三聚氰胺的检测方法.ppt

牛奶中三聚氰胺牛奶中三聚氰胺(Melamine)ELISA检测检测以勤邦以勤邦CA301试剂盒为例试剂盒为例农业部农产品质量安全监督检验测试中心（呼和浩特）狄彩霞（13734715675）0471--5904559　　 内 容一、概要一、概要二、原理二、原理三、检测步骤三、检测步骤四、注意事项四、注意事项一、一、概要概要三聚氰胺（三聚氰胺（MelamineMelamine）简称三胺，是一种三嗪类含氮杂环有机化合物，）简称三胺，是一种三嗪类含氮杂环有机化合物，被用作化工原料它是白色单斜晶体，几乎无味，微溶于水、对身体被用作化工原料它是白色单斜晶体，几乎无味，微溶于水、对身体有害，不可用于食品加工或食品添加物长期或反复大量摄入对肾与有害，不可用于食品加工或食品添加物长期或反复大量摄入对肾与膀胱产生影响，导致产生结石膀胱产生影响，导致产生结石检测方法：检测方法：①①气相色谱质谱法（气相色谱质谱法（GC-MSGC-MS）） ② ②液相色谱串联质谱法（液相色谱串联质谱法（LC-MS-MSLC-MS-MS）） ③ ③高效液相色谱法高效液相色谱法(HPLC)(HPLC) 准确；成本高、操作复杂准确；成本高、操作复杂 ④ ④ELISA——ELISA——试剂盒检测，快速、简便、准确、灵敏度高试剂盒检测，快速、简便、准确、灵敏度高二、原二、原 理理采用间接竞争采用间接竞争ELISAELISA方法，在酶标板微孔条上预包被三聚氰胺方法，在酶标板微孔条上预包被三聚氰胺抗原，样本残留的三聚氰胺和微孔条上预包被的抗原竞争三聚抗原，样本残留的三聚氰胺和微孔条上预包被的抗原竞争三聚氰胺抗体，加入酶标二抗后，用氰胺抗体，加入酶标二抗后，用TMBTMB底物显色，样本吸光值与底物显色，样本吸光值与其残留物三聚氰胺成其残留物三聚氰胺成负相关负相关，与标准曲线比较，再乘以其对应，与标准曲线比较，再乘以其对应的稀释倍数，即可得出样本中三聚氰胺的含量。

的稀释倍数，即可得出样本中三聚氰胺的含量 三、检测步骤三、检测步骤1. 1. 准备：试剂盒准备：试剂盒20℃℃回至室温，回至室温，摇匀摇匀；配洗涤工作液；配洗涤工作液—20—20倍浓缩倍浓缩（（1 1份浓缩洗涤液份浓缩洗涤液+19+19份去离子水），份去离子水），4 4℃℃下保存下保存1 1个月2. 编号：取需要数量微孔板，将样本和标准品对应微孔编号；编号：取需要数量微孔板，将样本和标准品对应微孔编号；3. 加液：加标准品、样本加液：加标准品、样本20µl；；加酶标二抗加酶标二抗50µl；再加抗体工作；再加抗体工作液液80µl；振荡混匀，盖板避光反应；振荡混匀，盖板避光反应20min;4. 洗板：孔内液体甩干，每孔加洗涤液洗板：孔内液体甩干，每孔加洗涤液250µl，洗涤，洗涤4-5次，次， 最后用吸水纸拍干；最后用吸水纸拍干；5. 显色：加显色液显色：加显色液A、、B各各50µl，混匀，盖板避光反应，混匀，盖板避光反应10min;6. 测定：加终止液测定：加终止液50µl，混匀，在酶标仪，混匀，在酶标仪450nm读读OD值7. 结果判定：标准品、样品输入软件计算结果判定：标准品、样品输入软件计算四、注意事项四、注意事项1. 试剂试剂盒选用不同，操作过程不同，请盒选用不同，操作过程不同，请按购买试剂盒说明操作；按购买试剂盒说明操作；2. 室温低于室温低于20℃℃或试剂及样本未回到室或试剂及样本未回到室温温20-25℃℃，会导致，会导致OD偏低；偏低；3. 每加一种试剂前要将其摇匀；每加一种试剂前要将其摇匀；4. 不同批号试剂盒不要混用；不同批号试剂盒不要混用；5. 试剂盒试剂盒2-8℃℃保存；保存；6. 0标准的吸光度值小于标准的吸光度值小于0.5时，表示试时，表示试剂可能变质；剂可能变质；7. 加入底物液加入底物液A、、B后，一般显色后，一般显色10min，若颜色较浅可延长反应时间到，若颜色较浅可延长反应时间到15min，但不可超过，但不可超过20min，反之则，反之则减短反应时间；减短反应时间；8.每种液体加入速度尽量一致、快。

每种液体加入速度尽量一致、快1ppm=1000ppb1ppb=1000pptppm即：即：mg/L（毫克（毫克/升）升）ppb即：即：ug/L（微克（微克/升）升）ppt即：即：ng/L（纳克（纳克/升）升）。