实验三 蒽酮比色定糖法.docx

实验三 蒽酮比色定糖法1．实验目的： 1.学习分光光度法的基本原理 2.学习对蔬菜和食品中糖含量进行测定的方法 二．实验原理 1.分光光度法基本原理： 溶液中的物质在光的照射激发下，产生对光的吸收效应，不同的物质具有各自选择性的吸收光谱，因此，当某单色光通过溶液时，能量会被吸收而减弱，光能量减弱的程度和物质浓度有一定比例关系，即符合于比色原理——比尔定律 2.朗伯-比尔定律 A=lg(1/T)=Kbc A：为吸光度,T：为透射比,是透射光强度比上入射光强度 c：为吸光物质的浓度 b：为吸收层厚度 K：比例常数 3.物理意义 当一束平行单色光垂直通过某一均匀非散射的吸光物质时,起其吸光度 A 与吸光物质的浓度 c 及吸收层厚度 b 成正比 4.蒽酮比色法 蒽铜比色法是一个快速而简便的定糖方法蒽酮可以和游离的己糖或多糖中的己糖基，戊醛糖及己糖醛酸反应，反应后溶液呈蓝绿色，在 620nm 处有最大吸收 蒽酮可与其他一些糖类发生反应，但显现的颜色不同当样品中存有含较多色氨酸的蛋白质时，反应不稳定，呈现红色对于特定的糖类，反应较稳定 本法多用于测定糖原含量，亦可用于测定葡萄糖含量 三．实验试剂 （1）蒽酮试剂：取 0.2g 蒽酮溶于 100mL 80%(V/V)硫酸中，当日配制使用； （2）标准葡萄糖 溶液(0.1mg/mL)：(可滴加几滴甲苯作防腐剂)； （3）糖样品溶液。

四．实验步骤 1.制作标准曲线：取干试管 6 支，依次加入标准糖溶液 0，0.2，0.4，0.6,0.8，1.0 ml,并依次用蒸馏水补足体积到 1mL，各管均加入蒽酮试剂 4mL，沸水浴准确煮沸 10min，室温放置 10min，用 1 号试管溶液调零，比色测定 A620用标准糖溶液浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，制作标准曲线 2.样品含糖量测定：无蛋白糖溶液样品溶液稀释 100 倍，吸取 1mL 置试管中，再加入 4mL 蒽酮试剂，沸水浴中煮沸 10 分钟，取出后自来水冷却后比色，其他条件与做标准曲线相同，测得的吸光度值由标准曲线查算出样品液的糖含量（mg/ml） 5、实验结果1.制作标准曲线2.计算样品中糖浓度管号 1# 2# 3# 4# 5# 6# 7#标准葡萄糖溶液(ml)0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0蒸馏水(ml) 1.0 0.8 0.6 0.4 0.2 00样品液(ml) ／ ／ ／ ／ ／ ／ 1.0置冰水浴中冷却 5min蒽酮试剂(ml) 4.0 4.0 4.0 4.0 4.0 4.0 4.0沸水浴中准确加热 10min，取出，用自来水冷却，室温放置 10minA620nm糖溶液浓度(mg/ml)0 0.02 0.04 0.06 0.08 0.10 待测六、思考题 H2SO4在实验中起什么作用？。