甲醛滴定法测定氨基酸(共4页).doc

精选优质文档-----倾情为你奉上实验九 甲醛滴定法测定氨基酸一、目的掌握甲醛滴定法测定氨基酸含量的原理和操作要点 二、原理氨基酸是两性电解质，在水溶液中有如下平衡：H3N+—R—COO—H2N—R—COO—+H+-NH是弱酸，，完全解离时pH为11～12或更高，若用碱滴定-NH所释放的H+来测量氨基酸，一般指示剂变色域小于10，很难准确指示终点常温下，甲醛能迅速与氨基酸的氨基结合，生成羟甲基化合物，使上述平衡右移，促使-NH释放H+，使溶液的酸度增加，滴定终点移至酚酞的变色域内(pH9.0左右)因此，可用酚酞作指示剂，用标准氢氧化钠溶液滴定R-CH(COO—)-NHR-CH(COO—)-NH2+H+中和R-CH(COO—)-NH2R-CH(COO—)-NHCH2OHR-CH(COO—)-N(CH2OH)2 如样品为一种已知的氨基酸，从甲醛滴定的结果可算出氨基氮的含量（脯氨酸与甲醛作用生成不稳定的化合物，使滴定mL数偏低酪氨酸的滴定mL数偏高）如样品是多种氨基酸的混合物，如蛋白水解液，则滴定结果不能作为氨基酸的定量依据但此法简便快速，常用来测定蛋白质的水解程度随水解程度的增加滴定值也增加，滴定值不再增加时，表示水解作用已完全。

三、器材药 25 mL锥形瓶；3 mL微量滴定管；吸管； 0.1 mol／L标准甘氨酸溶液300 mL 准确称取750 mg甘氨酸，溶解后定容至100 mL； 0.1 m01／L标准氢氧化钠溶液500 mL；（标准氢氧化钠溶液应在使用前标定，并在密闭瓶中保存不可使用隔日贮在微量滴定管中的剩余氢氧化钠酚酞指示剂20 mL 0.5％酚酞的50％乙醇溶液中性甲醛溶液400mL 在50 mL 36～37％分析纯甲醛溶液中加入1 mL 0.1％酚酞乙醇水溶液，用0.1 mol／L的氢氧化钠溶液滴定到微红，贮于密闭的玻璃瓶中此试剂在临用前配制如已放置一段时间，则使用前需重新中和 四、操作 1．取3个25 mL的锥形瓶，编号向第1、2号瓶内各加入2mL0.1 mo1／L的标准甘氨酸溶液和5 mL水，混匀向3号瓶内加入7mL水然后向3个瓶中各加入5滴酚酞指示剂，混匀后各加2 mL甲醛溶液，再混匀，分别用0.1 mo1／L标准氢氧化钠溶液滴定至溶液显微红色 重复以上实验2次，记录每次每瓶消耗标准氢氧化钠溶液的mL数取平均值，计算甘氨酸氨基氮的回收率甘氨酸氨基氮回收率％=×100 公式中实际测得量为滴定第1和2号瓶耗用的标准氢氧化钠溶液mL数的平均值与3号瓶耗用的标准氢氧化钠溶液mL数之差乘以标准氢氧化钠的摩尔浓度，再乘以14.008。

2mL乘以标准甘氨酸的摩尔浓度再乘14.008即为加入理论量的mg数 2．取未知浓度的甘氨酸溶液2 mL，依上述方法进行测定，平行做几份，取平均值计算每mL甘氨酸溶液中含有氨基氮的mg数氨基氮(mg／mL)= 式中：A为滴定待测液耗用标准氢氧化钠溶液的平均mL数B为滴定对照液(3号瓶)耗用标准氢氧化钠溶液的平均mL数mo1／LNaOH为标准氢氧化钠溶液的真实摩尔浓度 思 考 题选用酚酞指示剂，为什么滴定的是氨基?注意事项 本实验为定量实验，甘氨酸和氢氧化钠的浓度要严格标定，加量要准确，全部操作要按分析化学要求进行 专心---专注---专业。