westernblot结果条带分析.docx

Western Blot 结果条带全面分析1. 空白原因：比较多，如果单纯一张没有任何显色，最可能是一抗加成其他抗体，或者二抗种属加错了，比如兔的加成鼠的解决办法：仔细检查抗体是否加错， 确认转膜没有问题 上面的图片展示的是一点信号都没有， 如果是这样大部分情况是抗体加错了 如果中间出现了细微的条带，可能原因是蛋白上样量太少，一抗浓度过低，显色液失效另外如果转膜出现了问题，比如膜放反了，自然是一个白片2. 高背景原因：封闭不够好，一抗浓度高，洗膜时间和次数不够解决办法：降低一抗浓度，增加洗膜时间和次数3. 非特异性条带原因：一抗非特异性与蛋白结合解决办法：更换一抗4. 条带中出现边缘规则的白圈原因：电转中膜和胶之间存在气泡解决办法：转膜前去掉膜和胶之间的气泡5. 出现黑点和黑斑原因：膜上其他部位与一抗或者二抗非特异性结合解决办法：封闭结束之后要洗6. 条带拖尾原因：蛋白量太大，一抗浓度和时间太长解决办法：根据情况调整蛋白量，同时一抗浓度和时间也可以缩短7. 出现非均一性背景原因：膜可能曾经干过解决办法：在每一步的操作过程中，都需要注意不要让膜干8. 某个条带变形原因： SDSPAGE胶中存在气泡或者某不溶性颗粒解决办法：配胶过程中要小心， 使用无杂质的液体。

另外配胶用的水， SDS，Tris缓冲液要注意不要有杂质9. 条带呈哑铃状原因：配置胶有问题，胶凝固后不均一解决办法：把胶配好，不合格的胶坚决不用10. 最边缘条带弯曲原因：电泳电流不均一解决办法：换用新的电泳槽； 不使用两边的两孔其他问题（ 1）蛋白分子量偏高或者偏低可能是胶的浓度与目的蛋白的浓度不对应 2）蛋白质降解蛋白质降解后很可能会在比原来位置低的地方出现主带，然后会出现一些其他带， 最主要特点是所有的条带比正常的都低， 并且条带模糊不清晰 3）所有条带连成一片没有间隔原因最可能是上样量过多，其次是样品弥散（比如电泳长时间停止样品弥散） 4）整个条带呈 “ ︶ ” 状：凝胶冷却不均一，电泳槽老化 5）整个条带呈“ ︵ ”： 凝胶左右两头没有凝固好（ 6）溴酚蓝拖尾：样品溶解不好 7）纵向的纹理：上样样品中存在不溶性颗粒（ 8）溴酚蓝很粗：浓缩胶浓缩效果不好，可能是浓缩胶太短，或者是浓缩胶配错 9）在分离胶中跑不动： Tris-HCl PH 值不对，或者忘记加 SDS。