常用微生物培养基配方大全.doc

常用培养基配方目 录：01 糖发酵管02 ONPG 培养基03 西蒙氏柠檬酸盐培养基04 缓冲葡萄糖蛋白胨水(MR 和 VP 试验用)05 克氏柠檬酸盐培养基06 丙二酸钠培养基07 葡葡糖铵培养基08 Hugh-Leifson 培养基(O/F 试验用)09 马尿酸钠培养基10 营养明胶11 苯丙氨酸培养基12 氨基酸脱羧酶试验培养基13 蛋白胨水(靛基质试验用)14 硫酸亚铁琼脂(硫化氢试验用)15 尿素琼脂16 氰化钾(KCN)培养基17 氧化酶试验18 硝酸盐培养基19 细胞色素氧化酶试验20 过氧化氢酶试验21 过氧化物酶试验22 磷酸盐缓冲液23 明胶磷酸盐缓冲液24 乳酸-苯酚溶液25 肉浸液肉汤26 肉浸液琼脂27 牛肉(或牛心) 消化汤28 血消化汤29 豆粉琼脂30 血琼脂31 营养琼脂32 营养肉汤33 乳糖胆盐发酵管34 乳糖发酵管35 EC 肉汤36 缓冲蛋白胨水(BP)37 氯化镁孔雀绿增菌液(MM) 38 四硫磺酸钠煌绿增菌液(TTB) 39 四硫磺酸钠煌绿增菌液(换用方法 ) 40 亚硒酸盐胱氨酸增菌液(SC)41 GN 增菌液42 肠道菌增菌肉汤43 亚硫酸铋琼脂(BS)44 DHL 琼脂45 HE 琼脂46 SS 琼脂47 WS 琼脂48 麦康凯琼脂49 伊红美蓝琼脂(EMB) 50 三糖铁琼脂(TSI) 51 三糖铁琼脂(换用方法) 52 克氏双糖铁琼脂(KI) 53 克氏双糖铁琼脂(换用方法) 54 葡萄糖半固体发酵管55 5%乳糖发酵管56 CAYE 培养基57 Honda 氏产毒肉汤58 Elek 氏培养基(毒素测定用)59 氯化镁孔雀绿羧苄青霉素培养基60 胰蛋白胨水61 Rustigian 氏尿素培养液62 氯化钠结晶紫增菌液63 氯化钠蔗糖琼脂64 嗜盐菌选择性琼脂65 3.5%氯化钠三糖铁琼脂66 氯化钠血琼脂67 3.5%氯化钠生化试验培养基68 改良磷酸盐缓冲液(小肠结肠炎耶尔森氏菌专用 ) 69 CIN-1 培养基70 嗜盐性试验培养基 01 糖发酵管成分:牛肉膏 5g蛋白胨 10g氯化钠 3g磷酸氢二钠(Na2HPO4·12H2O) 2g0.2%滇麝香草酚蓝溶液 12mL蒸馏水 1000mLpH7.4制法:1 葡萄糖发酵管按上述成分配好后,按 0.5%加入葡萄糖,分装于有一个倒置小管的小试管内,121℃高压灭菌 15min.2 其他各种糖发酵管可按上述成分配好后,分装每瓶 100mL,121℃高压灭菌 15min.另将各种糖类分别配好 10%溶液,同时高压灭菌.将 5mL 糖溶液加入于 100mL 培养基内,以无菌操作分装小试管 . 注:蔗糖不纯,加热后会自行水解者,应采用过滤法除菌.试验方法:从琼脂斜面上挑取小量培养物接种,于 36℃±1℃培养,一般观察 2～3d.迟缓反应需观察 14～30d.02 ONPG 培养基成分:邻硝基酚 β-D-半乳糖昔(ONPG) 60mg(O-Nitrophenyl-β-D-galactopyranoside)0.01mol/L 磷酸钠缓冲液(pH7.5) 10mL1%蛋白胨水(PH7.5) 30mL制法:将 ONPG 溶于缓冲液内,加入蛋白胨水,以过滤法除菌,分装于 10mm×75mm 试管,每管 0.5mL,用橡皮塞塞紧.试验方法:自琼脂斜面上挑取培养物 1 满环接种,于 36±1℃培养 1～3h 和 24h 观察结果.如果 β-半乳糖苷酶产生,则于 1～3h 变黄色,如无此酶则 24h 不变色.03 西蒙氏柠檬酸盐培养基成分:氯化钠 5g 硫酸镁(MgSO4·7H2O) 0.2g磷酸二氢铵 1g磷酸氢二钾 1g柠檬酸钠 5g琼脂 20g蒸馏水 1000mL0.2%溴麝香草酚蓝溶液 40mLpH6.8制法:先将盐类溶解于水内,校正 pH,再加琼脂,加热溶化.然后加入指示剂,混合均匀后分装试管,121℃高压灭菌 15min.放成斜面.试验方法:挑取少量琼脂培养物接种,于 36±1℃培养 4d,每天观察结果.阳性者斜面上有菌落生长,培养基从绿色转为蓝色. 04 缓冲葡萄糖蛋白胨水(MR 和 VP 试验用)成分:磷酸氢二钾 5g多胨 7g葡萄糖 5g蒸馏水 1000mLpH7.0制法:溶化后校正 pH,分装试管,每管 1mL,121℃高压灭菌 15min.甲基红(MR)试验:自琼脂斜面挑取少量培养物接种本培养基中,于 36±1℃培养 2～5d,哈夫尼亚菌则应在 22～25℃培养.滴加甲基红试剂一滴,立即观察结果.鲜红色为阳性,黄色为阴性.甲基红试剂配法:10mg 甲基红溶于 30mL95%乙醇中 ,然后加入 20mL 蒸馏水.V-P 试验:用琼脂培养物接种本培养基中,于 36±1℃培养 2～4d.哈夫尼亚菌则应在 22～25℃培养.加入 6%α-萘酚-乙醇溶液 0.5mL 和 40%氢氧化钾溶液 0.2mL,充分振摇试管,观察结果.阳性反应立刻或于数分钟内出现红色,如为阴性,应放在 36±1℃下培养 4h 再进行观察.05 克氏柠檬酸盐培养基成分:柠檬酸钠 3g葡萄糖 0.2g酵母浸膏 0.5g单盐酸半胱氨酸 0.1g磷酸二氢钾 1g氯化钠 5g0.2%酚红溶液 6mL琼脂 15g蒸馏水 1000mL制法:加热溶解,分装试管,121℃高压灭菌 15min.放成斜面.试验方法:用琼脂培养物接种整个斜面,在 36±1℃培养 7d,每天观察结果.阳性者培养基变为红色.06 丙二酸钠培养基成分:酵母浸膏 1g硫酸铵 2g磷酸氢二钾 0.6g磷酸二氢钾 0.4g氯化钠 2g丙二酸钠 3g0.2%溴麝香草酚蓝溶液 12mL蒸馏水 1000mLpH6.8制法:先将酵母浸膏和盐类溶解于水,校正 pH 后再加入指示剂,分装试管,121℃高压灭菌 15min. 试验方法:用新鲜的琼脂培养物接种,于 36±1℃培养 48h,观察结果.阳性者由绿色变为蓝色.07 葡葡糖铵培养基成分:氯化钠 5g硫酸镁(MgSO4·7H2O) 0.2g磷酸二氢铵 1g磷酸氢二钾 1g葡萄糖 2g琼脂 20g蒸馏水 1000mL0.2%溴麝香草酚蓝溶液 40mLpH6.8制法:先将盐类和糖溶解于水内,校正 pH,再加琼脂,加热溶化,然后加入指示剂,混合均匀后分装试管,121℃高压灭菌 15min,放成斜面.试验方法:用接种针轻轻触及培养物的表面,在盐水管内做成极稀的悬液,肉眼观察不见混浊,以每一接种环内含菌数在 20～100 之间为宜.将接种环灭菌后挑取菌液接种,同时再以同法接种普通斜面一支作为对照.于 36±1℃培养 24h.阳性者葡萄糖铵斜面上有正常大小的菌落生长;阴性者不生长,但在对照培养基上生长良好.如在葡萄糖铵斜面生长极微小的菌落可视为阴性结果.注:容器使用前应用清洁液浸泡.再用清水,蒸馏水冲洗干净,并用新棉花做成棉塞,干热灭菌后使用.如果操作时不注意,有杂质污染时,易造成假阳性的结果.08 Hugh-Leifson 培养基(O/F 试验用)成分:蛋白胨 2g氯化钠 5g磷酸氢二钾 0.3g琼脂 4g葡萄糖 10g0.2%溴麝香草酚蓝溶液 12mL蒸馏水 1000mLpH7.2制法:将蛋白胨和盐类加水溶解后,校正 pH 至 7.2.加入葡萄糖,琼脂煮沸,溶化琼脂,然后加入指示剂.混匀后,分装试管,121℃高压灭菌 15min,直立凝固备用.试验方法:从斜面上挑取小量培养物作穿刺接种,同时接种两支培养基,其中一支于接种后滴加溶化的 1%琼脂液于表面,高度约 1cm,于 36±1℃ 培养.09 马尿酸钠培养基成分:马尿酸钠 1g肉浸液 100mL制法:将马尿酸钠溶解于肉浸液内,分装于小试管内,并于管壁画一横线.以标志管内液面高度,高压灭菌 121℃20min.试剂:三氯化铁(FeCl3·6H2O)12g,溶于 2%盐酸溶液 100mL 中即成.试验方法:用纯培养物接种,于 42℃培养 48h,观察培养液是否到达试管壁上记号处,如不足时,用蒸馏水补足至原量.经离心沉淀,吸取上清液 0.8mL,加入三氯化铁试剂 0.2mL,立即混合均匀,经 10～15min,观察结果.结果:出现恒久之沉淀物为阳性.10 营养明胶成分:蛋白胨 5g牛肉膏 3g明胶 120g蒸馏水 1000mLpH6.8～7.0制法:加热溶解,校正至 pH7.4～7.6,分装小管,121℃高压灭菌 10min,取出后迅速冷却,使其凝固.复查最终 pH应为 6.8～7.0.试验方法:用琼脂培养物穿刺接种,放在 22～25℃培养,每天观察结果,记录液化时间.或放在 36 士 1℃培养,每天取出,放冰箱内 30min 后再观察结果. 11 苯丙氨酸培养基成分:酵母浸膏 3gDI-苯丙氨酸(或 L-苯丙氨酸 1g) 2g磷酸氢二钠 1g氯化钠 5g琼脂 12g蒸馏水 1000mL制法:加热溶解后分装试管,121℃高压灭菌 15min,使成斜面.试验方法:自琼脂斜面上挑取大量培养物,移种于苯丙氨酸琼脂,在 36±1℃培养 4h 或 18～24h.滴加 10%三氯化铁溶液 2～3 滴,自斜面培养物上流下,苯丙氨酸脱氨酶阳性者呈深绿色.12 氨基酸脱羧酶试验培养基成分:蛋白胨 5g酵母浸膏 3g葡萄糖 1g蒸馏水 1000mL1.6%滇甲酚紫- 乙醇溶液 1mLL-氨基酸或 DL-氨基酸 0.5 或 1g/100mLpH6.8制法:除氨基酸以外的成分加热溶解后,分装每瓶 100mL,分别加入各种氨基酸:赖氨酸,精氨酸和鸟氨酸.L- 氨基酸按 0.5%加入,DL-氨基酸按 1%加入.再行校正 pH 至 6.8.对照培养基不加氨基酸.分装于灭菌的小试管内,每管 0.5mL,上面滴加一层液体石蜡,115℃高压灭菌 10min.试验方法:从琼脂斜面上挑取培养物接种,于 36±1℃培养 18～24h,观察结果.氨基酸脱羧酶阳性者由于产碱,培养基应呈紫色.阴性者无碱性产物,但因葡萄糖产酸而使培养基变为黄色.对照管应为黄色. 13 蛋白胨水(靛基质试验用)成分:蛋白胨(或胰蛋白胨) 20g氯化钠 5g蒸馏水 1000mLpH7.4制法:按上述成分配制,分装小试管,121℃高压灭菌 15min.靛基质试剂柯凡克试剂:将 5g 对二甲氨基苯甲醛溶解于 75mL 戊醇中.然后缓慢加入浓盐酸 25mL.欧-波试剂:将 1g 对二甲氨基苯甲醛溶解于 95mL95%乙醇内.然后缓慢加入浓盐酸 20mL.试验方法:挑取小量培养物接种,在 36±1℃培养 1～2d,必要时可培养 4～5d.加入柯凡克试剂约 0.5mL,轻摇试管,阳性者于试剂层呈深红色;或加入欧-波试剂约 0.5mL,沿管壁流下,覆盖于培养液表面,阳性者于液面接触处呈玫瑰红色.注:蛋白胨中应含有丰富的色氨酸.每批蛋白胨买来后,应先用已知菌种鉴定后方可使用. 14 硫酸亚铁琼脂(硫化氢试验用)成分:牛肉膏 3g酵母浸膏 3g蛋白胨 10g硫酸亚铁 0.2g硫代硫酸钠 0.3g氯化钠 5g琼脂 12g蒸馏水 1000mLpH7.4制法:加热溶解,校正 pH,分装试管,115℃高压灭菌 15min,取出直立候其凝固.试验方法:挑取琼脂培养物,沿管壁穿刺,于 36±1℃培养 1～2d,观察结果.产硫化氢者使培养基变为黑色.注:肠杆菌科细菌测定硫化氢的产生,应采用三糖铁琼脂或本培养基. 15 尿素琼脂成分:蛋白胨 1g氯化钠 5g葡萄糖 1g磷酸二氢钾 2g0.4%酚红溶液 3mL琼脂 20g蒸馏水 1000mL20%尿素溶液 100mLpH7.2±0.1制法:将除尿素和琼脂以外的成分配好,并校正 pH,加入琼脂,加热溶化并分装烧瓶.121℃高压灭菌 15min.冷至 50～55℃,加入经除菌过滤的尿素溶液.尿素的最终浓度为 2%,最终 pH 应为 7.2±0.1.分装于灭菌试管内,放成斜面备用.试验方法:挑取琼脂培养物接种,在 36±1℃培养 24h,观察结果.尿素酶阳性者由于产碱而使培养基变为红色.16 氰化钾(KCN)培。