玻璃化冷冻法保存人类囊胚的临床应用.docx

玻璃化冷冻法保存人类囊胚的临床应用戴志俊 季钢 张芳芳 张奕〔合肥市妇幼保健院，合肥 230001，安徽〕摘要：目的：探讨玻璃化冷冻法保存人类囊胚的临床应用效果方法： 回忆性分析 2022 年 1 月～10 月在我院生殖中心行玻璃化冷冻解冻囊胚患者共 12 个周期的结局结果：玻璃化冷冻解冻共21 枚胚胎，存活 21 枚〔存活率100%〕，共解冻12 个周期，均有胚胎移植，获得临床妊娠 5 例〔妊娠率 41.67%〕，着床率 23.81%〔5/21〕结论：玻璃化冷冻法是保存人类囊胚的一种有效方法关键词：囊胚，玻璃化，冷冻保存，人类Clinical Application Of Vitrification For Human BlastocystsDai Zhijun, Ji Gang , Zhang Fangfang , Zhang Yi〔Hefei Maternity and Child Health Hospital,Hefei 230001,Anhui〕 Abstract:Objective: To examine the clinical value of vitrification for human blastocysts. Methods: Retrospective analysis of 12 patients who conduct embryos vitrification from Jua.2022 to Oct.2022. Results: All of the 21 blastocysts were thawed and survived , survival rate was100%(21/21);5 cycles of 12 cycles got clinical pregnancy after transferred, clinical pregnancy rate were 41.67% ,implantion rate were 作者单位：合肥市妇幼保健院安徽医科大学妇幼保健临床学院 安徽 23000123.81%(5/21). Conclusion: Vitrification ca n be an effective method for cryopreservating human blastocysts.Key Words：blastocysts; vitrification; cryopreservation; human自从2022 年Mukaida 等首次报到了玻璃化冷冻人类胚胎获得成功以来[1]，玻璃化冷冻技术在临床上得到广泛推广和应用，将胚胎培育至囊胚再行冷冻或移植可以在肯定程度上起到筛选作用，改善妊娠结局。

我院生殖中心应用玻璃化冷冻技术保存人类囊胚应用于临床，并取得较满足的结局，总结如下1 资料和方法1.1 一般资料 2022 年1 月～10 月在合肥市妇幼保健院生殖中心行囊胚玻璃化冷冻复苏移植的患者 12 个周期，这些患者颖周期放弃移植或移植失败，年龄 20～40 岁，玻璃化冷冻胚胎解冻后培育 2 小时选择存活的胚胎进展移植1.2 试剂和耗材 承受日本加藤公司玻璃化冷冻、解冻试剂盒〔Kitazato Biophama Co.Ltd.Shizuoka.Japan〕冷冻试剂包括平衡液〔Equilibration Solution，ES〕、冷冻液〔Vitrification Solution， VS〕；解冻试剂含有解冻液〔Thawing Solution，TS〕、稀释液〔Diluent Solution，DS〕、洗液 1〔Washing Solution 1，WS1〕和洗液 2〔Washing Solution 2，WS2〕；冷冻载体为 Cryotop〔日本加藤公司生产〕1.3 冷冻胚胎的标准 参照本院生殖中心囊胚评分标准，第五、六天发育到 3BB 以上的胚胎予以冷冻1.4 玻璃化冷冻 取 0.5mlES、VS 于Falcon 3037 皿内室温〔24℃〕 下平衡，将胚胎〔一次最多 3 枚〕移入平衡液ES 中 5～20min， 然后移入冷冻液VS 中，充分混匀后快速将胚胎置于冷冻载体Cryotop 顶端，并马上投入液氮中，时间把握在 60s 内。

1.5 胚胎解冻复苏 将 0.5ml 解冻试剂取出在室温下平衡，并取解冻液TS 于 Falcon 3653 皿中置于 37℃预温，将要解冻患者的胚胎从液氮中取出，快速将Cryotop 顶端置于TS 中 1min，然后在室温下依次将胚胎转入DS、WS1、WS2 中 3min、5min 和 5min最后将胚胎移入平衡过的培育液中，置于 37℃、6%CO 的培育箱2中培育 2h 等待移植1.6 临床妊娠确实认 解冻当天选择存活的胚胎行宫腔内移植，移植14 天后测定血或尿人绒膜促性腺激素水平，阳性者移植 30 天后行B 超下监测，见到孕囊者为临床妊娠2 结果2022 年 1 月～10 月行囊胚玻璃化冷冻复苏移植的患者 12 个周期，21 枚胚胎解冻后，存活胚胎 21 枚，胚胎存活率为 100%； 每周期移植胚胎 1.75 枚，共有 5 例患者获得临床妊娠：其中 1 例流产，其余 4 例连续妊娠中，胚胎着床率为 23.81%〔5/21〕，临床妊娠率 41.67%3 争辩胚胎的冷冻保存是人类关心生殖技术实施过程中一个必不行少的重要环节，玻璃化冷冻技术是指细胞在高浓度的冷冻保护剂作用下，快速降温，使细胞内外的水分直接形成玻璃态，避开了冰晶的形成对细胞的冷冻损伤。

玻璃化冷冻方法具有简便、快捷、经济等优点，相对于程序化冷冻法需要周密的程序化冷冻仪，且操作简单，时间长，消耗液氮量大而言具有很大的优势和临床应用价值自 2022 年Yokota等[2]首次报道囊胚玻璃化冷冻后获得临床妊娠，近年来学者们在囊胚期胚胎玻璃化冷冻方面开展相关的研 究，并取得可喜的成绩[3]张顺吉等[4]争辩说明卵裂期胚胎、囊胚玻璃化冷冻解冻后，虽然囊胚的复苏率〔94.12%〕略低于卵裂期胚胎〔96.76%〕，无显著性差异，但囊胚的冻融移植妊娠率、着床率均明显高于卵裂期胚胎〔75% V 40.94%、50% V 22.37%〕有学者[5]囊胚期冷冻胚胎在肯定程度上削减了可用胚胎的数量， 但可以改善种植率和减低多胎妊娠率，同田莉峰等[6]报道的结果全都在胚胎冷冻保存方面玻璃化冷冻技术有诸多的优势，但其安全性也值得关注本争辩中使用的Cryotop 载体属于开放式载体， 在操作过程中与液氮直接接触，加大了胚胎被污染的风险同时由于缺少必要的设备冷冻前未进展人工皱缩，可能会影响冻融移植后的结局参 考 文 献:1 Mukaida T，Wada S，Takahashi K，et a．1Vitrification of humanembryos based on the assessment of suitable conditions．Hum Reprod,l998, 13:2874-2879．2 Yokota Y,Sato S,Yokota M,et a1.Successful pregnancy following blastocyst vitrification:case report[J].Human Reproduction,2022,15:1802-18033 Zhu D,Zhang J,Cao S,et al.Vitrification-warmed blastocyst transfer cycles yield higher pregnancy and implantation rates compared with fresh blastocyst transfer cycles:time for a new embryo transfer strategy [J].Fertil Steril,2022,95(5):16914 张顺吉,林戈,卢光琇等.卵裂期胚胎、囊胚的玻璃化冷冻解冻的妊娠结果分析[J].2022,21(8):955-9585 黄国宁,孙海翔等.体外受精-胚胎移植试验室技术.人民卫生出版社6 田莉峰,黄志辉,丁涛等.承受玻璃化冻融囊胚技术临床妊娠7例报道[J].江西医药,2022,46(9):845-847。