皮质类固醇、维甲酸、积雪草甙对黑素细胞黑素合成的影响.pdf

南京医科大学博士学位论文皮质类固醇、维甲酸、积雪草甙对黑素细胞黑素合成的影响姓名：刘栋申请学位级别：博士专业：皮肤性病学指导教师：朱文元2003.4.30南京医科大学博士学位论文M CK CT v rT R P 1T R P ．2H C掰B TR AA 1 1 ．t r a n sR AM T TD M S oT P AI B M XM S HE D T AP M S FL - D o p am e l a a o c v t ek e r a t i n o c y t et 、，r o s l n a s e英文缩写注释黑素细胞角质形成细胞酪氨酸酶t y r o s i n a s er e l a t e dp r o t e i n - 1酪氨酸酶相关蛋白．1t y r o s i n a s er e l a t e dp r o t e i n 一2酪氨酸酶相关蛋白．2h y d r o c o r t i s o n e氢化可的松t r i a m c i r t o l o n eA c e t o n i d e醋酸曲安奈德b e t a m e t h a s o n er e t i n o i ca c i d倍他米松维甲酸a 1 1 ．t r a n sr e t i n o i ca c i d全反式维甲酸t h i a z o l y b l u ed i m e t h y ls u l f o x i d e噻唑兰二甲基亚砜1 2 一O - t e t r a d e c a n o y l p h o r b o l1 2 - 0 一十四烷酰佛波．1 3 ．a c e t a t e酯醇．1 3 ．乙酯i s o b u t y lm e t h y x a n t h i n e异丁基甲基黄嘌呤m e l a n o c y t es t i m u l a t i n gh o r m o n e黑素细胞刺激素e t h y l e n e d i a r n i n et e t r a a c e t i ca c i d乙二胺四乙酸p h e n y l m e t h y l s u l f o n y lf l u o r i d e氟化酚甲基磺酰L 一3 ，4 一d i h y d r o x y p h e n y l a l a n i n e左旋- 3 ，4 ．二羟苯丙氨酸南京医科大学博士学位论文皮质类固醇、维甲酸、积雪草甙对黑素细胞黑素合成的影响博士研究生刘栋导师朱文元教授中文摘要黑素是决定肤色的最主要的成分，它可分为两类：棕／黑色的优黑素和黄／红色的褐黑素。

黑素具有一系列重要功能：1 形成皮肤颜色，参与人类种族区别或动物的保护色及性吸引；2 保护皮肤免受离子尤其是紫外线的辐射损害；3 清除有细胞毒性的自由基及氧化中间产物；4 与发育尤其是神经系统的发育过程有关人类皮肤着色包括结构性和功能性两类：结构性( c o n s t i t u t i v e p i g m e n t a t i o n ) 着色由遗传决定，不受外界环境的影响功能性( f a c u l t a t i v ep i g m e n t a t i o n ) 着色是环境作用下的黑素合成基础水平上的增加合成黑素是黑素细胞的最重要的功能及分化特征，黑素合成是一个多步骤的酶促生化反应，有着复杂而精确的调控现已知至少有4 4 “ 酪氨酸酶家族成员即酪氨酸酶、酪氨酸酶相关蛋白．1 ( T R P ．1 ) 、酪氨酸酶相关蛋白．2 ( T I o ．2 ) 和s t a b l i n 蛋白参与黑素合成的调控，它们彼此相互作用共同调控黑素细胞合成黑素的质和量酪氨酸酶是黑素合成的关键酶，该酶催化黑素合成早期限速步骤，即底物酪氨酸羟化和多巴氧化黑素合成的速率与酪氨酸酶的量及活性相关。

T R P 一14南京医科大学博士学位论文与酪氨酸酶有着共同的两种催化活性，T R P ．1 的合成速率与黑素合成呈正相关T R P 一2 催化多巴色素转化为成5 ，6 ．二羟吲哚乙酸，可能在黑素合成的远端步骤起到关键作用黑素细胞位于表皮基底层，是一高度反应性细胞，能不断地根据外界环境的变化调节自身生物学行为做为表皮多种细胞中的一部分，黑素细胞和表皮中的其他细胞发生相互作用：黑素细胞转运黑素小体至角质形成细胞，构成表皮黑素单元( E U M ) ，角质形成细胞能够分泌多种因子和介质影响黑素细胞功能，由角质形成细胞、肥大细胞、郎格汉斯细胞合成和分泌的细胞因子、炎症介质、生长因子以及真皮基质成分调控着黑素细胞的增殖、黑素合成、粘附和移行过程，而黑素细胞亦能分泌一些介质成分影响炎症过程随着黑素细胞生物学及黑素生成调控机制的认识的不断深入，使对色素障碍性皮肤病的治疗获得一定进展，对黄褐斑、白癜风等色素增加或减少性皮肤病的治疗取得一定疗效，然而对大多数色素障碍性皮肤病仍缺乏有效手段，且已有的治疗方法疗效尚不满意本课题结合临床，从细胞、蛋白水平系统观察了皮质类固醇、维甲酸、积雪草甙三种药物对黑素细胞黑素合成的作用并探讨其作用机制，为该三种药物治疗色素障碍性皮肤病提供实验依据。

本课题研究包括以下三个部分一、皮质类固醇对培养C i o u d m a n S 9 1 黑素瘤细胞株黑素合成的影响观察皮质类固醇对体外培养的C l o u d m a n $ 9 1 黑素瘤细胞黑素合成和酪氨酸酶活性的影响，探讨外用皮质类固醇治疗白癜风的作用机南京医科大学博士学位论文制体外培养C l o u d m a ns 9 1 黑素瘤细胞分别以系列浓度的氢化考的松、醋酸曲安奈德和倍他米松作用7 2 h ，测定细胞酪氨酸酶活性、黑素含量和细胞增殖率结果显示三种药物均能上调酪氨酸酶活性、提高黑素含量，且呈浓度依赖性作用强度顺序为倍他米松> 醋酸曲安奈德> 氢化可的松提示皮质类固醇在体外能刺激C l o u d m a n $ 9 1 黑素瘤细胞黑素合成，且与皮质类固醇的效价强度成正相关外用皮质类固醇诱导白癜风复色可能与该作用有关二、全反式雏甲酸和阿迭帕林对U V B 诱导的m e l a n ．a 黑素细胞黑素合成的影响临床研究显示外用雏甲酸可改善光老化等所致的色素沉着，然而其机制尚不完全清楚利用体外培养的m e l a n - a 黑素细胞，我们观察了全反式维甲酸和阿达帕林对U V B 诱导的m e l a n - a 黑素细胞黑素合成的影响。

结果显示，二者可剂量依赖性抑制U V B 诱导的细胞酪氨酸酶活性和黑素合成，使其回复到基础水平，但对基础黑素合成无明显影响，1 0 5 m o l ／L 的全反式维甲酸可抑制黑素细胞增殖，阿达帕林对细胞增殖无明显影响全反式维甲酸和阿达帕林对细胞黑素合成的影响无明显差异我们的结果提示维甲酸可直接作用于黑素细胞抑制其黑素合成，这可能是维甲酸脱色素作用的机制之一三、积雪草甙对酪氨酸酶活性的抑制作用及对C l o u d m a n S 9 1 黑素瘤细胞黑素合成的影响临床观察发现积雪草甙外用具有脱色素作用，可用于治疗黄褐斑等色素增多性皮肤病，本研究中观察了积雪草甙对蘑菇酪氨酸酶活性南京医科大学博士学位论文的影响，结果显示积雪草甙能剂量依赖性抑制蘑菇酪氨酸酶活性，酶促动力学分析提示积雪草甙为蘑菇酪氨酸酶混合型抑制剂进一步研究发现，积雪草甙能抑制体外培养的C l o u d r n a n S 9 1 黑素瘤细胞酪氨酸酶活性和黑素合成，但对细胞增殖无明显影响与氢醌相比，积雪草甙抑制酪氨酸酶活性低于相同浓度的氢醌因此，我们的结果提示积雪草甙可直接作用于黑素细胞，抑制黑素合成，是一种无细胞毒性的皮肤脱色剂。

南京医科大学博士学位论文E f f e c t so fg l u c o c o r t i c o i d s ，r e t i n o i ca c i d sa n da s i a t i c o s i d eo nm e l a n o g e n e s i si nm e l a n o c y t e sM ·D ·C a n d i d a t e ：L i uD o n gT u t o r ：P r o f ．W e n y u a nZ h uA B S T R A C TH u m a ns k i nc o l o ri st h en e tr e s u l to fd i f f e r e n tc o m b i n a t i o n sa n dc o n c e n t r a t i o n so fb l u e ( r e d u c e dh e m o g l o b i n ) ，r e d ( o x y h e m o g l o b i n ) ，y e l l o w ( c a r o t e n o i d sa n df l a v i n s ) ，a n db r o w n ( m e l a n i n ) ．T h em o s ts i g n i f i c a n tc o m p o n e n ti nt h ed e t e r m i n a t i o no fs k i nc o l o ri st h ep i g m e n t e dp r o d u c to ft h em e l a n o c y t e ，m e l a n i n ，w h i c hm a yb ee i t h e rb r o w n - b l a c k( e u m e l a n i n ) o ry e l l o w - r e d ( p h e o m e l a n i n ) ．M e l a n i nh a sav a r i e t yo fi m p o r t a n tf u n c t i o n s ：( 1 ) a sac o s m e t i ce n t i t y —p a r t i c i p a t i n gi np r o t e c t i v ec o l o r a t i o na n di ns e x u a la t t r a c t i o nw i t hs p e c i e s ，( 2 ) a sab a r r i e ra g a i n s ti o n i z i n gr a d i a t i o n ‘。

——e s p e c i a l l yi m p o r t a n tw i t hr e s p e c tt op r o t e c t i o na g a i n s tu l t r a v i o l e tl i g h ti r r a d i a t i o n ，( 3 ) a sap o t e n t i a ls c a v e n g e ro fc y t o t o x i cr a d i c a l sa n di n t e r m e d i a t e s ，a n d ( 4 ) a sap a r t i c i p a n ti nd e v e l o p m e n t a lp r o c e s s e s ’_ _ ——p a r t i c u l a r l yr e l a t i n gt on e u r o l o g i c a ld e v e l o p m e n t ．M e l a n i np i g m e n t a t i o ni nh u m a ns k i nm a yb ed i v i d e di n t oc o n s t i t u t i v ea n df a c u l t a t i v es k i nc o l o r s ．C o n s t i。