复合维生素添加剂中维生素b12含量的检测方法.docx

复合维生素添加剂中维生素b12含量的检测方法复合维生素添加剂中维生素b12含量的检测方法一种复合维生素添加剂中维生素B12含量的检测方法，属于食品添加剂及其检测方法领域所述检测方法，包括以下步骤：（1）配制维生素B12浓度为1mg/ml的储备液；然后配制成浓度各为0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0μg/ml的系列标准浓度的溶液，在一定的色谱条件下上机测定并计算回归方程及相关系数2）称取测试样品在相同的色谱条件下上机测定，根据标准样峰高、标准样浓度与测试样品峰高计算测试样品浓度本发明所述的检测方法，其测定精密度和准确度能满足乳制品分析的要求，具有准确度高、重复性高、操作简便、检测极限低等特点，可作为常规检测方法应用专利说明】复合维生素添加剂中维生素BI2含量的检测方法【技术领域】 [0001]本发明涉及一种复合维生素添加剂中维生素B12含量的检测方法，属于食品添加剂及其检测方法领域背景技术】 [0002]维生素B12是所有维生素中分子最大和最复杂的一种，但是人体对它的需要量也许是所有维生素中最少的一种，每天只需3徽克左右即可过量的维生素B12也会产生副作用，大量维生素B12也可导致叶酸缺乏。

维生素B12可以提高叶酸的利用率，若缺乏维生素B12，则叶酸的利用受到影响维生素B12缺乏还可导致周围神经炎小孩缺乏维生素B12的早期表现是精神情绪异常、表情呆滞、少哭少闹、反应迟钝、爱睡觉、手足无意识运动或头与肢体颤动，最后导致贫血美国纽约的哥伦比亚大学和丹佛的科罗拉多大学的专家对323名缺乏维生素B12的人进行考察，发现其中将近半数的人(共141人)出现了程度不同的神经损伤及精神性症状症状包括痴呆、抑郁、记忆障碍、平衡功能失调等，有的还有精神分裂症的表现当医生给这些人补充维生素B12后，许多患者的精神性症状完全消失 [0003]根据目前已报道的资料，测定维生素B12主要有四种方法:比色法、原子吸收分光光度法、高效液相色谱法及微生物法微生物法是测定如食品中维生素B12的通用方法，该法灵敏度特别高，可测定出样液中0.01ng/ml的含量但由于该法操作繁琐，检验周期长，技术难度大，影响因素多及重现性差、成本高等问题而不能广泛应用特别是用此法测定添加剂等维生素B12含量高的样品，由于稀释倍数较大且难于掌握等使测定误差较大，不很适宜；而前三种方法大都用于药品类等含量较高的样品(一般含量mg/g级)。

而奶粉专用复合维生素添加剂中的维生素B12含量一般为10μ g/g或更低(国标规定婴幼儿配方奶粉中维生素B12含量为彡0.8 μ g/100g)因此，现有的检测方法一般很难用于检测婴幼儿配方奶粉中维生素B12含量 [0004]因此研究一种准确度高、重复性高、操作简便、检测极限低适用于婴幼儿配方奶粉中维生素B12含量的检测方法很有必要发明内容】 [0005]本发明旨在提供一种准确度高、重复性高、操作简便、检测极限低适用于婴幼儿配方奶粉中维生素B12含量的检测方法 [0006]所述的复合维生素添加剂中维生素B12含量的检测方法，包括以下步骤: (I)配制维生素B12浓度为lmg/ml的储备液；然后配制成浓度各为0.5、1.0,2.0,3.0、 4.0,5.0 μ g/ml的系列标准浓度的溶液，进样量分别为20 μ L在一定的色谱条件下上机测定并计算回归方程及相关系数 [0007](2)称取测试样品1g放于125ml三角瓶中加入30ml30-50°C的蒸馏水溶解后放入超声波中，10分静后取出，转入50ml容量瓶中加入10%硫酸锌溶液5ml定定容，混匀后用滤纸过滤，滤液通过0.45 μ m的滤膜后在相同的色谱条件下上机测定。

根据标准样峰高、标准样浓度与测试样品峰高计算测试样品浓度 [0008]优选的，本发明所述的色谱条件为色谱柱为ODS色谱柱，色谱柱理论塔板数为2216 ;柱温为室温；流动相流速lml/min ;测定波长361nm ;流动相为磷酸二氢钠(10g/LpH=3.5):甲醇=70:30的混合液 [0009]本发明所述的检测方法，得到的标准曲线为: Y=-0.1340+0.0009592X,R=0.9976结果表明:在测定范围内B12浓度与峰高间呈正相关，相关性好，可用于外标法进行定量测定 [0010]本发明所述的检测方法，维生素B2含量的计算公式为: 维生素82含量(“8/10(^)=011\￥\0/012\111)\100，其中 hi 为测试样峰高(mm)， h2为标准样峰高(mm), V为测试样液体积(mL),m为测试样质量(g), C为维生素B12标准溶液浓度(yg/ml) [0011 ] 本发明所述的检测方法中，采用高效液相色谱法测定复合维生素添加剂中维生素B12含量，由于样品中往往用有机物作载体，所以用蒸馏水直接溶解后即使通过滤膜也会出现混浊的现象，而用硫酸锌作沉淀剂时可有效把有机成分沉淀，待测液澄清，更有利于上机测定。

经测定，方法回收率与精密度试验结果较好，回收率在90-102%间，平均为96.4%，样品重复测定12次的变异系数为0.54%，此方法检出限为4ng，计算可得婴幼儿配方奶粉专用维生素添加剂中维生素B12的检出限为I μ g/g，可满足任何奶粉专用维生素添加剂中维生素B12的测定 [0012]本发明所述的检测方法，采用HPLC法测定婴幼儿配方奶粉专用维生素添加剂中维生素B12其测定精密度和准确度能满足乳制品分析的要求，具有准确度高、重复性高、操作简便、检测极限低等特点，可作为常规检测方法应用具体实施方式】 [0013]实施例一: (I)配制维生素B12浓度为lmg/ml的储备液；然后配制成浓度各为0.5、1.0,2.0,3.0、4.0、5.0 μ g/ml的系列标准浓度的溶液，进样量分别为20 μ L在一定的色谱条件下(色谱柱为ODS色谱柱，色谱柱理论塔板数为2216 ;柱温为室温；流动相流速lml/min ;测定波长36Inm ;流动相为磷酸二氢钠(10g/L pH=3.5):甲醇=70:30的混合液)上机测定并计算回归方程及相关系数得到的标准曲线为: Y=-0.1340+0.0009592X,R=0.9976。

结果表明:在测定范围内B12浓度与峰高间呈正相关，相关性好，可用于外标法进行定量测定 [0014](2)称取测试样品1g放于125ml三角瓶中加入30ml30-50°C的蒸馏水溶解后放入超声波中，10分静后取出，转入50ml容量瓶中加入10%硫酸锌溶液5ml定定容，混匀后用滤纸过滤，滤液通过0.45 μ m的滤膜后在相同的色谱条件下上机测定根据标准样峰高、标准样浓度与测试样品峰高计算测试样品浓度 [0015]维生素B2含量的计算公式为: 维生素82含量(“8/10(^)=011\￥\0/012\111)\100，其中 hi 为测试样峰高(mm)， h2为标准样峰高(mm), V为测试样液体积(mL),m为测试样质量(g), C为维生素B12标准溶液浓度(μ g/ml) [0016]实施例二:重复性试验、回收率试验以及检出极限试验经测定，方法回收率与精密度试验结果较好，回收率在90-102%间，平均为96.4%，样品重复测定12次的变异系数为0.54%，此方法检出限为4ng，计算可得婴幼儿配方奶粉专用维生素添加剂中维生素B12的检出限为I μ g/g，可满足任何奶粉专用维生素添加剂中维生素B12的测定。

权利要求】1.复合维生素添加剂中维生素B12含量的检测方法，包括以下步骤: (1)配制维生素B12浓度为lmg/ml的储备液；然后配制成浓度各为0.5、1.0,2.0,3.0、4.0,5.0 μ g/ml的系列标准浓度的溶液，进样量分别为20 μ L，在一定的色谱条件下上机测定并计算回归方程及相关系数； (2)称取测试样品1g放于125ml三角瓶中； 加入30ml30-50°C的蒸馏水溶解后放入超声波中，10分静后取出，转入50ml容量瓶中加入10%硫酸锌溶液5ml定定容,混勻后用滤纸过滤,滤液通过0.45 μ m的滤膜后在相同的色谱条件下上机测定，根据标准样峰高、标准样浓度与测试样品峰高计算测试样品浓度2.如权利要求1所述的复合维生素添加剂中维生素B12含量的检测方法，其特征在于所述的色谱条件为色谱柱为ODS色谱柱，色谱柱理论塔板数为2216 ;柱温为室温；流动相流速lml/min ;测定波长361nm ;流动相为10g/L、pH=3.5的磷酸二氢钠:甲醇=70:30的混合液。