染色体培养染色步骤.doc

接种接种 接种后放入 37°C 恒温培养箱中 72 小时↓加入秋水仙素加入秋水仙素 2-8 滴，放入 37°C 恒温培养箱中 1.5 小时 (秋水仙素：100ml 0.85%生理盐水加入 1mg 秋水仙素原液)↓低渗低渗 去上清液加 kcl 溶液低渗，然后放入 37°C 恒温培养箱中 30-40 分钟 （低渗液 0.075kcl 溶液由 5.587g kcl+1000ml 蒸馏水室温保存，用之前半小时放置水浴箱 37 度温浴 ）↓预固定预固定 加入 1ml 固定液混匀后，离心（2000 转，10 分钟）弃上清↓固定液固定固定液固定 加入固定液 6-8ml（甲醇：冰醋酸=3;1） ，混匀，离心弃上清 重复 2 次，留 0.5ml 细胞悬液重复两次↓染色体扩散滴片染色体扩散滴片 冰玻片滴片，快速，置 75°C 烤片 3 小时， 室温下放置冷却玻片提前半小时放置冰箱↓ 显带染片显带染片 胰酶显带 15-55s，生理盐水漂洗，吉姆萨染色 5 分钟 试片，条件符合后，分批染色 胰酶：2.5g+0.85%生理盐水 1000ml 溶解 56 度除菌三次↓核型分析核型分析缓冲液缓冲液 1 缸缸1.80.8mlNa2HPO4 +19.2mlKH2PO4混匀后加入适量胰酶（0.5ml）再用 NaOH 用 ph 试纸调节到 7.2-7.4 之间。

2.40.4mlNa2HPO4 +9.6mlKH2PO4混匀后加入适量胰酶,调节 ph 到 7.2-7.4 之间漂洗液漂洗液 2 缸缸 0.85%氯化钠溶液染液染液 1 缸缸 蒸馏水 50ml+1 管吉姆萨染液大约 2ml 混匀Na2HPO4=4.75g 粉末+500ml 蒸馏水 KH2PO4=4.535g 粉末+500ml 蒸馏水 NaCL=4.25g 粉末+500ml 蒸馏水洗涤液配制洗涤液配制弱酸：重铬酸钾 50g+蒸馏水 1000ml 加温溶化冷却后缓缓注入浓硫酸 90ml 强酸：重铬酸钾 120g+蒸馏水 1000ml 加温溶化冷却后缓缓注入浓硫酸 160ml 一定要用塑料盆配制吉姆萨染液配制吉姆萨染液配制吉姆萨粉末 1g+甘油（丙三醇）66ml 研磨混匀，然后放置 55-60℃水浴 2h，冷却后加 入甲醇 66ml 混匀，过滤后棕瓶分装 计算：大研钵 粉 6g+甘油 400ml+甲醇 400ml小研钵 粉 3g+甘油 200ml+甲醇 200ml低渗液配制低渗液配制低渗液 0.075M kcl 溶液由 5.587g kcl+1000ml 蒸馏水室温保存，用之前半小 时放置水浴箱 37 度温浴秋水仙素配制秋水仙素配制 100ml 0.85%生理盐水加入 1mg 秋水仙素原液，避光冷藏。

固定液固定液 甲醇：冰醋酸=3;1pHM/15 磷酸氢二钠 （Na2HPO4） （9.47 克/升）M/15 磷酸二氢钾 （KH2PO4） （9.08 克/升）5.88.092.05.99.990.16.012.287.86.115.384.76.218.681.46.322.477.66.426.773.36.531.868.26.637.562.56.743.556.56.849.650.46.955.444.67.061.138.97.166.633.47.272.028.07.376.823.27.480.819.27.584.115.97.687.013.07.789.410.67.891.58.57.993.26.88.094.75.38.195.84.28.297.03.0。