人教版教学课件5.1DNA的粗提取与鉴定.ppt

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,专题5DNA和蛋白质技术,课题1.DNA的粗提取与鉴定,1DNA的溶解性：,思考题1：,DNA在氯化钠溶液中的溶解度有什么特点？对此有什么应用？,DNA在氯化钠溶液中的溶解度，随着氯化钠的浓度的变化而改变的当氯化钠的物质的量浓度为014mol/L时，DNA的溶解度最低利用这一原理，可以使溶解在氯化钠溶液中的DNA析出；,思考题2：,利用什么原理来将DNA与蛋白质分离开？,一、实验原理：,2DNA对酶、高温和洗涤剂的耐受性：,蛋白酶能水解,，但对,没有影响大多数蛋白质不能忍受,的高温，而DNA在,以上才会变性能够瓦解细胞膜，但对DNA没有影响,3细胞在,中易吸水而导致细胞膜和细胞核膜的破裂，据此可得到含有核DNA的溶液4DNA的鉴定：,思考题3：,依据什么原理来鉴定DNA,？,三、实验材料：鸡血细胞液,思考题4：,能否选用牛、羊、马血做实验材料？为什么？,不能因为哺乳动物成熟的红细胞中无细胞核，仅靠白细胞和淋巴细胞中的少数DNA，在实验中很难提取到四、实验步骤：,1制备鸡血细胞液：,在鸡血中加入质量浓度为01g/mL的,溶液，离心处理；,2提取鸡血细胞的细胞核物质：,向鸡血细胞液中加入蒸馏水，搅拌、,过滤,；,思考题5：加入蒸馏水的目的是什么？为什么能达到此目的？,加速了鸡血细胞的破裂(细胞膜和核膜的破裂)，从而释放出DNA；蒸馏水对于鸡血细胞来说是一种低渗液体，水分可以大量进入血细胞内，使血细胞胀裂。

3溶解细胞核内的DNA：,加入2mol/L的氯化钠溶液，搅拌，使DNA呈溶解状态；,过滤,4析出含DNA的黏稠物：,加入蒸馏水，用玻璃棒搅拌；,思考题6：此时加入蒸馏水的目的是什么？,使氯化钠溶液浓度接近014mol/L，使DNA最大限度地析出5滤取含DNA的黏稠物：,过滤,；,思考题7：这次过滤与上次过滤的目的一样吗？为什么,？,不一样；这次过滤是为了去除溶于氯化钠溶液的杂质，而上次过滤是为了去除破裂的细胞膜等物质6将DNA的黏稠物再溶解：,加入2mol/L的氯化钠溶液，搅拌，使DNA呈溶解状态；,7过滤含有DNA的氯化钠溶液：,过滤,；,思考题8：这一步骤的目的是什么？,除去含有DNA滤液中的杂质；,思考题9：为什么反复地溶解与析出DNA，能够去除杂质？,用高盐浓度的溶液溶解DNA，能除去在高盐中不能溶解的杂质；,用低盐浓度使DNA析出，能除去溶解在低盐溶液中的杂质因此，通过反复溶解与析出DNA，就能够除去与DNA溶解度不同的多种杂质8提取含杂质较少的DNA：,加入冷却的95%的酒精，搅拌；,思考题10：这一步骤的目的是什么？,去除溶于酒精的杂质；,思考题11：为什么加入的酒精需要冷却的？,可抑制核酸水解酶的活性，防止降解DNA；凝集DNA；减少DNA链的断裂。

9DNA的鉴定：,取两支试管，各加入0015mol/L的氯化钠溶液5mL，一支加入提取的DNA，两支各加入4mL的二苯胺试剂混合均匀后置于沸水中加热思考题12：为什么要设置对照组？实验中能观察到什么现象？,确定二苯胺不与氯化钠发生颜色反应；实验组试管中可看到溶液变蓝色,本实验中有三次过滤,分别有什么作用?,过滤用蒸馏水稀释过的鸡血细胞液,目的:含核物质的滤液,过滤含粘稠物的0.14mol/LNaCl溶液,目的:纱布上的粘稠物,过滤溶解有DNA的2mol/LNaCl溶液,目的:含DNA的滤液,实验中有五次用玻璃棒搅拌?分别有什么作用?,第一次搅拌加蒸馏水的鸡血细胞液,加速细胞的破裂,第二次搅拌加2mol/LNaCl溶液的滤液,使DNA与溶液混合均匀,第三次搅拌加蒸馏水至0.14mol/LNaCl溶液,稀释NaCl溶液,析出DNA,第四次搅拌放入2mol/LNaCl溶液中纱布上的粘稠物,使DNA尽可能多的溶于溶液中,第五次搅拌体积分数为95%的酒精,提取含杂质较少的DNA,。