鸡传染性支气管炎免疫的研究_荷兰株_H_疫苗的安全性与免疫原性试验.pdf

鸡 传染性支气管炎免’ 疫的研究H荷兰株(H)疫苗的安全性与免疫原性试验王西川王翠兰代克珍李德山(中国农业科学院哈尔滨兽医研 究所)鸡传染性支气 管炎是由日冕病毒(Crnvaoirus)引起的一 种高度接 触性 感染的雏鸡呼 吸道传 染病本病 分布于世界各国,我国一些养鸡 场也有发生它在鸡场中一旦流行,便可引起 部分雏鸡死亡,育成鸡发育迟缓,产蛋 鸡产蛋量下降等不良后果,给养鸡业发展带 来很大的损失许多 国家 应用马萨诸 塞 株(Ma ssaohu-set te:)病毒 通 过鸡胚 连续 继代致弱的活 毒疫 苗,以防制本病的流行传播,但是 由于本病毒的血清型很多;疫苗效力验证方 法不 同,因而 所得防制 效 果也不尽 相 同本文报告 我们以引进的荷兰 株(H)活毒 试制 的疫苗 及在实验室内对 雏鸡 进行安 全 与免疫效 力试 验的初步结 果材料和方法一、免疫用 弱毒株:由荷兰引进的 马萨诸塞株(Mas s aehusette s)鸡传染性支气 管炎病毒,经鸡胚 连续通 过的第5 2 代(H52 )及第120代(H12 0)弱毒二、攻毒用 强毒株:系本所分 离 的杭 州系强毒株每只鸡气管注入原 液。

3毫 升三、试验用鸡:白洛克和莱亨雏鸡种卵选自无 鸡传染性支气管 炎发病 史的鸡 场,雏鸡由孵化 箱直接移入本所实验鸡舍,隔离饲养,每日进行 临床观察选 巧一2 5日令健康雏用于试验四、疫苗的试验与检定1、制备方 法:取免疫用弱毒液0.2毫升,注入9一n日令鸡胚尿 囊腔 内,置3 7 一3 8℃继续 培养,每日检胚二次,发现 死胚,随 时取出,置O一1 0℃冰箱保存(气室 向上直立)收培养至 4 8 小 时的活存胚及死胚均同上 处理,冷却 1 2一24小时取 出,收获尿囊液每二枚 胚的尿 液合并装瓶,分别作无菌检验,取无菌 生长的鸡胚 液混合 分装,简称原苗,低 温 冰箱保存待检本实验使用7901(H5 2` “/,)、7 9 0 2(H5 2` “/7)、7903(H1 2 0, “八)、7904(H5 2么 “/)、7 90 5(H1 20“ ”/7)、7906( H120’2八)六 批疫苗2、疫苗的检定:(1)无菌检验:取混合后分装的 鸡胚尿液分别接种普通 肉汤、普通琼脂斜面、血液琼脂斜面、肉肝汤、马丁 肉汤等培养基,置3 7一3 8℃培养7 2 小时以上观察 记录,取无菌生长者选作检定用。

2)鸡新城疫病毒红细 胞凝集试 验:按 常规方 法进行,取 阴性反应者备用3)安全检 验:每批 收获的尿液接种1月令的健康莱亨鸡5只,每只 胸部肌 内按种0.5毫升,观察20日3、病毒 滴定:将 检验 合格的尿囊液,用肉汤作 1 0 倍递减稀释,取侮个稀释度的病毒浓0.2毫升,尿囊腔接种5一6枚9一n日令鸡胚,置3 7一3 8℃培养观察一周孩Re ed和Mu e n ch法计算半数鸡 胚感 染量(E ID/ml)五、疫苗配制及免疫方 法1、疫 苗配制:取上述检验 台挤时旅 咨1 0 毫升,添加4.5一5毫升灭菌脱脂 乳,再添加灭菌 无 离子水使总量为10 0 毫升2、免疫 方法:气管注入免疫:每只 试验雏 接 种0,2毫升·上述稀释苗气雾免疫:每1 5 只试验雏放入1 05X65x5 5公分的密闭木箱 内,用 上海医疗器械三厂生产的J.MH型 喷枪,喷雾 3 0毫升稀样苗,试验雏在气雾箱内静置2 0分钟滴鼻免疫:试 验雏经两侧鼻孔 滴入稀释苗2一3滴饮 水 免疫:试 验雏 停止饮水1 2小时后,将 稀释苗放入清洁的玻璃饮水器内,供 试验雏自由饮用每只雏鸡的饮入量约5~1 0 毫升试 验雏免疫后 1 5日,与同令健 康 对照雏,均同时气 管 注入0.3毫升鸡传染性支气管炎病毒 液。

免 疫及攻 毒后,每日逐鸡 进行临床俭查,出现 气喘、咳嗽、打 喷嚏,气管呼吸音者 即判 为“有反应”或攻毒“不免疫”毒 株接种鸡胚28 3枚,4 8 小时内致死胚2 41枚,死亡 率为85%后者比前者 高出2 2.2%试验 结果 表明H1 20较H5 2株对鸡胚 的致死力为强接种 病毒后 根据不同 时间死亡胚 的统计结 果表明,H52病毒株接 种鸡胚后2 4一3 6小 时的曹、致死 率为24.0%,随后由 3 6小时的13.7;石至4 8小时急剧 增加至38.7%H120接种 鸡胚后2 - 4一3 6小时的致死 率 由1 5.2%增到2 8.9%,而 到48小时仅上 升到3 3.9%,结果见图夕妇洲” 死致百分率接 种后时 间(小时)图IBV接 种后不 同 时间致 死 胚 曲线实验结果一、不 同弱毒株对鸡胚的致死 倩况用H5 2弱毒株 接种鸡胚240枚,4 8少时内致 死胚15 1 枚,死亡率为6 2.8知,H12 0二、第一批 免疫 试验1 9 7 9年8月 1 5日,用 三批 疫苗,以不同途 径免 疫 1 5日令 白洛克雏鸡29 6只免疫后在25天的观察期中,饮水和滴鼻免疫所 引起的临床反应 极轻,仅H12 0饮水免疫组中有一 例 出现湿性 气管呼 吸音 的反 应。

而H5 2及H12 0三批 疫苗气雾免疫 组,气管注入组的 免疫鸡 均可见 较高的反 应,而且有死亡免疫后2 5日进 行攻毒,7 90 1和7902批苗的滴鼻组及790 1和7903批苗的气 管注入组,攻毒后均全数获得 保护,7 903批苗的气雾组的免 疫 力稍差,保护数为`7八但与对照鸡 相比有明显筹别,结果见表1.·批 免友试拉的结果疫 批哥-一一病毒滴度”试验鸡日令免疫方 法“免 鸡数疫 反应数攻击结果 鸡数反应 数J土00一n卜魂.Jnù,.,1i]3 013 5一2 0 1 72 0 助扭助1 7竹一2 0 2 0 2 0 功0 0自曰7匕 JLJ一口,口0乙9白了9 0 1连,28d.w 三.且八0 01 11d.w了弓025`卜 工6l5.ln A10ng然2 5抓2 4 一加加7弓03姿丁.7015!td.w1.nA只 暇:1)109EID/ml表22 )d.w:、饮水,i.n:滴鼻,A:气雾,i.t:气 管注入第二批免疫试验的结果ǔ对一注一一`~~一一一一.~~ , ~ ~ ~ ~~.-叼咧碑.~..一~ ~啼产纬.`~.脚,侧色 . 户. . . `~一书~一.一一 苗 病毒 滴度`’试验鸡日令免疫方法么》觅..疫攻击 结果 鸡数反应数鸡数反 应 数一口万疾ù卜 f ó外廿00, 上0一4 0 0 0ù3 691 26n4 680入UūO八 VJ任,11.,山d.w79014.感925八q自n甘 ,土nU31占,土月179055.322500 0 0一1 73 41 0 1 5 1 0一匆4 0 7口曰一1 263朴一一八曰n甘叹八口 U7 90 65.9 9d.w1.n 人 1.td.w1.nA 1.t 对照长3两批 免疫 试转结呆的累计击结呆 发病数发 病率攻一数病毒袱乏免疫方法苗种声与反 应效反应 率鸡疫一数月注八匕n口八匕斤了,上 n口O乙.20.8. 2. 32041177 34 9 4 943 21 4一2 2 弱3 31 142 6 扭5 5八én。

八éQQuQ习户Un匕尸O八D0 山d.wH5 2111 A 1.. t 累计,土nù9éOU工匕口叹.5.2. 60d.w1041044.2 773.2 459 3 0 1八b八U八匕OU,上00通ō月气叮 d`.一八乙4 5 7 3一7 75 5 6 4 9 12 4一1 26招2 32 0一5 44 3 4 02 0622 45 0 1 8 .庄一尸O月佳厅 币J任叹叼月块月任H120ln A 1.t 累计 对照5 273.2 44l兰、第二 批免疫试验1 979年9月21日,用 三批疫 苗,以不同途径免疫2 5日令莱亨鸡22 5只在 免疫后2 0天观察 期中,仍以饮水 免疫 组和滴鼻免疫组的疫苗接种反应数为少,反应 程度轻,持续时间也比较短免疫后 经2 0天观察,取 1 95只 免疫接 种鸡 进行了攻 毒效检三 批疫苗的滴鼻组和气管 注入组,7 904、79 06批苗饮 水组,及7 9 0 5、7 906批苗的气雾组的免疫鸡均全 数 获 得 保护7 905批 苗的饮水组 的 免疫力稍差,保护数为28/3 2790 4批苗的气雾组的保 护数为1 1八2,结果见 表2将两批 次的安全 性及免疫试验 结果进 行累计比较,H5 2、H12 0两病 毒株 试制苗的接种 反应相差 无几,而 接 苗后 所引起的死 亡鸡数,H52比H12O高出2.27%;气雾和气管注入免疫 所 引起的临 床反 应数 及致死率较高;H5 2免疫 组的免疫力比H12 0免疫 组高1%。

把 不 同免疫途径的免疫效力 作比较,滴鼻免疫的保 护率可 达 9 8.8%(8 8/99),气 管注入可达98.78%(81/8 2),气雾和饮 水的保护 率分别 为 9 2.6 3 %(8 8/9 5)9 5.6%(152/1 5 9),而 对照 组的发病 率为73.2 4%(52/71)详细结 果见表3因而,可以认为,两株病毒在4 8小 时内 引起鸡胚致 死率的差异,可能 与病毒在 鸡胚内增殖 对数期提早有关,这与 国外一些学者的报导是一致 的试验 结果表明,以荷兰株鸡传染性支气管炎弱毒苗,给1 5一2 5日令雏鸡行气管注 入和气雾免疫,可 引起 一定 的接种反 应,而饮水和滴鼻免疫的接种 反应很轻试验结果 还表 明H5 2比H1 2 O引起的接种反 应较重四种不 同途径免疫接种鸡,对杭州 系鸡 传染 性支气 管炎病 毒的攻击,均 表现 出较高 的保 护率可以认为,饮水免疫不 仅有利于 大面积防制,且安全有效本项试 验是 根据强毒 株攻击后 的临床反 应来评定 试验鸡的免疫效力的,但有时个别免疫 鸡的 攻毒反应不 易被发现国外有些学 者评 定免疫 效力则采用 观察 免疫鸡 攻毒后的气管 的组织 学变化;测 定病毒 中和抗体水平;应用荧光 抗体技 术 检查病毒在气管 上皮细胞 的 分布;或观察在免疫鸡气 管 轮培养中,病毒 对纤毛上 皮颤动的抑制等方 法。

但以攻毒后96小时取气管 擦拭 物分 离病毒,被 认为是 评价 免疫效 力较 好 的方法,唯当大量试 验时应用 此法 则颇为困难总之 这些方 法 均有利 弊因而探 求一 种既确实可靠,又简 单易 行,适合我 国当前具体情况的免疫效果 评定 方 法,乃是实验免疫研究工作 中的一项 重 要课题参考文献讨论与小结本 项试验中,就接种病毒后4 8 小 时 内死亡 鸡胚 数统计,H5 2 病 毒株 引起鸡胚 的致死率为6 2.8%,H1 2O病毒株为8 5%这一结果表明,鸡传 染性 支气 管炎病毒 在鸡胚上连续传代后,随着对鸡 胚适 应性增 强,而表现出对鸡胚的毒力增强此外,从病 毒接 种后致 死呸的曲线还可以看出,H5 2 病毒株 接种鸡胚的致死 率 急剧 上升,开始于3 6一4 8小时而H12 0病毒株 所 引起的这 一 上升期却提前,开始于1 8一3 6小 时之间但 是在第48小时,两株 病毒对鸡胚 的致死率不 见有明l、宫本猛,(1 97 7),最新家畜传染病学,115一1 232、佐藤多津雄,(19 64),兽医微生物学,609一6 1 2.3、Hofstad,M.S.,(197 8),Dis easesofpoultry487一505.4、Cumningh口,C.H.,(1070),A dvane esi社Vet.Seie.CamP.Med,14,1 0 6一139.5、山田进二等,(197 2),日本兽医学 会杂志,25,127一13 1.6、鸡病研究会,(107 5),鸡病研究会报,14,3 9一4 -7、山田进二等,(1971),日本兽医师 会杂志,24,1 21一12 5.8、山田进二等,(1971),日本兽医师会杂志,2 4,1 。