于表面生成水化层和双电层而成为稳定的亲水胶 体颗粒, 在一定理化因素影响下蛋白质颗粒可因失去电荷和脱水而沉淀。 蛋白 质的沉淀反应可分为以下两类。 .可逆性沉淀反应 蛋白质分子的结构尚未发生显著性变化, 除去引起沉淀的因素后, 蛋白质 的沉淀仍能溶于原来的溶剂中, 并保持其天然性质。 如盐析作用或低温下的有 机溶剂沉淀法, 此类反应常用于蛋白质的提纯实验中。二、 实验原理.不可逆性沉淀反应 蛋白质分子的结构发生重大改变, 蛋白质常因变性而沉淀, 不能再溶于原来的溶剂中, 如加热、 重金属沉淀或与某些有机酸的反应。 但是在某些情况下, 蛋白质虽然发生变性, 但由于维持溶液稳定的条件仍然存在, 所以蛋白质并不一定会发生沉淀。三、 器材与试剂.器材 离心机。 .试剂 ()结晶粉末, ()饱和溶液, 卵清蛋白溶液, 硝 酸银溶液, 三氯乙酸溶液, 乙醇。四、 实验内容.盐析 向试管内加入 卵清蛋白溶液, 然后加入等量的 ()饱和 溶液, 混匀后静置数分钟, 观察球蛋白的析出。 取少量混浊液, 加入一定量水,观察沉淀是否溶解? 将试管内溶液过滤, 向滤液中加()结晶粉末直到 不能溶解为止, 观察清蛋白的析出。 放置片刻倾出上清液, 向沉淀中加一定量的水, 观察沉淀是否溶解? 为什么?四、 实验内容.重金属离子沉淀蛋白质 向试管内加入 卵清蛋白溶液, 然后加入 滴 硝酸银溶液, 观察沉淀析出。 放置片刻倾出上清液, 向沉淀中加一定量的水, 观察沉淀是否溶解? 为什么? .有机酸沉淀蛋白质 向试管内加入 卵清蛋白溶液, 然后加入 三氯乙酸溶液, 混匀, 观察沉淀的生成。 放置片刻倾出上清液, 向沉淀中加一定量的水, 观察沉淀是否溶解? 为什么? .有机溶剂沉淀蛋白质 向试管内加入 卵清蛋白溶液和 乙醇溶液, 混匀, 观察 沉淀生成, 取沉淀加水, 观察沉淀是否溶解? 为什么?思考题分析几种蛋白质沉淀的原理及其应用方向。THANKS
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